李聰

（新農(nóng)甘草產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司，新疆 阿拉爾 843018）

H PLC測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸含量

李聰

（新農(nóng)甘草產(chǎn)業(yè)有限責(zé)任公司，新疆 阿拉爾 843018）

目的：建立應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸含量的檢測(cè)方法。方法：色譜柱Kromasil-Cl8柱，規(guī)格：4.6 mm×150 mm，粒度：5 μm，柱溫：25℃，流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸（36∶64），流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm，進(jìn)樣量：10 μL，以峰面積外標(biāo)法定量。結(jié)果：甘草酸濃度在48.8～585.7 μg/mL有較好的線性范圍，回歸方程為Y=560 4.4 X－150 29（r=0.999 9），平均回收率為100.1%（n=6），RSD=0.42%。結(jié)論：此方法適用于測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸的含量。

高效液相色譜法；復(fù)方甘草片；甘草酸

復(fù)方甘草片是常用復(fù)方制劑，是鎮(zhèn)咳祛痰類(lèi)非處方藥品，其成分有甘草浸膏粉、阿片粉、樟腦、八角茴香油、苯甲酸鈉等[1]?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，甘草中皂苷類(lèi)成分甘草酸具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用和抗炎、抗?jié)?、抗變態(tài)反應(yīng)、解毒、鎮(zhèn)咳、抗腫瘤、影響脂代謝、抑制艾滋病病毒等作用[2-9]，為甘草的主要有效成分?！吨袊?guó)藥典》2010年版規(guī)定高效液相色譜 （HPLC）法測(cè)定復(fù)方甘草片中的甘草酸，流動(dòng)相為乙腈-0.025 mol/L磷酸二氫鉀-0.002 5 mol/L庚烷磺酸鈉（33∶33∶44），色譜柱為 C18，檢測(cè)波長(zhǎng) 250 nm[10]，作者采用該法檢測(cè)，重復(fù)性達(dá)不到分析要求，本研究在該法的基礎(chǔ)上參考 《英國(guó)藥典》2009年版應(yīng)用乙腈-水-乙酸（30∶64∶6），色譜柱為C18，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm檢測(cè)甘草酸[11]，就此問(wèn)題進(jìn)行研究，旨在建立一個(gè)具有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度，操作簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性好的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

美國(guó)Laballiance高效液相色譜儀系列，包括SeriesⅢ輸液泵、Model 500紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、LC 241 Plus自動(dòng)進(jìn)樣器，Laballiance色譜數(shù)據(jù)工作站。

1.2 試藥

對(duì)照品:甘草酸銨（原中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，含量測(cè)定用），樣品:復(fù)方甘草片（本公司提供），乙腈（上海星可生化有限公司生產(chǎn)，色譜純），磷酸（美國(guó) TEDIA生產(chǎn)，色譜純），乙醇（西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，分析純），水為二次重蒸水。流動(dòng)相經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，經(jīng)超聲波脫氣處理。

1.3 色譜條件

色譜柱:Kromasil-Cl8柱（4.6 mm×150 mm），粒度5 μm，柱溫:25℃，流動(dòng)相:乙腈-0.05%磷酸（36∶64），流速:1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm，進(jìn)樣量:10 μL。

1.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取甘草酸銨對(duì)照品16.09 mg，置25 mL容量瓶中，加入70%乙醇超聲處理使溶解，取出，放冷，稀釋至刻度，搖勻，即得（甘草酸/甘草酸銨= 0.979 7）。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和線性范圍

分別稀釋上述甘草酸銨對(duì)照品溶液，濃度為49.8、99.6、149.5、199.3、249.1、298.9、348.7、398.6、448.4、498.2、548.0、597.8 μg/mL，在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μL，得色譜（見(jiàn)圖1），以濃度為橫坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖2），回歸方程為

r=0.999 9，甘草酸濃度在48.8～585.7 μg/mL有較好的線性范圍。

1.5 重復(fù)性試驗(yàn)

連續(xù)進(jìn)樣對(duì)照品溶液 （0.201 8 mg/mL）6次，每次10 μL，分別得峰面積:1 109 986、1 110 995、 1 109 994、1 108 924、1 108 989、1 110 997（色譜見(jiàn)圖1），平均值:1 109 981，RSD:0.08%。

圖1 對(duì)照品溶液甘草酸的色譜

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.6 供試品溶液的制備及測(cè)定

取復(fù)方甘草片，分別稱(chēng)取6個(gè)批號(hào)且每1個(gè)批號(hào)精密稱(chēng)定1片置50 mL量瓶中，加70%乙醇45 mL，超聲處理（功率 200 W，頻率 50 kHz）30 min，取出，放冷，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，注入10 μL，測(cè)定，本試驗(yàn)測(cè)試6個(gè)批號(hào)樣品，結(jié)果見(jiàn)表1，色譜見(jiàn)圖3。

