顧 曄，杜 淵，金 新

1.江蘇無(wú)錫市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，江蘇無(wú)錫 214101

2.江蘇無(wú)錫市第三人民醫(yī)院，江蘇無(wú)錫 214041

3.江蘇無(wú)錫福祈制藥有限公司，江蘇無(wú)錫 214041

硫酸奈替米星為一半合成的氨基糖苷類廣譜抗生素。其作用機(jī)理是通過(guò)抑制敏感微生物的正常蛋白合成而起作用。

本品適用于敏感細(xì)菌所引起的包括新生兒，嬰兒，兒童等各年齡患者在內(nèi)的嚴(yán)重或危及生命的細(xì)菌感染性疾病的短期治療。這些感染性疾病包括：1）復(fù)雜性泌尿道感染；2）敗血癥；3）皮膚軟組織感染；4）腹腔內(nèi)感染；5）下呼吸道感染等。

因目前國(guó)內(nèi)藥典2010版規(guī)定其原料含量測(cè)定的方法采用微生物檢定法[1]，但此方法操作繁瑣，影響因素多且測(cè)得結(jié)果穩(wěn)定性差，故本文采用美國(guó)藥典方法[2]，改用反相高效液相色譜測(cè)定方法，用于本品的含量測(cè)定，并進(jìn)行方法驗(yàn)證[3-4]，為控制該原料藥的質(zhì)量提供了可靠依據(jù)。結(jié)果表明本法靈敏、準(zhǔn)確且操作簡(jiǎn)便。

1 儀器與試藥

美國(guó)Dionex公司UltiMate 3000型液相色譜儀。庚烷磺酸鈉批號(hào)31.03.12；磷酸批號(hào)31.12.14；乙腈批號(hào)為31.01.14，三種試劑均為色譜級(jí)供應(yīng)商為默克。硫酸奈替米星樣品（自制，批號(hào)20120101，20120102，20120103）。

2 色譜條件

色譜柱：Dionex C18（250×4.6mm 5μ） ；流動(dòng)相為0.5%稀磷酸（每毫升含有20.22g庚烷磺酸鈉）：乙腈（62：38）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm，柱溫為35℃；進(jìn)樣量為20μl。

3 溶液配制

1）系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取硫酸奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品和硫酸西索米星標(biāo)準(zhǔn)品各25mg，用流動(dòng)相稀釋至25mLL；2）對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取硫酸奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品100mg，用流動(dòng)相稀釋至10mL；3）對(duì)照品溶液：精密稱取硫酸奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品50mg，用流動(dòng)相稀釋至50mL；4）供試品溶液：精密稱取硫酸奈替米星供試品50mg，用流動(dòng)相稀釋至50mL。

4 專屬性試驗(yàn)

取系統(tǒng)適用性溶液，注入液相色譜儀，記錄保留時(shí)間作為定性指標(biāo)。硫酸奈替米星對(duì)照品的色譜圖見(jiàn)圖1，硫酸奈替米星色譜峰的保留時(shí)間為7.320min，硫酸西索米星色譜峰的保留時(shí)間為7.967 min，硫酸奈替米星與雜質(zhì)硫酸西索米星完全分離，分離度為1.8（要求為應(yīng)不小于1），理論塔板數(shù)按硫酸奈替米星峰計(jì)算為7471（要求為應(yīng)大于3000）。

圖1

5 精密度試驗(yàn)

精密稱取硫酸奈替米星標(biāo)準(zhǔn)品50mg，用流動(dòng)相稀釋至50mL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，結(jié)果硫酸奈替米星的保留時(shí)間、峰面積的平均值分別為7.972、3993.338，RSD分別為0.08%、0.05%，精密度良好。見(jiàn)圖2。

圖2

6 線性試驗(yàn)

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（a）0.2、0.5、1.0、1.5、2.0mL加入10mL容量瓶中并用流動(dòng)相定容（分別相當(dāng)于測(cè)試濃度的20%、50%、100%、150%、200%）。取上述溶液分別連續(xù)進(jìn)樣2次，記錄稱樣量、峰面積，并計(jì)算平均值、回歸方程和相關(guān)系數(shù)，作出線性圖。結(jié)果表明在濃度 0.20052mg/mL～2.0052mg/ mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，得線性回歸方程Y=3783.8X+132.93，相關(guān)系數(shù)為0.9998。

7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取25mg硫酸奈替米星對(duì)照品，用流動(dòng)相溶解并稀釋至50mL，濃度約為0.5mg/mL，相當(dāng)于測(cè)試濃度的50%，制備3份。

精密稱取50mg硫酸奈替米星對(duì)照品，用流動(dòng)相溶解并稀釋至50mL，濃度約為1.0mg/mL，相當(dāng)于測(cè)試濃度的100%，制備3份。

精密稱取75mg硫酸奈替米星對(duì)照品，用流動(dòng)相溶解并稀釋至50mL，濃度約為1.5mg/mL，相當(dāng)于測(cè)試濃度的150%，制備3份。

取上述溶液共9份，分別連續(xù)進(jìn)樣，記錄稱樣量，峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算回收率及平均值，RSD。計(jì)算得到平均回收率為99.87%，RSD1.54%，方法準(zhǔn)確可靠。

8 檢測(cè)限、定量限的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取硫酸奈替米星適量，稀釋至一定濃度并進(jìn)樣20μl，計(jì)算信噪比，其信噪比（S/N）在10左右的目標(biāo)溶劑濃度即為定量限濃度，信噪比（S/N）在3左右的目標(biāo)溶劑濃度即為檢測(cè)限濃度。試驗(yàn)測(cè)得硫酸奈替米星的定量限為2.5055μg/mL，相當(dāng)于0.05ng。檢測(cè)限為0.25055μg/mL，相當(dāng)于0.005ng。

9 樣品測(cè)定結(jié)果

取連續(xù)生產(chǎn)的樣品三批，按3.4項(xiàng)下配制，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

根據(jù)USP32版方法，用外標(biāo)法計(jì)算硫酸奈替米星的含量，計(jì)算公式如下：

注：對(duì)照品標(biāo)示量為653μg，對(duì)照品干燥失重為7.5%。

3批自制樣品20120101、20120102、20120103的含量分別為648.7μg 、 651.1μg 、652.2μg均符合USP藥典規(guī)定（藥典規(guī)定應(yīng)不低于595μg）。

10 討論

此美國(guó)藥典方法經(jīng)過(guò)方法學(xué)的專屬性、精密度、線性、準(zhǔn)確性、定量限、檢測(cè)限試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果均符合要求。此方法不但簡(jiǎn)便，而且準(zhǔn)確可靠，所以可以采用此反相高效液相色譜法對(duì)硫酸奈替米星的含量進(jìn)行測(cè)定，以便于對(duì)此產(chǎn)品的生產(chǎn)提供可靠依據(jù)，對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行更好的控制，也為該產(chǎn)品在美國(guó)市場(chǎng)銷售創(chuàng)造條件。

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：987.

[2]USP32_NF27[S].USA.2009:3071-3072.

[3]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄194-195.

[4]王其勇，宋勤.HPLC法測(cè)定茵梔黃膠囊中梔子苷的含量[J].藥物分析雜志，2009，29(3):470-471.