張雷韓麗琴林艷

保腎膠囊的質量控制

張雷1韓麗琴2林艷1

目的建立保腎膠囊含量測定方法。方法以大黃和元明粉為原料混合制成保腎膠囊，大黃素為對照品，采用高效液相色譜法測定含量，選用HypersilODS色譜柱（150mm×4.6mm，4.5μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液，檢測波長254nm。結果測定結果顯示在2.4～28.8μg·mL-1濃度范圍內吸光度與濃度呈線性關系，r=0.9999。加樣回收率在98.7～102.8%之間，平均回收率為100.8%，標準偏差為1.25%。結論測定結果為臨床合理用藥提供科學依據(jù)。

保腎膠囊；高效液相色譜法；質量控制

慢性腎衰，是由多種慢性疾病引起腎臟損害和進行性惡化的結果，使機體在排泄代謝廢物和調節(jié)水、電解質、酸堿平衡等方面出現(xiàn)紊亂的臨床綜合癥群，是威脅生命的重要病癥之一。我院以大黃和元明粉為原料自主研制的保腎膠囊經(jīng)大量的臨床和實驗證實，對延緩慢性腎衰有確切療效，對大黃及其制劑的質量控制，一般采用高效液相色譜法和薄層掃描法[1,2]測定其中蒽醌類有效成分的含量，本實驗利用高效液相色譜法測定保腎膠囊中大黃素的含量。

1 儀器與試藥

LC-R20AT型高效液相色譜儀（日本島津），LC-SOLUTION工作站，二極管陣列檢測器。FN1104型分析天平，HypersilODS色譜柱（150mm×4.6mm，4.5μm）；超聲波振蕩器。

大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，110756-200110）和大黃對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號：0986-200002）；甲醇為色譜純，實驗用水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

取大黃對照藥材0.3g，加甲醇20mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干；加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水溶中加熱30min,立即冷卻,用乙醚分2次提取,每次10ml,合并乙醚液,蒸干,殘渣加氯仿1ml使溶解,作為對照藥材溶液；取成品藥去膠囊，研細稱取3.0g，同法制成供試品溶液。同法稱取除大黃以外的藥材制成陰性對照溶液；另取大黃素對照品加甲醇制成分每1mg·mL-1的對照品溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗[3]，吸取上述4種溶液各10μL，分別點于同一塊硅膠H板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）為展開劑，展開取出，晾干，置紫外燈下檢視，結果，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。大黃的TLC見圖1。

圖1 大黃的TLC(1～3.樣品；4大黃對照藥材；5陰性對照)

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱HypersilODS（150mm×4.6mm，4.5μm），流動相為甲醇—0.1%磷酸溶液，檢測波長254nm。流速1.0mL·min-1；柱溫：25℃；進樣量10μL。將對照品和陰性液作色譜分析，陰性液在對照品保留時間處無干擾，專屬性良好。

2.2.2 溶液的制備（1）對照品溶液的制備：

精密稱取105℃干燥至恒重的大黃素對照品0.0120g，置100mL容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，即得0.12mg·mL-1的大黃素對照溶液。 供試品溶液的制備：取藥品去膠囊研細，稱量2.0g，加甲醇20ml,超聲過濾蒸干，置100mL容量瓶中，用乙醚定容。 陰性對照溶液的制備：稱取元明粉適量，置100mL容量瓶中，用乙醚定容。

2.3 線性關系考察

精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0mL于10ml容量瓶中，加乙醚至刻度，搖勻，即得對照品溶液。按色譜條件分別進樣10μL，記錄峰面積，以濃度對峰面積進行線性回歸，得回歸方程A=55329C+9264.7（r＝0.99990，n＝5），結果表明，大黃素進樣濃度在2.4～28.8μg·mL-1范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.4 專屬性試驗

分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液各10μL，按上述色譜條件進樣。結果表明，陰性對照溶液在大黃素出峰位置處無干擾。色譜見圖2。

圖2 高效液相圖譜(a供試品,b陰性對照,c大黃素對照品)

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10μL，重復進樣6次測定，記錄峰面積。結果，RSD＝0.65%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取本品，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，分別于制備后0、2、4、8、12、24h依法測定大黃素含量。結果，RSD＝0.70%，表明供試品溶液在24h內基本穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取本品，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法制備，平行試驗6份。結果，大黃素平均含量為每粒0.65mg，RSD＝1.38%，表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取樣品適量，加入大黃素對照品，按2.2.2項操作，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率測定結果(n=9)

2.9 樣品測定

精密稱取樣品適量，乙醚分2次提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加氯仿1mL使溶解，按2.2.2項操作，測定樣品中大黃素的含量。測定結果見表2。

表2 保腎膠囊中大黃素含量

3 討論

大黃性味苦寒，具瀉熱通腸、涼血解毒、逐淤通經(jīng)之功效。臨床應用于實熱便秘、腸癰腹痛等癥，現(xiàn)代臨床研究表明大黃通過改善氮質代謝，抑制腎臟代償性肥大和高代謝狀態(tài)來延緩慢性腎功能衰竭的發(fā)展。也可以通過清除自由基作用減少過多的氧自由基使膜脂質過氧化引起的腎小球系膜細胞增殖。元明粉具軟堅瀉下，清熱消腫之功效，阻止腸內水分的吸收。大黃與元明粉配伍，具有瀉下解毒、蕩滌腸胃、推陳致新及活血化瘀之功效，且能“除邪氣而不傷正氣，”使腸內容積增大，引起機械刺激，促進腸蠕動，不僅能使糞氮排出量增加，而且還能阻止氨基氮從腸道吸收，對延緩慢性腎衰具有較好療效。采用高效液相色譜法測定其有效成分含量，操作簡單，線性關系好，方法可行。

[1]郭丹,陳娜娜,晏媛.高效液相色譜法測定常通口服液中大黃素的含量[J].中國藥房,2003,14(5):296.

[2]袁文娟,孟芹,蔣序.排毒養(yǎng)顏膠囊中大黃素的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2002,13(6):340.

[3]國家藥典委員會.中國藥典 [S].2010年版.北京:化學工業(yè)出版社,2010:附錄VB.

1吉林醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院，吉林吉林 132013

2吉林醫(yī)藥學院，吉林吉林 132013