李聰
(新農(nóng)甘草產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司,新疆 阿拉爾 843018)
H PLC測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸含量
李聰
(新農(nóng)甘草產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司,新疆 阿拉爾 843018)
目的:建立應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸含量的檢測(cè)方法。方法:色譜柱Kromasil-Cl8柱,規(guī)格:4.6 mm×150 mm,粒度:5 μm,柱溫:25℃,流動(dòng)相:乙腈-0.05%磷酸(36∶64),流速:1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm,進(jìn)樣量:10 μL,以峰面積外標(biāo)法定量。結(jié)果:甘草酸濃度在48.8~585.7 μg/mL有較好的線性范圍,回歸方程為Y=560 4.4 X-150 29(r=0.999 9),平均回收率為100.1%(n=6),RSD=0.42%。結(jié)論:此方法適用于測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸的含量。
高效液相色譜法;復(fù)方甘草片;甘草酸
復(fù)方甘草片是常用復(fù)方制劑,是鎮(zhèn)咳祛痰類(lèi)非處方藥品,其成分有甘草浸膏粉、阿片粉、樟腦、八角茴香油、苯甲酸鈉等[1]?,F(xiàn)代藥理研究證實(shí),甘草中皂苷類(lèi)成分甘草酸具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用和抗炎、抗?jié)儭⒖棺儜B(tài)反應(yīng)、解毒、鎮(zhèn)咳、抗腫瘤、影響脂代謝、抑制艾滋病病毒等作用[2-9],為甘草的主要有效成分?!吨袊?guó)藥典》2010年版規(guī)定高效液相色譜 (HPLC)法測(cè)定復(fù)方甘草片中的甘草酸,流動(dòng)相為乙腈-0.025 mol/L磷酸二氫鉀-0.002 5 mol/L庚烷磺酸鈉(33∶33∶44),色譜柱為 C18,檢測(cè)波長(zhǎng) 250 nm[10],作者采用該法檢測(cè),重復(fù)性達(dá)不到分析要求,本研究在該法的基礎(chǔ)上參考 《英國(guó)藥典》2009年版應(yīng)用乙腈-水-乙酸(30∶64∶6),色譜柱為C18,檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm檢測(cè)甘草酸[11],就此問(wèn)題進(jìn)行研究,旨在建立一個(gè)具有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度,操作簡(jiǎn)便、快速,重現(xiàn)性好的檢測(cè)方法。
1.1 儀器
美國(guó)Laballiance高效液相色譜儀系列,包括SeriesⅢ輸液泵、Model 500紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、LC 241 Plus自動(dòng)進(jìn)樣器,Laballiance色譜數(shù)據(jù)工作站。
1.2 試藥
對(duì)照品:甘草酸銨(原中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,含量測(cè)定用),樣品:復(fù)方甘草片(本公司提供),乙腈(上海星可生化有限公司生產(chǎn),色譜純),磷酸(美國(guó) TEDIA生產(chǎn),色譜純),乙醇(西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn),分析純),水為二次重蒸水。流動(dòng)相經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾,經(jīng)超聲波脫氣處理。
1.3 色譜條件
色譜柱:Kromasil-Cl8柱(4.6 mm×150 mm),粒度5 μm,柱溫:25℃,流動(dòng)相:乙腈-0.05%磷酸(36∶64),流速:1.0mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm,進(jìn)樣量:10 μL。
1.4 對(duì)照品溶液的制備
精密稱(chēng)取甘草酸銨對(duì)照品16.09 mg,置25 mL容量瓶中,加入70%乙醇超聲處理使溶解,取出,放冷,稀釋至刻度,搖勻,即得(甘草酸/甘草酸銨= 0.979 7)。
1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和線性范圍
分別稀釋上述甘草酸銨對(duì)照品溶液,濃度為49.8、99.6、149.5、199.3、249.1、298.9、348.7、398.6、448.4、498.2、548.0、597.8 μg/mL,在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μL,得色譜(見(jiàn)圖1),以濃度為橫坐標(biāo),相對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見(jiàn)圖2),回歸方程為
r=0.999 9,甘草酸濃度在48.8~585.7 μg/mL有較好的線性范圍。
1.5 重復(fù)性試驗(yàn)
連續(xù)進(jìn)樣對(duì)照品溶液 (0.201 8 mg/mL)6次,每次10 μL,分別得峰面積:1 109 986、1 110 995、 1 109 994、1 108 924、1 108 989、1 110 997(色譜見(jiàn)圖1),平均值:1 109 981,RSD:0.08%。
圖1 對(duì)照品溶液甘草酸的色譜
圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
1.6 供試品溶液的制備及測(cè)定
取復(fù)方甘草片,分別稱(chēng)取6個(gè)批號(hào)且每1個(gè)批號(hào)精密稱(chēng)定1片置50 mL量瓶中,加70%乙醇45 mL,超聲處理(功率 200 W,頻率 50 kHz)30 min,取出,放冷,加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),注入10 μL,測(cè)定,本試驗(yàn)測(cè)試6個(gè)批號(hào)樣品,結(jié)果見(jiàn)表1,色譜見(jiàn)圖3。
