趙 斐

山東省淄博職業(yè)學(xué)院，山東 淄博 255314

清熱化毒丸原名犀角化毒丹，為衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)［1］，是根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論，由水牛角，大黃，黃芩等中藥加工而成的純中藥制劑。功能與主治為:清火化毒，消腫止痛。用于小兒身熱煩躁，咽喉腫痛，口舌生瘡，皮膚瘡癤，口臭便秘，疹后余毒末盡。黃芩是方中的臣藥，清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎。用于濕溫、暑濕，胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動(dòng)不安［2］。未見有用HPLC法測(cè)定清熱化毒丸中黃芩苷含量的報(bào)道。為進(jìn)一步控制藥品質(zhì)量，本研究建立了用HPLC法測(cè)定清熱化毒丸中黃芩苷的含量的檢測(cè)方法。

1 儀器、樣品與試劑

SHIMADZU LC－20ATVP高效液相色譜儀，SHIMADZU SPD－20AVP紫外檢測(cè)器，CTO－20A柱溫箱，SIL－20A自動(dòng)進(jìn)樣器。甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水。清熱化毒丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào):0013010，9013495，規(guī)格:3g/丸)，陰性對(duì)照為自制。黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為:201016，含量為94.0%)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB－C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)，以甲醇－水－磷酸 (47∶53∶0.2)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm 流速:1.0 mL·min－1，進(jìn)樣量10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品10.92mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液 (每1ml含黃芩苷0.2055mg)。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得 (每1ml含黃芩苷0.0411mg)。

2.3 供試品溶液的制備

取約3g，精密稱定，剪碎，加硅藻土適量，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理 (功率250W，頻率50kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，加70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性供試品溶液的制備

按處方比例制成缺黃芩的模擬制劑，按2.3供試品溶液的制備方法制成陰性供試品溶液。由圖3可以看出在陰性樣品中不含黃芩苷，由此可以看出黃芩苷只來源于黃芩，陰性無干擾。

黃芩苷對(duì)照品，供試品，陰性對(duì)照，3種色譜圖如圖1～3。

2.5 線性關(guān)系試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液 (0.2055mg·ml－1)0.5μl，1μl，2μl，3μl，5μl，注入色譜儀，測(cè)定峰面積。結(jié)果以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:y=10225920x－1083344(r2=0.9925)。結(jié)果表明黃芩苷在0.1028～1.0275μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷線性關(guān)系試驗(yàn)

2.6 精密度試驗(yàn)

取黃芩苷對(duì)照品溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)5次，每次進(jìn)樣10μl，結(jié)果黃芩苷平均峰面積為:2725736，RSD為:0.6%，n=5;說明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取清熱化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào):0013010)，分別按正文方法制備供試品溶液，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果樣品中黃芩苷含量的RSD為0.8%。表明重復(fù)性試驗(yàn)良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將2.7項(xiàng)下第一份供試品溶液置室溫下分別放置0，2，4，6，8，10，12 h，各進(jìn)樣10μl，平均峰面積為:2714238，RSD為:0.9%，n=7，表明樣品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。取清熱化毒丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào):0013010)10丸，研細(xì)，精密稱取樣品5份，每份3g，分別加入黃芩苷對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.2055mg·ml－1)5ml，按“2.3”項(xiàng)下提取，制備供試品溶液，進(jìn)樣量均為10μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算，平均回收率為99.61%，RSD=1.4%。見表2。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.10 樣品測(cè)定

對(duì)照品溶液的制備 取黃芩苷對(duì)照品溶液 (每1ml中含黃芩苷0.0411mg)作為對(duì)照品溶液。進(jìn)樣量為10μl。

供試品溶液制備 按照2.3項(xiàng)下操作制備供試品溶液，進(jìn)樣量均為10μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算。見表3。

表3 清熱化毒丸含量測(cè)定

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)采用70%乙醇超聲處理30分鐘，發(fā)現(xiàn)效果較好，提取簡(jiǎn)單，完全，且比甲醇對(duì)人體危害小，所以選擇70%乙醇作為提取溶劑。

3.2 參考有關(guān)文獻(xiàn)［2，3］以甲醇 －水 －磷酸 (47∶53∶0.2)為流動(dòng)相，柱溫:40℃，出峰時(shí)間短，分離效果好。故以此作為流動(dòng)相。

［1］衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二冊(cè)［S］.274.

［2］中國(guó)藥典［S］.一部.2010:282.

［3］劉乃強(qiáng)，江云麗，張村，等.雙黃連含片黃芩苷含量測(cè)定方法的改進(jìn)［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2000，35(12):835－836.