歐陽(yáng)珂珮，劉生峰，肖進(jìn)文，李應(yīng)國(guó)，李洪軍，賀稚非

(1.西南大學(xué)食品科學(xué)院，重慶400715; 2.重慶出入境檢驗(yàn)檢疫局，重慶400020; 3.重慶市進(jìn)出口食品安全工程技術(shù)研究中心，重慶400020 4.重慶市特色食品工程技術(shù)研究中心，重慶400715)

白色念珠菌檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

歐陽(yáng)珂珮1，2，3，4，劉生峰2，3，肖進(jìn)文2，3，李應(yīng)國(guó)2，3，李洪軍1，4，*，賀稚非1，4

(1.西南大學(xué)食品科學(xué)院，重慶400715; 2.重慶出入境檢驗(yàn)檢疫局，重慶400020; 3.重慶市進(jìn)出口食品安全工程技術(shù)研究中心，重慶400020 4.重慶市特色食品工程技術(shù)研究中心，重慶400715)

白色念珠菌是導(dǎo)致真菌感染的重要致病菌之一，文章對(duì)白色念珠菌的生物學(xué)特性和檢測(cè)方法進(jìn)行了綜述。目前我國(guó)尚未出臺(tái)食品中白色念珠菌檢測(cè)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。本文通過對(duì)白色念珠菌檢測(cè)技術(shù)發(fā)展歷程的梳理，旨在為廣大科研工作者、行業(yè)法規(guī)制定者提供一些參考依據(jù)。

白色念珠菌，特性，檢測(cè)方法

1 白色念珠菌的生物學(xué)特性

1.1 一般特性

白色念珠菌(Candida Albicans)又稱白假絲酵母菌，廣泛存在于自然界，也存在于正常人口腔、上呼吸道、腸道及陰道，一般在正常機(jī)體中數(shù)量少，不引起疾病，為條件致病性。當(dāng)機(jī)體抵抗力降低或菌群失調(diào)時(shí)，白色念珠菌就會(huì)繁殖并改變生長(zhǎng)形式侵入人體細(xì)胞從而引起疾病。

白色念珠菌細(xì)胞呈卵圓形，致病性菌株細(xì)胞呈現(xiàn)假菌絲。該菌在血瓊脂或沙保氏瓊脂上，以37℃或室溫孵育2～3d后，生成灰白乳酪樣菌落，涂片鏡檢，可看到表層為卵圓形芽生細(xì)胞，底層有較多假菌絲。若接種于4%玉蜀黍瓊脂上，室溫孵育3～5d可見假菌絲，芽生孢子，厚膜孢子。白色念珠菌對(duì)熱的抵抗力不強(qiáng)，加熱至60℃，1h后即可死亡。但對(duì)干燥、日光、紫外線及化學(xué)制劑等抵抗力較強(qiáng)。

1.2 白色念珠菌的致病性研究

1.2.1 致典型癥狀及易感人群 白色念珠菌引起淺表性感染和深部感染，該種菌引起的相關(guān)疾病有皮膚念珠菌病，包括指(趾)間糜爛，多見于長(zhǎng)期從事潮濕作業(yè)的人、念珠菌性間擦疹多見于小兒和肥胖多汗者、丘疹形念珠菌病多見于肥胖兒童、念珠菌性甲溝炎、甲床炎多見于指甲;粘膜念珠菌病，包括多見于嬰幼兒患者的鵝口瘡，以及生殖器念珠菌病;而深部感染疾病則包括內(nèi)臟念珠菌病，該感染可累及全身所有內(nèi)臟器官，其中以腸念珠菌病及肺念珠菌病較常見。此外，可引起泌尿道炎、腎孟腎炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎等，偶見其引發(fā)念珠菌性敗血癥。念珠菌疹，即念珠菌及其代謝產(chǎn)物引起的皮膚變態(tài)反應(yīng)，主要損害為成群的無菌性水皰，多見于手指間;也可見到銀屑病樣、玫瑰糠疹樣、脂溢性皮炎樣、蕁麻疹樣、離心性環(huán)狀紅斑樣損害。

