(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德067000)

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG1)是從垂體瘤組織中分離出的原癌基因，研究證明其高表達(dá)在促進(jìn)細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化以及體內(nèi)腫瘤形成方面具有重要作用。2010年5月～2011年12月，我們觀察了喉鱗癌組織中的PTTG1蛋白及其mRNA的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 喉鱗癌組織以及癌旁組織(距離腫瘤切緣至少＞0.5 cm)取自手術(shù)治療的62例原發(fā)喉鱗癌患者，術(shù)前均未接受放、化療。標(biāo)本獲得后分為2份，一份立即凍存于－80℃液氮中，另一份標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋、4μm厚度連續(xù)切片。所有標(biāo)本均經(jīng)過病理學(xué)檢查確診。

1.2 方法

1.2.1 PTTG1蛋白檢測(cè)方法 取石蠟切片，采用免疫組化SP法檢測(cè)，按說明書操作。以PBS代替一抗作為陽(yáng)性對(duì)照，以已知喉癌陽(yáng)性組織切片為陽(yáng)性對(duì)照。PTTG1陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒。在染色均勻的腫瘤區(qū)域選取5個(gè)高倍鏡視野(×200)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分;不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。二者得分相加＞1分判為陽(yáng)性表達(dá)。

1.2.2 PTTG1 mRNA檢測(cè)方法 采用RT-PCR法，按說明書操作。Trizol法抽提總RNA，氯仿及異丙醇純化，加無 Rnase水20μL溶解，測(cè) OD值定總RNA量。將反應(yīng)產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上電泳，經(jīng)EB染色后，在紫外熒光數(shù)字成像儀下照像，并進(jìn)行光密度半定量分析。以每例PTTG1與相應(yīng)β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物條帶累積光密度(IOD)的比值作為PTTG1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較用χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 喉鱗癌及其癌旁組織中PTTG1蛋白及mRNA表達(dá)情況 在62例喉鱗癌組織中，PTTG1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率及其mRNA表達(dá)量分別為67.74%、0.74±0.134，顯著高于癌旁組織中的 23.08%、0.47 ±0.10(P 均 ＜0.01)。

2.2 PTTG1蛋白表達(dá)與喉鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 PTTG1蛋白表達(dá)與喉鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度有關(guān)(均P＜0.05)，與喉鱗癌的腫瘤大小、臨床分型、年齡及性別無關(guān)(均P＞0.05)。見表1。

3 討論

PTTG作為一種新近發(fā)現(xiàn)的原癌基因，在大多數(shù)正常組織中表現(xiàn)為弱表達(dá)甚至不表達(dá)，在多種惡性腫瘤細(xì)胞［1～6］中高表達(dá)。其高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮了重要作用。PTTG(hPTTG)家族包括 PTTG1、PTTG2和 PTTG3。已有研究發(fā)現(xiàn)，PTTG2和PTTG3在細(xì)胞增殖活性高的正常組織中有表達(dá)，但在腫瘤中主要為PTTG1表達(dá)。PTTG1基因位于5q33，含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子［7］。其DNA序列由787 bp組成，含有609 bp的完整閱讀框架，編碼一個(gè)含有202個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子質(zhì)量約為22 kD。PTTG1蛋白在多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞系中高度表達(dá)，與大多數(shù)腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。其促進(jìn)腫瘤發(fā)生的機(jī)制可能有:①PTTG1通過激活轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的C-myc原癌基因，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用［8］;②PTTG1在腫瘤組織中的高表達(dá)，可促進(jìn)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)轉(zhuǎn)錄和分泌，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)腫瘤中出現(xiàn)有絲分裂，調(diào)控血管生成及激素分泌;③PTTG基因調(diào)控區(qū)的突變引起PTTG1調(diào)控失常，從而導(dǎo)致其高表達(dá)，引起腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化;④PTTG1通過反式激活作用激活原癌基因、生長(zhǎng)因子等，間接致癌［9］;⑤PTTG1蛋白抑制姊妹染色體單體分離，破壞細(xì)胞分裂導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定，非整倍體形成，并賦予其成瘤活性，進(jìn)一步發(fā)展成為腫瘤［10］。因其表達(dá)具有腫瘤特異性，因此被認(rèn)為是一種極具潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志，有可能成為腫瘤治療的靶點(diǎn)。

