李郁英高鋼徐華

協(xié)日音·湯質量標準研究

李郁英1高鋼2徐華2

目的建立協(xié)日音·湯的質量標準。方法采用薄層色譜法鑒別制劑中的苦地丁，采用高效液相色譜法測定處方中秦艽的成分龍膽苦苷。結果采用薄層色譜法鑒別制劑中的苦地??；采用高效液相色譜法測定龍膽苦苷，在0.2104～0.7364μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為Y=12838X+18492，r=1；平均加樣回收率為99.07%（N=9，RSD=0.98%）。結論方法可行，重現(xiàn)性好，能準確監(jiān)控該制劑的質量。

苦地丁，協(xié)日音·湯，龍膽苦苷

協(xié)日音·湯為蒙醫(yī)院常用的蒙藥制劑，由苦地丁、秦艽、麥冬等五味藥組成，治療由“協(xié)日”引起的各種黃疸病。為有效的控制該制劑的質量，本試驗采用TLC法對處方中的苦地丁進行定性鑒別；采用HPLC，以龍膽苦苷為定量指標，建立處方中龍膽苦苷的測定方法。該標準操作簡單、方法可行，重現(xiàn)性好，能準確監(jiān)控該制劑的質量。

1 儀器與材料

島津LC—10ATvp泵， SPD-10Avp型檢測器，島津工作站，惠普上分6010紫外分光光度儀。

苦地丁對照藥材(批號:990-9401)、龍膽苦苷（110770-200308，供含量測定用）：購自中國藥品生物制品檢定所。協(xié)日音.湯（批號：090512、090620、090726）由包頭市蒙中醫(yī)院提供；模擬樣（20091120）自制；甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 苦地丁薄層色譜鑒別

2.1.1 樣品溶液制備：取樣品5g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為樣品溶液。

2.1.2 陰性對照溶液的制備：取同工藝制備的不含苦地丁的樣品4.5g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為陰性對照溶液。

2.1.3 苦地丁對照藥材溶液的制備：取苦地丁藥材1g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.4 樣品測定：吸取上述3種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G簿層板上，以環(huán)己烷—丙酮（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。見圖1、2。

2.1.5 試驗結果：在色譜中，樣品溶液在與苦地丁對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照溶液在此處未出現(xiàn)斑點；故此方法專屬性強，可作苦地丁的鑒別方法。

1 2 3 41、陰性對照溶液 2、樣品溶液（090726）3、苦地丁藥材 4、苦地丁對照藥材圖1 苦地丁薄層色譜鑒別方法學研究

1 2 3 4 51、模擬樣品 2、樣品（090726）3、樣品（090512）4、樣品（090620） 5、苦地丁對照藥材圖2 三批樣品的薄層色譜鑒別

2.2 龍膽苦苷的HPLC測定

2.2.1色譜條件:

2.2.1 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱[Agilent Tc-C18（5μ，4.6×250mm）]；流動相：甲醇—水（30：70）；檢測波長：254.0nm；柱溫：25℃；流速：1ml·min-1；理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計算應不低于3000。

2.2.2 提取溶劑及提取效率的考察

2.2.3 提取溶劑的選擇：參照《中國藥典》2005年版一部“秦艽”項下的龍膽苦苷含量測定方法，選用甲醇作為提取溶劑。

2.2.4 提取效率的考察：以甲醇作為提取溶劑進行超聲提?。üβ?00W,頻率50kHz），為保證被測成分提取完全，實驗中考察了超聲提取20分鐘、30分鐘和40分鐘不同超聲提取時間對提取效率的影響， 結果：三份樣品分別超聲處理（功率300W，頻率50KHz）30、40、50分鐘后，含量基本一致。含量分別為1.055、1.104、1.099。

2.2.5 專屬性

2.2.5.1對照品溶液的制備：取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.5.2樣品溶液的制備：取樣品約2.5g，精密稱定，加入甲醇20ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。

2.2.5.3陰性對照溶液制備：取同工藝制備的不含苦地丁的樣品約2.3g，精密稱定，加入甲醇20ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為陰性對照溶液。

2.2.5.4測定：分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、樣品溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，測得結果為：陰性對照色譜圖中在與龍膽苦苷對照品以及供試品色譜圖相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分龍膽苦苷的測定無干擾。

2.2.6 線性關系考察：取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml，分別置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10μl注入色譜儀測定。結果：在0.2104～0.7364μg濃度范圍內，濃度與檢測峰面積呈線性?；貧w方程為:Y=12838X+18492，r=1。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品溶液，分別在0h、4h、6h、8h、12h進行測定，其檢測峰面積的RSD為0.41%，說明龍膽苦苷在12小時內的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

2.2.8 精密度：取樣品（批號：090512）6份，每份約2.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定。結果：6次測定的平均值為1.101mg/g，RSD為0.26%。

2.2.9 加樣回收率測定：取樣品（批號：090512，含量為1.101mg/g）約0.6g、0.7g、0.8g各3份，精密稱定，分別精密加入龍膽苦苷對照品，加入甲醇25ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定。結果：平均回收率為 99.07%。RSD（%）為0.98%。

2.2.10 樣品含量測定：取樣品約2.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10ul，注入液相色譜儀，測定。結果見表2。

2.3 討論

在苦地丁的薄層色中，展開后立刻置紫外光燈（254nm）下檢視，斑點顯藍色，放置一定時間后顯黃色。參照中國藥典2005年版，采用HPLC法測定樣品中的龍膽苦苷；藥典的方法是對樣品進行熱提取而本法采用超聲處理，經兩種方法比較試驗，測得結果基本一致。該方法操作簡單。

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1包頭醫(yī)學院職業(yè)技術學院，內蒙古包頭014030

2包頭市藥品檢驗所，內蒙古包頭014030