表1 復(fù)方甘草片中甘草酸含量

圖3 供試品溶液色譜

1.7 回收率實(shí)驗(yàn)

取表1中6個(gè)批號(hào)的復(fù)方甘草片樣品各1片，溶于50 mL容量瓶中，均精密加入1.24 mg甘草酸，按上述供試品溶液的制備及測(cè)定甘草酸含量，計(jì)算回收率，測(cè)得平均回收率為 100.1%（n= 6），RSD=0.42%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2 比較

按 《中國(guó)藥典》2010年版復(fù)方甘草片項(xiàng)下規(guī)定高效液相色譜法測(cè)定甘草酸含量，批號(hào)100335平行做6次，測(cè)得每片含量分別為6.01%、6.13%、6.31%、6.05%、6.52%、6.08%，RSD=3.16%，本研究方法檢測(cè)有更好的重復(fù)性和精密度。

3 結(jié)論

本研究采用的HPLC法測(cè)定復(fù)方甘草片的甘草酸含量，有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，操作簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性好，并且和《中國(guó)藥典》2010年（一部）甘草浸膏的甘草酸檢測(cè)的流動(dòng)相一致，做2個(gè)品種時(shí)只需要通過(guò)雙泵改變流動(dòng)相比例即可，增強(qiáng)了此方法的可操作性，此方法可以作為復(fù)方甘草片中甘草酸的定量方法。

參考方獻(xiàn)：

[1] 范瑞，劉汝成，馮慧.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸的含量[J].海峽藥學(xué)，2010，22（8）:113-114.

[2] 陳紅.甘草藥理作用概述[J].海峽藥學(xué)，2005，17（4）:37-41.

[3] 王惠敏.甘草藥理作用及其臨床應(yīng)用[J].天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，23（4）:184-185.

[4] Aly AM，Al-Alousi L，Salem HA.Licorice:a possible anti-inflammatory and anti-ulcer drug.[J].AAPS Pharm Sci Tech，2005，6（1）:E74-82.

[5] 楊德柱，劉建華.高效液相色譜法測(cè)定甘草浸膏中甘草酸的含量[J].中華醫(yī)藥學(xué)雜志，2004，3（2）:79-80.

[6] 劉秀英，王翔樸，賀全仁，等.甘草甜素和齊墩果酸對(duì)大鼠鎘中毒性肝損傷的防護(hù)作用與機(jī)理[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2000，16（1）:21-24.

[7] 賈道全，羅成福，張正，等.甘草甜素逆轉(zhuǎn)肝纖維化及早期肝硬化的作用探討[J].中國(guó)消化雜志，2001，21（12）:754-756.

[8] 馬濤，曹穎林，白虹，等.甘草提取物對(duì)五氯硝基苯造成肝損傷的保護(hù)作用[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，19（4）:275-277.

[9] 高鴻霞，邵世和，王國(guó)慶.中藥甘草研究進(jìn)展[J].井岡山醫(yī)專(zhuān)學(xué)報(bào)，2004，11（5）:8-11.

[10] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:376.

[11] The British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia 2009[M].London:Stationery Office Bo，2008:7127-7129.

Content Determination of Glycyrrhizic Acid in Compound Liquorice Tablets by HPLC

Li Cong（Xinnong Licorice Industry Co.Ltd.，Xinjiang Alaer 843018，China）

Objective:To establish a method for the content determination of glycyrrhizic acid in compound liquorice tablets by HPLC.Methods：The Kromasil-C18（4.6 mm×150 mm）separation column was used with the column temperature at 25℃.The mobile phase was acetonitrile-0.05%phosphoric acid（36∶64），the flow rate was 1.0 mL/min，the UV detection wavelength was at 250 nm，and the sample volume was 10 μL.The external standard method of peak area was employed for quantitative analysis.Results：A good linearity was obtained in the range of 48.8～585.7 μg/mL，regression:Y=560 4.4 X－150 29（r=0.999 9），the average recovery was 100.1% （n=6，RSD=0.42%）.Conclusion:This method is good for the content determination of glycyrrhizic acid in compound liquorice tablets.

HPLC；Compound Liquorice Tablets；Glycyrrhizic Acid

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.04.005

2011-12-03）

李聰，男，助理工程師。主要從事藥品檢驗(yàn)工作。E-mail：slit911@163.com