表1 PTTG1蛋白表達(dá)與喉鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

腫瘤的發(fā)生取決于腫瘤細(xì)胞凋亡和增長(zhǎng)的動(dòng)態(tài)平衡是否被破壞，細(xì)胞的過度增殖、異常分化和正常凋亡減少在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。而喉癌的起源目前認(rèn)為是多因素相互作用的結(jié)果，近幾年發(fā)現(xiàn)和明確了由于原癌基因調(diào)控引起細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖異常，是喉癌發(fā)生的重要機(jī)制之一。原癌基因PTTG的高表達(dá)在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、分化中有重要作用，PTTG作為一種原癌基因，已有研究提示其過度表達(dá)可能引起細(xì)胞周期調(diào)控紊亂致細(xì)胞增殖異常及細(xì)胞凋亡異常。本研究結(jié)果顯示，喉鱗癌組織中PTTG1蛋白及其mRNA高表達(dá)，且與腫瘤的臨分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)。因此，PTTG1對(duì)喉癌發(fā)生收展具有一定作用，但具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

［1］Wiericnkx A，Auger C，Devauchelle P，etal.A diagnosticmarker set for invasion，proliferation，and aggressiveness of prolactin pituitary tumors［J］.Eendocr Relat Cancer，2007，14(3):887-900.

［2］Thompson AD 3rd，Kalar SS.Insulin and IGF-1 regulate the expression of the pituitary tumor transforming gene(PTTG)in breast tumor cells［J］.FEBS Lett，2005，579(14):3195-3200.

［3］Rehfeld N，Geddert H，Atamna A，et al.The influence of the pituitary tumor transforming gene-1(PTTG-1)on survival of patients with small cell lung cancer and non-small cell lung cancer［J］.J Carcinog，2006，20(5):4.

［4］Genka IN，Homma J，Sano M，etal.Increased expression of pituitary tumor transforming gene(PTTG)-1 is correlated with poor prognosis in gliom a patients［J］.Oncol Rep，2006，15(6):1569-1574.

［5］Solbach C，Roller M，Eckerdt F，et al.Pituitary tumor transforming gene expression is a prognosticmarker for tumor recurrence in squamous cell carcinoma of the head and neck［J］.BMC Cancer，2006，9(6):242.

［6］Kim DS，F(xiàn)ranklyn JA，Boelaert K，etal.Pituitary tumor transforming gene(PTTG)stimulates thyroid cell proliferation via a vascrlar endothelial growth factor/kinase insert domain receptor/inhibitor of DNA binding-3 autocrine pathway［J］.JClin Endocrinol Metab，2006，91(11):4603-4611.

［7］Chien W，Pei L.A novel binding factor facilitates nuclear translocation and transcriptional activation function of the pituitary tumortransforming gene product［J］.J Biol Chem，2000，275(25):19422-19427.

［8］Yu R，Heaney AP，Lu W，et al.Pituitary tunor transforming gene causes aneuploidy p53-independent apoptosis［J］.J Biol Chem，2000，275(47):36502-36505.

［9］Chen L，Puri R，Lefkowitz EJ，et al.Identificateion of the human pituitary tunor transforming gene(hPTTG)family:molecular structure，expression，and chromosomal localization［J］.Gene，2000，248(1-2):41-50.

［10］Pei L.Activation ofmitogen-activated protein kinase cascade regulates pituitary tunor transforming gene trsnsactivation function［J］.JBiol Chem，2000，275(40):31191-31198.