李啟艷，游 嘉，徐麗華

(1.山東省食品藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250101;2.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

銀屑顆粒是治療銀屑病的純中藥制劑，是由土茯苓、菝葜二味中藥組成，具有祛風(fēng)解毒之功效。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，在現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，采用HPLC法測(cè)定了落新婦苷的含量，同時(shí)對(duì)菝葜進(jìn)行TLC薄層鑒別。實(shí)驗(yàn)表明所建立的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好;TLC鑒別方法操作簡(jiǎn)單專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，為該制劑的質(zhì)量控制提供更有效的方法。

1 儀器與試藥

Sartorius CP225D電子天平;Agilent 1200高效液相色譜儀。島津UV－2550紫外分光光度計(jì)。落新婦苷對(duì)照品，煙臺(tái)大學(xué)提供，供含量測(cè)定用;菝葜對(duì)照藥材，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):121538－200501。銀屑顆粒(市售);甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 菝葜的TLC薄層鑒別［1］

取本品2g，研細(xì)，加乙醇10mL，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取菝葜對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取缺菝葜藥材的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法，制得陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(3∶8∶3∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖1。

圖1 菝葜的薄層色譜圖

3 含量測(cè)定［2］

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Thermo C18色譜柱(4.6mm ×250mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.1%磷酸(25∶75)，流速1mL·min－1;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng):291 nm。理論板數(shù)按落新婦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。采用此色譜條件，供試品及對(duì)照品色譜分離度良好，見圖2。

圖2 含量測(cè)定色譜圖(A落新婦苷對(duì)照品、B樣品)

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取落新婦苷對(duì)照品9.47mg，加60%甲醇溶解并稀釋至100mL，搖勻，作為對(duì)照品溶液(濃度為 0.0947mg·mL－1)。

3.2.2 供試品溶液 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物(山東魯泰環(huán)中制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):100401)，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入60%甲醇25mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.3 方法與結(jié)果

3.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取3.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液2、4、8、12、16、20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。以落新婦苷對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=2276.4440 X+21.1195，相關(guān)系數(shù)r=1.0000。表明落新婦苷進(jìn)樣量在0.1894～1.8940 μg之間與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

3.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取3.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果落新婦苷的RSD為0.56%，表明儀器精密度良好。

3.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取上述供試品溶液10μL，每隔2 h進(jìn)樣一次，測(cè)定落新婦苷的峰面積積分值，共考察10 h，以觀察樣品溶液在檢測(cè)過(guò)程中待測(cè)成分的穩(wěn)定性，結(jié)果RSD為0.78%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測(cè)定需要。

3.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.0g，共取5份，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法，分別制得供試品溶液。按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算落新婦苷的含量，結(jié)果平均含量為13.5mg/袋，RSD為1.36%，表明本品含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

3.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備:精密稱取落新婦苷對(duì)照品12.25mg，置100mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(濃度為0.1225mg·mL－1)。

取已知含量的裝量差異項(xiàng)下本品內(nèi)容物(平均裝量:6.0186 g，落新婦苷含量為 13.5mg/袋)，研細(xì)，取約 0.5 g，精密稱定，共取5份，置圓底燒瓶中，精密加入落新婦苷對(duì)照品儲(chǔ)備液(濃度為0.12255mg·mL－1)10mL，再精密加入60%甲醇15mL，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液的制備方法，制得供試品溶液。照上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，本方法的回收率良好。

表1 落新婦苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.3.6 含量測(cè)定 取3批銀屑顆粒樣品，按3.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液后測(cè)定含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

4 結(jié)論與討論

4.1 提取溶劑的考察 考察了60%甲醇、50%乙醇、乙醇三種溶劑，結(jié)果乙醇回流提取含量最低，為8.5mg/袋;60%甲醇與50%乙醇提取含量接近，分別為14.1mg/袋和13.8mg/袋。但50%乙醇與流動(dòng)相組成相差較大，色譜峰峰型較差，故確定60%甲醇為提取溶劑。

4.2 提取方法的考察 考察了超聲提取和回流提取兩種方法，并考查了提取時(shí)間對(duì)含量的影響，結(jié)果加熱回流提取效果優(yōu)于超聲提取。且回流提取1 h和1.5 h含量結(jié)果一致，表明回流提取1 h落新婦苷已基本提取完全，因此確定提取方法為:樣品加熱回流提取1 h。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:290.

［2］石俊英.中藥鑒定學(xué)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2006.