摘 要 利用核酸切割酶(Nicking endonuclease)識(shí)別特定DNA 雙鏈并切割其中某條單鏈的性質(zhì)，構(gòu)建了基于8-17E 脫氧核酶(8-17E DNAzyme)的Pb2+ 熒光循環(huán)放大檢測方法。Pb2+ 可激活8-17E 脫氧核酶水解RNA 底物，產(chǎn)生并釋放出的單鏈與分子信標(biāo)探針(Molecular beacon，MB)雜交，導(dǎo)致其莖環(huán)結(jié)構(gòu)被破壞，熒光信號(hào)恢復(fù);同時(shí)形成含有核酸切割酶Nt.BbvCΙ識(shí)別位點(diǎn)的雙鏈區(qū)域。在核酸切割酶Nt.BbvCΙ的作用下，分子信標(biāo)探針被切割釋放，游離出來的單鏈可與其它分子信標(biāo)重新雜交，從而觸發(fā)下一輪酶切，引起熒光檢測信號(hào)的循環(huán)放大。本方法避免了8-17E 脫氧核酶與底物鏈的修飾，最低可以檢測出水溶液中1.0×10-10 mol/L Pb2+ ，并在2 倍濃度的Zn2+ ，以及5 倍濃度的其它干擾金屬離子存在的情況下對(duì)Pb2+ 顯示出良好的選擇性。本方法對(duì)環(huán)境水樣中Pb2+ 的標(biāo)準(zhǔn)加樣回收率為96.1% ～108.0% 。

關(guān)鍵詞 鉛?; 脫氧核酶; 核酸切割酶; 熒光循環(huán)放大檢測