1.2.2 導(dǎo)致念珠菌感染的因素 念珠菌病主要是白色念珠菌引起的急性、亞急性或慢性感染，是最常見的真菌病。臨床癥狀錯(cuò)綜復(fù)雜，急緩不一，兒童多為急性繼發(fā)性感染。該病常侵犯皮膚、粘膜，也可引起內(nèi)臟或全身感染。所有內(nèi)臟感染常繼發(fā)于多種慢性消耗性疾病，且有長(zhǎng)期應(yīng)用廣譜抗生素、皮質(zhì)激素及化療、放療等誘發(fā)因素。近年來隨著大劑量抗生素、激素、免疫抑制劑的應(yīng)用，以及器官移植術(shù)的開展，其發(fā)病率漸趨增高，并可危及生命造成嚴(yán)重后果。

除了引起淺表性感染的酵母型之外，所謂的假菌絲體是類酵母真菌的另一種形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。芽管和假菌絲體的產(chǎn)生主要發(fā)生在侵入性感染的病人體內(nèi)。此外，念珠菌屬酵母菌能夠產(chǎn)生和分泌多種酶，使兼性病原體微生物能夠穿透血管和粘膜屏障。念珠菌屬各種病菌一般是通過污物的污染進(jìn)行傳播的，主要的入口是鼻咽通道，但脂肪酸、酸性pH和敵對(duì)性菌群等也會(huì)引起皮膚表面抑制真菌感染的功能障礙，從而導(dǎo)致淺表性的念珠菌病。病菌感染粘膜后，侵入性的念珠菌病會(huì)從胃腸道向外傳播。

2 白色念珠菌的檢測(cè)方法介紹

白色念珠菌的檢測(cè)方法主要分為傳統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)合生理生化鑒定以及基于分子生物學(xué)所發(fā)展的快速檢測(cè)方法兩種。

2.1 以微生物培養(yǎng)為主的傳統(tǒng)檢測(cè)方法

目前國(guó)內(nèi)食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)白色念珠菌的檢測(cè)幾乎全是利用白色念珠菌的形態(tài)特征和生理生化特性，用微生物培養(yǎng)的傳統(tǒng)方法對(duì)白色念珠菌進(jìn)行分離鑒定的方法。

對(duì)于食品中白色念珠菌的檢測(cè)，目前主要參照參考文獻(xiàn)［1］中所述標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行檢測(cè)。首先增菌培養(yǎng)，取供試液10mL(相當(dāng)于供試品 1g、1mL、10cm2)直接或處理后接種至適量(不少于100mL)的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48～72h。然后，取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48h(必要時(shí)延長(zhǎng)至72h)。根據(jù)菌落形態(tài)初步判定。

白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈乳白色，偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深，質(zhì)地變硬或有褶皺。若平板上無菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出白色念珠菌。如平板上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選2～3個(gè)菌落分別接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)24～48h(必要時(shí)延長(zhǎng)至72h)。若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出白色念珠菌。若平板上生長(zhǎng)的菌落為綠色或翠綠色，挑取相符或疑似的菌落接種于1%聚山梨酯80－玉米瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24～48h。取培養(yǎng)物進(jìn)行染色、鏡檢及芽管實(shí)驗(yàn)。此外，也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道了白色念珠菌在各類培養(yǎng)基上的菌落特征，便于用以檢驗(yàn)判定該菌存在。

白色念珠菌在1%聚山梨酯80－玉米瓊脂培養(yǎng)基上呈灰色或奶油色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。白色念珠菌在血平板上呈灰色或奶油色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。白色念珠菌在TTC(氯化三苯四氮唑－沙氏瓊脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)基平板上呈乳白色或淡紅色，菌落小，其他酵母菌為紅色、熱帶念珠菌為深紅色或紫色。通過培養(yǎng)法初步鑒定后，要用白金鉺挑取少量的培養(yǎng)物，進(jìn)行芽管試驗(yàn)進(jìn)行最終判定。

中國(guó)藥典(2010版)中對(duì)四種推薦使用培養(yǎng)基做了比較，其中除了沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基只具有促生長(zhǎng)能力外，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、1%聚山梨酯80－玉米瓊脂培養(yǎng)基、念珠菌顯色培養(yǎng)基都具有促生長(zhǎng)能力與指示能力。其中念珠菌顯色培養(yǎng)基還具有抑制大腸埃希菌的能力。

