高智席1,吳艷紅,黎司,胡明華,牟青松,曾啟華

摘要：建立了固相萃?。聪喔咝б合嗌V法測定水產(chǎn)品中辛基酚和壬基酚殘留量的檢測方法。樣品經(jīng)三氯乙酸溶液提取，陰離子交換固相萃取柱凈化。色譜柱為Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ ２５０ ｍｍ × ４．６ ｍｍ，檢測波長為２２５ ｎｍ，流動相為甲醇－水（體積比為７５∶２５），流速為０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，進(jìn)樣量為２０ μＬ。辛基酚和壬基酚分別在０．１３～９７．９２ μｇ／ｍＬ（Ｒ２＝０．９９６ １）、０．０２～５０．００ μｇ／ｍＬ（Ｒ２＝０．９９９ ４）濃度范圍內(nèi)與峰面積成良好線性關(guān)系，辛基酚和壬基酚的回收率為８７．４％～９３．７％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為１．３％～３．９％。該方法準(zhǔn)確、快速、靈敏度高，適用于水產(chǎn)品中辛基酚和壬基酚的檢測。

關(guān)鍵詞：辛基酚；壬基酚；水產(chǎn)品；反相高效液相色譜法

中圖分類號：Ｏ６５７．７＋２文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）05－0999-03

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ Ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ ｉｎ Ａｑｕａｔｉｃ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ Ｃｈｉｓｈｕｉｈｅ Ｒｉｖｅｒ

ＧＡＯ Ｚｈｉ－ｘｉ１，ＷＵ Ｙａｎ－ｈｏｎｇ１，ＬＩ Ｓｉ２，ＨＵ Ｍｉｎｇ－ｈｕａ１，ＭＵ Ｑｉｎｇ－ｓｏｎｇ１，ＺＥＮＧ Ｑｉ－ｈｕａ１

（１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｚｕｎｙｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｚｕｎｙｉ ５６３００２， Ｇｕｉｚｈｏｕ， Ｃｈｉｎａ； ２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｒｅｅ Ｇｏｒｇｅｓ Ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｅｃｏ－ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３０， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｇｈｉｃ ｍｅｔｈｏｄ（RP-HPLC） ｗｉｔｈ ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ established ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ ｉｎ ａｑｕａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ， ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ MAX－ＳＰＥ． Ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ ｃｏｌｕｍｎ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ａ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ＣＨ３ＯＨ ａｎｄ Ｈ２Ｏ（７５∶２５，Ｖ／Ｖ）． Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．８ ｍＬ／ｍｉｎ， ＵＶ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｔ ２２５ ｎｍ， and the injection volume was 20 μL． Ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．１３～９７．９２ μｇ／ｍＬ（Ｒ２＝０．９９６ １）、０．０２～５０．００ μｇ／ｍL（Ｒ２＝０．９９９ ４） ｆｏｒ ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ８７．４％ to ９３．７％ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｏｆ １．３％ to ３．９％． Ｆｉｎａｌｌｙ， Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ， ａｎｄ ａｄａｐｔｓ ｔｏ ｔｈｅ detection ｏｆ ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ ｉｎ ａｑｕａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｏｌ； ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ； ａｑｕａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ； ＲＰ－ＨＰＬＣ

辛基酚（Ｏｃｔｙｌｐｈｅｎｏｌ，ＯＰ）和壬基酚（Ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ，ＮＰ）是世界野生動物基金會列出的６７種環(huán)境激素中的２種［１］，廣泛用于合成非離子表面活性劑和抗氧化劑，這類物質(zhì)主要在污水處理過程中以生物降解產(chǎn)物的形式進(jìn)入環(huán)境。眾多體內(nèi)外的生物研究表明，辛基酚和壬基酚作為內(nèi)分泌干擾物質(zhì)會在生物體內(nèi)積累，并通過食物鏈進(jìn)入人體，對人體癌細(xì)胞生長及生殖能力均會產(chǎn)生嚴(yán)重影響，具有雌激素效應(yīng)和慢性毒效應(yīng)［２］，因而已被歐盟列為優(yōu)先危害物質(zhì)。其對人類健康和生態(tài)環(huán)境的危害，已引起世界各國的普遍關(guān)注。

