唐小荷，陳震翼

(湛江市第二人民醫(yī)院，廣東 湛江 524003)

山楂(Crataegus pinnatifida)，別名紅果，薔薇科山楂屬植物，廣泛分布于我國大多數(shù)省份。山楂果肉、種子及葉均具有很高的藥用價值和保健作用，是最早被列入食藥兼用的植物之一，具有消食化滯、行氣散瘀的功效［1］。對于山楂果肉和葉的化學成分及其對心血管保護作用已有較多研究［2～4］，但對其種子的化學成分及心血管相關(guān)的藥理作用鮮有報道。本實驗通過研究山楂籽黃酮提取物(Hawthorn seed flavonoids，HSF)抗化學物質(zhì)誘導的心率失常作用，可為進一步開發(fā)山楂抗心率失常有效部位群提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實驗動物 KM小鼠(雌雄各半)，40只，體重28～32g;SD大鼠(雌雄各半)，體重260～320g，32只，均由廣東醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物合格證號:SYXK(粵)2008－0007。

1.1.2 試劑 山楂籽總黃酮提取物(干山楂籽500g，8倍量乙醇85℃水浴浸提3次，每次2 h，回收乙醇至無醇味，以雙蒸水配成含生藥濃度為2g·mL－1的母液備用，以蘆丁為對照，其總黃酮含量不低于10mg·mL－1)。三氯甲烷(AR，廣東光華);烏頭堿(中國藥品生物制品檢定所);維拉帕米(山東魯能制藥);水合氯醛(上海國藥);Medlab生物信號采集處理系統(tǒng)(南京美易科技公司)。

1.2 方法

1.2.1 三氯甲烷誘發(fā)的小鼠心律失常模型建立 取40只KM小鼠，雌雄各半，將小鼠隨機分為4組(n=10)，分別給予以下處理:①模型組:給予生理鹽水;②陽性對照組:給予10mg·kg－1維拉帕米;③高、低劑量組:分別給予 50、100mg·kg－1山楂籽黃酮提取物。以上各組均灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥5 d。于末次給藥30min后，將小鼠放入浸有4mL三氯甲烷的棉球500mL燒杯內(nèi)，密封，小鼠呼吸停止5 s后，立即取出，采用Medlab系統(tǒng)的標準肢體Ⅱ?qū)?lián)，記錄心電圖曲線并觀察小鼠的室顫(ventricular fibrillation，VF)發(fā)生率。

1.2.2 烏頭堿誘發(fā)的大鼠心律失常模型 取SD大鼠32只，隨機分為4組(n=8)，分別給予以下處理:①模型組:給予生理鹽水;②陽性對照組:給予維拉帕米10mg·kg－1;③高、低劑量組:分別給予50、100mg·kg－1山楂籽黃酮提取物。以上各組均灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥5 d。于末次給藥30min后，水合氯醛2.5mL·kg－1腹腔注射麻醉，仰臥位固定，從舌下靜脈以2 μg·min－1恒速輸入新鮮配制的烏頭堿溶液至室性早搏出現(xiàn)，用Medlab系統(tǒng)的標準肢體Ⅱ?qū)?lián)記錄心電圖曲線，觀察室性早搏(ventricular premature beats，VPB)、室性心動過速(ventricular tachycardia，VT)的發(fā)生次數(shù)，以及心律失常持續(xù)時間。

2 結(jié)果

2.1 山楂籽黃酮提取物對抗三氯甲烷誘導的小鼠心律失常的作用 與模型組相比，維拉帕米組和山楂籽黃酮提取物組均能降低小鼠的室顫發(fā)生率，且山楂籽黃酮提取物對小鼠室顫發(fā)生率的抑制呈劑量依賴性，結(jié)果見表1。

表1 山楂籽黃酮提取物對三氯甲烷誘發(fā)小鼠室顫的影響(n=10)

2.2 山楂籽黃酮提取物對烏頭堿誘導的大鼠心律失常的作用 與模型組相比，維拉帕米組和山楂籽黃酮提取物各組均可明顯增加引起烏頭堿誘發(fā)心律失常的消耗量。維拉帕米可明顯降低烏頭堿誘發(fā)的VPB、VT發(fā)生次數(shù)及心率發(fā)生的持續(xù)時間，但山楂籽黃酮提取物各組對這幾項指標均無明顯改善，結(jié)果見表2。

