王 松，殷中瓊，周瑞平，王 濤*

（1.宜賓學(xué)院 生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，四川 宜賓 644000；2.宜賓學(xué)院 發(fā)酵資源與應(yīng)用四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 宜賓 644000；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 雅安 625014；4.四川宜賓市敘府酒業(yè)有限公司技術(shù)中心，四川 宜賓 644000）

酒糟栽培食用菌是合理利用酒糟的有效途徑之一[1]。以酒糟為主要原料栽培食用菌后的培養(yǎng)基即為酒糟菌糠。菌糠中殘留大量的菌絲體，富含蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素及一些生物活性物質(zhì)[2-5]。三萜類化合物是天然物質(zhì)中數(shù)量最多的一類化合物，廣泛存在于自然界，具有抗腫瘤、保肝、鎮(zhèn)痛、抗氧化等生理活性，是被人們所關(guān)注的重要活性物質(zhì)之一。已在許多食用菌的子實(shí)體、孢子和菌絲體中提取出三萜類化合物組份且被證實(shí)具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用[6-8]。

為了比較研究不同食用菌培養(yǎng)后以及在不同階段的酒糟菌糠的三萜含量的差異，對(duì)茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）這三種酒糟菌糠進(jìn)行了三萜含量的測(cè)定，為酒糟菌糠飼料的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 酒糟菌糠

酒糟菌糠來(lái)源：茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇），由四川宜賓敘府酒業(yè)有限公司食用菌生產(chǎn)基地提供。

將鮮酒糟9.2kg、花生殼0.6kg、玉米粉0.27kg、蔗糖0.1kg、石膏0.1kg、石灰0.3kg混合，以配制培養(yǎng)基。在滅菌后的培養(yǎng)基上分別接種茶樹(shù)菇5號(hào)、雞腿菇特白。茶樹(shù)菇5號(hào)培養(yǎng)兩個(gè)月后，采摘第一茬菇后的菌糠為茶樹(shù)菇菌糠（出菇）；茶樹(shù)菇5號(hào)培養(yǎng)大約40d，菌絲體長(zhǎng)滿后的菌包為茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）；雞腿菇特白培養(yǎng)大約30d，菌絲體長(zhǎng)滿后的菌包為雞腿菇菌糠（未出菇）。

酒糟菌糠的處理：酒糟菌糠在105℃烘箱中烘15min，然后降到60℃，烘干6h，冷卻后粉碎過(guò)40目篩。

1.2 儀器與試劑

RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；ESJ200-4電子天平（沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；LG-04C四兩裝高速中藥粉碎機(jī)（浙江瑞安市百信藥機(jī)器廠）；UV-2102PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）等。

齊墩果酸對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所），高氯酸、冰醋酸、香草醛、乙酸乙酯、甲醇等均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制備

分別稱取茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）粉末20g，分別加入200mL石油醚，用索氏提取12h，得提取液。將提取液放置于通風(fēng)櫥內(nèi)12h，使石油醚揮發(fā)完全。然后將剩余物50℃真空干燥30min，稱取干燥物質(zhì)量，計(jì)算得率。

1.3.2 提取物中三萜含量的測(cè)定[9]

香草醛-高氯酸比色法測(cè)定三萜含量。以齊墩果酸作為標(biāo)準(zhǔn)樣品。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將齊墩果酸用甲醇配成0.2mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精確吸取該液0、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL和0.8mL分別置于具塞磨口試管中，水浴蒸干，溶劑揮干后，準(zhǔn)確加入0.4mL 5%香草醛冰醋酸溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）和1.6mL高氯酸，混勻。然后將8支試管同時(shí)放入70℃恒溫水浴鍋中水浴15min，取出后冷卻至室溫。最后向每支試管中各加入8mL乙酸乙酯，用紫外分光光度法檢測(cè)。

1.3.4 三萜含量測(cè)定方法

分別將茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）石油醚提取物溶解在50mL甲醇中，再將茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）甲醇溶液做1:10稀釋，茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）做1:5稀釋。按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定方法，測(cè)出其在560nm下的OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各代謝提取物中三萜含量，并計(jì)算三萜的得率。

2 結(jié)果與分析

2.1 酒糟菌糠提取物的得率

茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）的石油醚提取物的得率分別為0.31%、1.43%、0.54%，其中茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）石油醚提取物的得率最高。

2.2 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

以齊墩果酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度測(cè)定值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=3.4321x-0.0131，R2=0.999 2。結(jié)果表明，本品在40μg/mL～160μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of oleanolic acid

2.3 酒糟菌糠的三萜含量

茶樹(shù)菇菌糠（出菇）、茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）三種酒糟菌糠三萜類物質(zhì)含量OD值測(cè)定結(jié)果如圖2所示，根據(jù)其不同的濃度稀釋倍數(shù)，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計(jì)算出三種酒糟菌糠甲醇溶液濃度分別為0.25mg/mL、0.85mg/mL、0.51mg/mL。則三種菌糠提取物中的三萜含量分別為20.39%、14.82%、23.50%，進(jìn)一步計(jì)算出三萜得率分別是0.06%、0.21%、0.13%，其中茶樹(shù)菇菌糠（未出菇）的得率最高。

圖2 三種酒糟菌糠三萜含量Fig.2 The triterpenoid content to three kinds of distiller's grains-based spent mushroom substrate

3 討論

大量研究表明，食藥用菌類菌絲體和子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)成分差異不明顯，都含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和菌體多糖等相關(guān)活性物質(zhì)[10-12]。未出菇的酒糟菌糠中殘存大量的菌絲體，因此2種未出菇酒糟菌糠三萜含量較高。而出菇的酒糟菌糠中菌絲體較少，且出菇后，菌絲體中一部分生物活性物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到子實(shí)體上，導(dǎo)致其三萜含量較低。

同樣在未出菇的條件下，茶樹(shù)菇酒糟菌糠三萜含量比雞腿菇酒糟菌糠大的多，推測(cè)可能是因?yàn)椴煌N類的食用菌對(duì)三萜的合成與貯藏的能力不同，在本實(shí)驗(yàn)的條件下，茶樹(shù)菇三萜合成與貯藏能力優(yōu)于雞腿菇；也可能是因?yàn)殡u腿菇菌絲體中三萜類活性物質(zhì)合成較慢，在本實(shí)驗(yàn)期內(nèi)其含量還未到峰值[13]。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，雖然含量不一，但三種酒糟菌糠都含有三萜類物質(zhì)，結(jié)合我們對(duì)其他營(yíng)養(yǎng)成分和喂飼情況的研究情況（結(jié)果另發(fā)），酒糟菌糠飼料是一種優(yōu)良的飼料，其按一定的比例添加到家畜日糧中，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。

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