表1 復(fù)方甘草片中甘草酸含量
圖3 供試品溶液色譜
1.7 回收率實(shí)驗(yàn)
取表1中6個(gè)批號(hào)的復(fù)方甘草片樣品各1片,溶于50 mL容量瓶中,均精密加入1.24 mg甘草酸,按上述供試品溶液的制備及測(cè)定甘草酸含量,計(jì)算回收率,測(cè)得平均回收率為 100.1%(n= 6),RSD=0.42%,結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
按 《中國(guó)藥典》2010年版復(fù)方甘草片項(xiàng)下規(guī)定高效液相色譜法測(cè)定甘草酸含量,批號(hào)100335平行做6次,測(cè)得每片含量分別為6.01%、6.13%、6.31%、6.05%、6.52%、6.08%,RSD=3.16%,本研究方法檢測(cè)有更好的重復(fù)性和精密度。
本研究采用的HPLC法測(cè)定復(fù)方甘草片的甘草酸含量,有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度,操作簡(jiǎn)便、快速,重現(xiàn)性好,并且和《中國(guó)藥典》2010年(一部)甘草浸膏的甘草酸檢測(cè)的流動(dòng)相一致,做2個(gè)品種時(shí)只需要通過(guò)雙泵改變流動(dòng)相比例即可,增強(qiáng)了此方法的可操作性,此方法可以作為復(fù)方甘草片中甘草酸的定量方法。
參考方獻(xiàn):
[1] 范瑞,劉汝成,馮慧.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸的含量[J].海峽藥學(xué),2010,22(8):113-114.
[2] 陳紅.甘草藥理作用概述[J].海峽藥學(xué),2005,17(4):37-41.
[3] 王惠敏.甘草藥理作用及其臨床應(yīng)用[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,23(4):184-185.
[4] Aly AM,Al-Alousi L,Salem HA.Licorice:a possible anti-inflammatory and anti-ulcer drug.[J].AAPS Pharm Sci Tech,2005,6(1):E74-82.
[5] 楊德柱,劉建華.高效液相色譜法測(cè)定甘草浸膏中甘草酸的含量[J].中華醫(yī)藥學(xué)雜志,2004,3(2):79-80.
[6] 劉秀英,王翔樸,賀全仁,等.甘草甜素和齊墩果酸對(duì)大鼠鎘中毒性肝損傷的防護(hù)作用與機(jī)理[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2000,16(1):21-24.
[7] 賈道全,羅成福,張正,等.甘草甜素逆轉(zhuǎn)肝纖維化及早期肝硬化的作用探討[J].中國(guó)消化雜志,2001,21(12):754-756.
[8] 馬濤,曹穎林,白虹,等.甘草提取物對(duì)五氯硝基苯造成肝損傷的保護(hù)作用[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2002,19(4):275-277.
[9] 高鴻霞,邵世和,王國(guó)慶.中藥甘草研究進(jìn)展[J].井岡山醫(yī)專(zhuān)學(xué)報(bào),2004,11(5):8-11.
[10] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:376.
[11] The British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia 2009[M].London:Stationery Office Bo,2008:7127-7129.
Content Determination of Glycyrrhizic Acid in Compound Liquorice Tablets by HPLC
Li Cong(Xinnong Licorice Industry Co.Ltd.,Xinjiang Alaer 843018,China)
Objective:To establish a method for the content determination of glycyrrhizic acid in compound liquorice tablets by HPLC.Methods:The Kromasil-C18(4.6 mm×150 mm)separation column was used with the column temperature at 25℃.The mobile phase was acetonitrile-0.05%phosphoric acid(36∶64),the flow rate was 1.0 mL/min,the UV detection wavelength was at 250 nm,and the sample volume was 10 μL.The external standard method of peak area was employed for quantitative analysis.Results:A good linearity was obtained in the range of 48.8~585.7 μg/mL,regression:Y=560 4.4 X-150 29(r=0.999 9),the average recovery was 100.1% (n=6,RSD=0.42%).Conclusion:This method is good for the content determination of glycyrrhizic acid in compound liquorice tablets.
HPLC;Compound Liquorice Tablets;Glycyrrhizic Acid
10.3969/j.issn.1672-5433.2012.04.005
2011-12-03)
李聰,男,助理工程師。主要從事藥品檢驗(yàn)工作。E-mail:slit911@163.com