目前，關(guān)于辛基酚和壬基酚的分析方法主要有高效液相色譜法［３，４］、超臨界流體色譜法［５］、膠束電動色譜法［６］、毛細(xì)管電泳法［７］、酶聯(lián)免疫法［８］、氣相色譜－質(zhì)譜法［９－１１］和液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法［１２］等，涉及的主要為生物、環(huán)境、食品、玩具和紙張等樣品。這些研究均表明辛基酚和壬基酚廣泛地存在于各種環(huán)境基質(zhì)中，對人類賴以生存的食品存在著潛在的威脅。相對于環(huán)境樣品，水產(chǎn)品的高脂肪、高蛋白的特點(diǎn)和烷基酚的脂溶性特點(diǎn)決定了其樣品前處理的復(fù)雜性。目前還未見辛基酚和壬基酚在水產(chǎn)品中的污染狀況和分析方法的相關(guān)報道。

本研究采用固相萃?。聪喔咝б合嗌V－二極管陣列檢測技術(shù)建立了水產(chǎn)品中的辛基酚和壬基酚的分析方法，并且對赤水河下游水產(chǎn)品進(jìn)行了分析，取得了滿意的結(jié)果。

１材料與方法

１．１儀器及試劑

ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色譜儀（日本島津公司），配備ＳＰＤＭ－２０Ａ檢測器、ＳＩＬ－２０Ａ自動進(jìn)樣器、ＣＢＭ－２０Ａ系統(tǒng)控制器；氮吹儀（天津奧特賽斯）；電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）；離心機(jī)（上海手術(shù)器械廠）；固相萃取儀（美國ＳＵＰＬＣＯ）；微孔過濾裝置（北京萊伯泰科儀器有限公司）；ＳＹ３２００超聲波清洗器（上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司）；ＤＨＧ－９０７０Ａ型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（寧波江南儀器廠）。

壬基酚（純度９９％，美國Ｃｈｅｍ Ｓｅｒｖｉｃｅ公司）；辛基酚（純度９９％，美國Ｓｉｇｍａ公司）；甲醇（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；氨水（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；混合型陰離子交換固相萃取柱（艾捷爾，６０ ｍｇ，３ ｍＬ）；１％三氯乙酸溶液；２％乙酸鉛溶液；二次蒸餾水。所有溶液使用前均由０．４５ μｍ濾膜過濾。

１．２標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取１５．０ ｍｇ ＮＰ和ＯＰ標(biāo)準(zhǔn)品， 用甲醇溶解并定容至２５ ｍＬ棕色容量瓶中于４ ℃下保存。使用前用甲醇稀釋上述標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

１．３樣品的前處理

１．３．１提取稱取試樣１０．００ ｇ于１００ ｍＬ 聚四氟乙烯離心管中，準(zhǔn)確加入４８ ｍＬ １％三氯乙酸溶液和２ ｍＬ ２％乙酸鉛溶液，高速均質(zhì)器以１１ ０００ ｒ／ｍｉｎ 均質(zhì)３０ ｓ，搖床上振蕩３０ ｍｉｎ，５ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ［１３］。

１．３．２凈化依次用３ ｍＬ 甲醇、３ ｍＬ 水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，準(zhǔn)確吸?。保?ｍＬ 上清液過柱，控制過柱速度在１ ｍＬ／ｍｉｎ 以內(nèi)，再用３ ｍＬ 水、３ ｍＬ 甲醇洗滌混合型陰離子交換固相萃取柱，抽至近干后，用３ ｍＬ ５％氨化甲醇溶液洗脫。收集洗脫液于１０ ｍＬ 離心管中，５０ ℃下氮吹至干。準(zhǔn)確吸?。?ｍＬ ２０％甲醇溶液溶解殘渣，混勻，０．４５ μｍ 濾膜過濾待測［１３］。