目前山東出入境檢驗(yàn)檢疫局等單位正在制定進(jìn)出口食品白色念珠菌的檢測(cè)方法行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。包括中國(guó)藥典中對(duì)白色念珠菌的檢測(cè)都是以上述經(jīng)典培養(yǎng)方法為基礎(chǔ)，其準(zhǔn)確性、快速性均有提升空間。

而國(guó)外關(guān)于利用微生物培養(yǎng)法鑒定白色念珠菌的研究在上世紀(jì) 90年代有所報(bào)道。在 1994年P(guān)atricia Rousselle和 Anne－Marie Freydiere［2］采用Albicans ID和Fluoroplate兩種商業(yè)上可用的固體培養(yǎng)基進(jìn)行白色念珠菌的快速鑒定。發(fā)色體或熒光團(tuán)被放置在這兩種培養(yǎng)基的底層，以便于檢測(cè)和鑒定白色念珠菌。實(shí)驗(yàn)對(duì)723個(gè)酵母菌株及352個(gè)白色念珠菌菌株的1006個(gè)臨床樣本進(jìn)行了檢測(cè)。這兩種培養(yǎng)基的靈敏度為別為93.8%及98.6%，并且對(duì)熱帶念珠菌有5個(gè)假陽(yáng)性反應(yīng)，無假陰性反應(yīng)。

2.2 以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的快速分析法

自上世紀(jì)80年代起，以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的快速分析法已經(jīng)開始興起，近年來在醫(yī)學(xué)界對(duì)白色念珠菌的檢測(cè)已經(jīng)深入到亞型之間的鑒定，并且有相當(dāng)快速的檢測(cè)方法，能夠區(qū)分死菌活菌、致病型非致病型，從而提高了白色念珠菌的檢測(cè)精度和檢測(cè)效率。

上世紀(jì)末，關(guān)于白色念珠菌的檢測(cè)方法有濕片法、免疫血清檢查、培養(yǎng)觀察菌落特征和菌體形態(tài)及生化特性檢驗(yàn)、動(dòng)物接種等。濕片法敏感性較低(30%～50%)［3］，由于白色念珠菌可在人體的一些部位正常寄居，其孢子可存在于正常人體［4］并與人體某些組織間有共同抗原［5］，使免疫血清鑒定缺乏特異性。并且由于白色念珠菌存在兩種表型:酵母相和菌絲相，前者為芽孢和出芽，為無癥狀寄居的表型;后者為芽管和菌絲，為致病狀態(tài)的表型;醫(yī)學(xué)上檢測(cè)必須同時(shí)觀察到孢子和菌絲才有診斷意義。動(dòng)物接種等方法較為可靠，但手續(xù)繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)早期診斷不利，難以推廣。因此上世紀(jì)已經(jīng)有相關(guān)分子生物學(xué)的先進(jìn)手段應(yīng)用于深部白色念珠菌感染病患的檢測(cè)。

之后，隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入，手段的不斷提高，新的技術(shù)也普遍應(yīng)用于白色念珠菌的檢測(cè)中，并且出現(xiàn)了許多能夠靈敏快速的區(qū)分鑒定出白色念珠菌及念珠菌屬其他菌種的方法。

2.2.1 白色念珠菌基因研究為快速分析法的建立提供理論依據(jù) 早在2003年人類已經(jīng)完成了白色念珠菌的全基因測(cè)序，這也是迄今為止第一個(gè)，也是唯一一個(gè)完成測(cè)序的致病真菌微生物。有關(guān)白色念珠菌的功能基因的相關(guān)研究自上世紀(jì)末起也在不斷的深入。這些相關(guān)基因的報(bào)道及其作用機(jī)制的闡明對(duì)白色念珠菌快速檢測(cè)無疑提供了非常強(qiáng)大的理論保障。白色念珠菌的功能基因包括結(jié)構(gòu)基因，形態(tài)相關(guān)基因、代謝相關(guān)基因、基因信息傳遞基因、致病基因、耐藥基因等［6］。相關(guān)基因所控制的生化反應(yīng)以及表達(dá)產(chǎn)物都為分析方法的建立提供了理論依據(jù)。

