孟贊

【摘 要】目的：以簡單、高效的方法建立少突膠質細胞缺血缺氧模型。方法： 少突膠質細胞培養(yǎng)至70～80%融合，將24孔培養(yǎng)板每6孔劃分為一組，分為：（1）對照組：細胞培養(yǎng)液換以常規(guī)培養(yǎng)液；（2）缺糖組：細胞培養(yǎng)液換以低糖培養(yǎng)液（3）缺氧組：細胞培養(yǎng)換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的常規(guī)培養(yǎng)液；（4）缺糖缺氧組：細胞培養(yǎng)液換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的低糖培養(yǎng)液。顯微鏡下觀察各組細胞數(shù)量及形態(tài)的改變。Hoechst染色觀察凋亡小體。結果：（1）缺血缺氧組比較于對照組，有大量漂浮的細胞，僅有少量的細胞散在分布于瓶底或玻片上，大量細胞形態(tài)不規(guī)則，而且細胞突起、胞體嚴重回縮。（2）缺血缺氧組比較于對照組細胞量少，且呈小圓形形態(tài)，胞質胞核深染。結論： 以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的低糖培養(yǎng)液可以獲得少突膠質細胞缺血缺氧模型。

【關鍵詞】少突膠質細胞；缺血缺氧損傷模型

隨著社會人口老齡化，神經退行性疾病的發(fā)病率日益增高，不僅使患者的預期壽命和健康預期壽命縮短，而且給家庭和社會帶來了沉重的經濟負擔，而臨床上目前對于這類疾病尚無有效控制病程進展的措施。瑞士研究者發(fā)現(xiàn)神經系統(tǒng)退行性疾病與髓鞘脫失有關，進一步研究證明少突膠質細胞退化導致脫髓鞘，研究表明少突膠質細胞對缺血缺氧損傷較其他膠質細胞敏感。因此，有學者提出少突膠質細胞的缺血缺氧損傷是神經退行性疾病重要原因。體外培養(yǎng)的少突膠質細胞系與其在體特性極其相關，通過體外培養(yǎng)可了解到少突膠質細胞系的存活、增殖、分化以及發(fā)育過程細胞的生物化學變化等。本研究參照相關文獻，成功建立可行的少突膠質細胞缺血缺氧損傷模型，為研究少突膠質細胞的損傷修復及其分子機制奠定基礎。

1.材料和方法

1.1 材料

器材：恒溫培養(yǎng)箱、電冰箱、離心機、顯微鏡、超凈工作臺、吸管、膠頭滴管、離心管、培養(yǎng)瓶、試管架、酒精燈。

試劑：DMEM培養(yǎng)液、血清、胰蛋白酶液，75%乙醇、DMSO、PBS、Na2S2O4。

B104 神經母細胞瘤細胞株為第三軍醫(yī)大學贈送。

1.2 實驗分組及給藥方式

少突膠質細胞培養(yǎng)至70～80%融合，將24孔培養(yǎng)板每6孔劃分為一組，分為：

（1）對照組：細胞換以常規(guī)培養(yǎng)液；

（2）缺糖組：細胞換以低糖培養(yǎng)液；

（3）缺氧組：細胞培養(yǎng)換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的常規(guī)培養(yǎng)液；

（4）缺糖缺氧組：細胞換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的低糖培養(yǎng)液。

1.3 指標測定

（1）顯微鏡下觀察

顯微鏡下觀察各組細胞數(shù)量及形態(tài)的改變。

（2）Hoechst染色

Hoechst染色觀察凋亡小體

2.結果

2.1顯微鏡下觀察各組細胞數(shù)量及形態(tài)的改變

缺血缺氧組比較于對照組，有大量漂浮的細胞，僅有少量的細胞散在分布于瓶底或玻片上，大量細胞形態(tài)不規(guī)則，而且細胞突起、胞體嚴重回縮。

2.2 Hoechst染色顯微鏡下觀察凋亡小體

缺血缺氧組細胞出現(xiàn)凋亡小體。（Fig.2）

隨著神經科學的迅速發(fā)展，離體培養(yǎng)的少突膠質細胞將被越來越廣泛的應用于包括細胞功能，神經發(fā)育，退行性疾病等在內的多領域，多層次的研究。本實驗建立了可行的少突膠質細胞缺血缺氧損傷模型為實驗的順利進行打下基礎。

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