１．４色譜條件

色譜柱：Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＶＰ－ＯＤＳ（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ）；流動相：甲醇－水（體積比７５∶２５）；流速：０．８ ｍＬ／ｍｉｎ；柱溫：３５ ℃；進(jìn)樣量：２０ μＬ；ＯＰ和ＮＰ的檢測波長均為２２５ ｎｍ。

２結(jié)果與分析

２．１ＳＰＥ柱的選擇

混合型陰離子交換固相萃取柱是以陰離子交換及反相吸附混合機(jī)理、以水可浸潤型聚合物為基質(zhì)的ＳＰＥ小柱。提供雙重保留模式，即離子交換與疏水保留。本試驗采用混合型陰離子交換固相萃取柱，既可除去樣品中的干擾物質(zhì)，又可有效提取樣品中的目標(biāo)物［１３］。

２．２檢測條件的優(yōu)化

２．２．１波長的選擇利用二極管陣列檢測器掃描可得到最大吸光波長都出現(xiàn)在２２５ ｎｍ處。水產(chǎn)品中各雜質(zhì)在該波長時對ＯＰ和ＮＰ的測定無影響， 且色譜峰型對稱。因此，選擇２２５ ｎｍ作為本方法的最適檢測波長。

２．２．２流動相的選擇分別對甲醇－水、乙腈－水、甲醇－氨水、甲醇－磷酸二氫鉀溶液、乙腈－離子對溶液、乙腈－磷酸緩沖溶液、甲醇－冰乙酸和四氫呋喃－水等流動相系統(tǒng)進(jìn)行了考察。再比較不同配比的甲醇－水體系，發(fā)現(xiàn)甲醇－水體積比為７５∶２５時，柱效最高，保留時間適宜。

２．２．３流速的選擇在波長、流動相等測量條件一定的情況下，分別設(shè)置流速為０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９和１．０ ｍＬ／ｍｉｎ進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)０．８ ｍＬ／ｍｉｎ時峰形好、出峰時間適宜，故選擇流速為０．８ ｍＬ／ｍｉｎ。

２．３線性方程和檢出限

分別配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在選定的色譜條件下進(jìn)行測定，計算出ＯＰ和ＮＰ的線性方程和相關(guān)系數(shù)。ＯＰ和ＮＰ分別在０．１３～９７．９２ μｇ／ｍＬ、０．０２～５０．００ μｇ／ｍL范圍內(nèi)與峰面積有良好的相關(guān)性，回歸方程為ｙ＝５ ０１０．８００ｘ－５１．１７１、ｙ＝５ １３９．０００ｘ－８４．１９９，相關(guān)系數(shù)分別為０．９９６ １和０．９９９ ４，能夠滿足定量分析的需要。以信噪比為３計算檢出限，水產(chǎn)品中ＮＰ和ＯＰ的檢出限均為０．４ μｇ／ｋｇ。ＯＰ和ＮＰ標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖１。

２．４方法的回收率和精密度

采用經(jīng)測定不含有ＮＰ和ＯＰ的水產(chǎn)品空白樣品，分別進(jìn)行添加回收率和精密度試驗，樣品中添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本方法進(jìn)行試驗（水產(chǎn)品回收ＮＰ和ＯＰ色譜圖見圖２）。在低、中、高的３個添加水平范圍內(nèi)的平均回收率（每個添加濃度平行測定６次），草魚樣品回收率為８８．７％～９３．７％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為１．３％～３．７％；對蝦樣品的回收率為８７．４％～９１．３％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為２．３％～３．６％；螃蟹樣品的回收率為８８．９％～９３．７％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為２．２％～３．９％。回收率和精密度結(jié)果見表１。

３結(jié)論

本試驗建立了固相萃?。聪喔咝б合嗌V法測定水產(chǎn)品中辛基酚和壬基酚殘留的分析方法。研究結(jié)果表明，該方法檢出限低、重現(xiàn)性好、精密度高，并且操作簡便、快速，是一種有效監(jiān)測水產(chǎn)品中辛基酚和壬基酚含量的方法。

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