表2 山楂籽黃酮提取物對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響(n=8)

3 討論

心律失常是臨床最常見的一種心血管疾病，主要由器質(zhì)性病變導致的心肌缺血再灌注損傷及藥物中毒引起。以往的研究已發(fā)現(xiàn)山楂黃酮提取物能減輕乳鼠缺血缺氧損傷后心肌細胞心律失常的程度，延緩心肌停搏時間，且能減輕心肌損傷的程度［5］，但能否對抗藥源性引起的心率失常尚無相關(guān)報道。

目前的研究認為，三氯甲烷誘發(fā)的小鼠室顫可能與三氯甲烷刺激植物性神經(jīng)釋放神經(jīng)遞質(zhì)或腎上腺髓質(zhì)釋放大量兒茶酚胺、繼而激動腎上腺素β受體有關(guān)［6］。β－受體激動后可通過促進受體依賴性的胞內(nèi)Ca2+大量釋放，導致胞內(nèi)Ca2+貯存庫耗竭，后者觸發(fā)細胞外Ca2+內(nèi)流，最終使胞內(nèi)鈣超載而誘發(fā)心律失常［7］。我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，山楂籽黃酮提取物能明顯降低三氯甲烷誘導的小鼠心率失常發(fā)生率，提示了山楂籽黃酮提取物抗心律失常作用可能與抑制細胞膜上的Ca2+通道有關(guān)。

烏頭堿是川烏、附子等中藥中的有毒成分，每年都有不少因誤飲含烏頭堿藥酒的中毒事件發(fā)生，由烏頭堿誘發(fā)的心率失常則是致死的主要原因之一。烏頭堿引發(fā)心律失常主要以激活心肌細胞的快Na+通道，使心肌快Na+通道開放，加速心肌細胞Na+內(nèi)流，促細胞膜發(fā)生去極化，提高心房傳導組織和房室束－蒲肯野系統(tǒng)等快反應細胞自律性，加速起搏點自律，誘發(fā)多源性異位節(jié)律點，縮短心肌不應期，導致心律失常［8］?？岫∧芘c通道蛋白質(zhì)相結(jié)合，適度抑制Na+內(nèi)流，減慢傳導速度，延長不應期。本實驗結(jié)果顯示，山楂籽黃酮提取物對降低烏頭堿誘發(fā)的大鼠VPB及VF的發(fā)生次數(shù)均無明顯改善，但在明顯推遲室性早搏發(fā)生時間的同時，增加了誘發(fā)心率失常所需烏頭堿的消耗量。提示了山楂籽黃酮提取物對烏頭堿中毒的心臟有保護作用，意味著有更多的時間搶救患者生命。這表明了山楂籽黃酮提取物具有進一步開發(fā)成抗心腦血管藥物的良好前景。

［1］劉榮華，邵峰，鄧雅瓊，等.山楂化學成分研究進展［J］.中藥材，2008，31(7):1100 －1103.

［2］閔清，白育庭，張志，等.山楂葉總黃酮對大鼠心肌缺血再灌注損傷的心電圖、一氧化氮及丙二醛變化的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2007，12(7):800 －803.

［3］喻斌，李宏軼，張良，等.山楂葉總黃酮對麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血的保護作用［J］.中藥新藥與臨床藥理，2008，19(6):461 －464.

［4］劉春麗，張鳳林.山楂提取物對心肌缺血/再灌注損傷的保護作用［J］.心臟雜志，2006，18(2):121 －122.

［5］葉希韻，張隆，張靜，等.山楂葉總黃酮對乳鼠心肌細胞缺血缺氧損傷的實驗研究［J］.中國現(xiàn)代應用藥學雜志，2005，22(3):202 －204.

［6］Lawson JW.Antiarrhythmic activity of some isoquinoline derivatives determined by a rapid screening procedure in the mouse［J］.J Pharmacol Exp Ther，1968，160(1):22－31.

［7］徐策，葉挺梅，朱立，等.菊米提取液抗實驗性心律失常作用的研究［J］.中國應用生理學雜志，2007，23(4):399－402.

［8］Friese J，Gleitz J，Gutser UT，et al.Aconitum sp.alkaloids:the modulation of voltage dependent N+channels，toxicity and antinociceptive properties［J］.Eur J Pharmacol，1997，337(2 －3):165 －170.