目前研究較多并應(yīng)用于分析檢測(cè)方面的熱點(diǎn)主要集中在粘附性蛋白相關(guān)的基因、致病性基因及結(jié)構(gòu)基因及其表達(dá)所涉及蛋白等方面。

早在1996年Spreghini［7］等在研究白色念珠菌表面玻連蛋白(VN)受體時(shí)發(fā)現(xiàn)，αvβ3或αvβ5整合素的抗體可抑制白色念珠菌黏附于波連蛋白(VN)，從而推測(cè)αvβ3和αvβ5整合素作為白色念珠菌表面的VN受體介導(dǎo)黏附。2001年Klotz［8］等發(fā)現(xiàn)白色念珠菌表面存在一種醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，ADH)并推測(cè)其為介導(dǎo)白色念珠菌黏附于FN和VN的酶類。

1999年Kinneberg［9］等認(rèn)為白色念珠菌INT1基因?qū)ζ渚z生長(zhǎng)、黏附作用和致病性均有作用。而2002年Wiesner等［10］研究INT1變異的白色念珠菌時(shí)更進(jìn)一步的發(fā)現(xiàn)，INT1基因?qū)甑酿じ叫缘挠绊懪c菌株所處的形態(tài)有關(guān)，當(dāng)菌株處于酵母態(tài)時(shí)，INT1基因促進(jìn)起黏附作用，但當(dāng)菌株呈菌絲態(tài)時(shí)則沒有作用。

1999年Stmdstrom［11］認(rèn)為HWP1作為芽管、菌絲中特有的黏附素，是通過轉(zhuǎn)谷丙酰氨酶(transglutaminase，TGase)機(jī)制介導(dǎo)白色念珠菌與頰黏膜上皮黏附的。2002年Sundstrom［12］研究了三種(Hwp1p、Ala1p/Als5p、Als1p)來自白色念珠菌的結(jié)構(gòu)相關(guān)性黏附素并闡明了其黏附作用的機(jī)制。Fu等［13］發(fā)現(xiàn)白色念珠菌可同時(shí)調(diào)節(jié)菌絲生長(zhǎng)與細(xì)胞間凝集的糖蛋白Als1p，該蛋白基因的表達(dá)受轉(zhuǎn)錄因子Efg1p控制。Gaur等［14］研究了Ala1/Als5p基因及其粘附特性，得出特定氨基酸對(duì)于Ala1/Als5p基因的介導(dǎo)黏附有著識(shí)別作用。Zhang等［15］則認(rèn)為ALS基因家族所編碼的蛋白參與介導(dǎo)白色念珠茵與內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞的黏附。

2.2.2 上世紀(jì)白色念珠菌快速分析法的發(fā)展軌跡

2.2.2.1 以核酸為目標(biāo)的快速檢測(cè)方法 早在1993年，ANN R.HOLMES［16］等人就利用白色念珠菌中rRNA編碼區(qū)互補(bǔ)的引物進(jìn)行PCR，以此來檢測(cè)含有不同念珠菌種的血液樣本中菌種的DNA。他們研究并報(bào)道了一個(gè)只在白色念珠菌的DNA中擴(kuò)增出來的684bp的片段，白色念珠菌檢測(cè)的敏感度為(15± 5)CFU/mL血液。同年，YOZO MIYAKAWA等人［17］研究了一種利用PCR來擴(kuò)增一個(gè)種間特異含有125bp堿基的DNA片段。DNA模版中還加入了熱帶念珠菌和能跟兩種細(xì)胞都反應(yīng)的抗體。這種組合將白色念珠菌的檢測(cè)靈敏度提高到了3CFU/0.1mL。1994年ANN R.HOLMES［16］又報(bào)道了基于5S rDNA的PCR擴(kuò)增和相鄰DNA區(qū)域的基因(NTS)所設(shè)計(jì)的靈敏、快速檢測(cè)白色念珠菌或血液樣本中的其他念珠菌的方法。

除了普通PCR技術(shù)的應(yīng)用，分子雜交以及熒光探針也出現(xiàn)在早期白色念珠菌快速分析法的研究中。1996年Axel Lischewski，Rudolf I.Amann［18］設(shè)計(jì)了一條能與白色念珠菌和熱帶念珠菌185rRNA相結(jié)合的熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針。應(yīng)用該條探針進(jìn)行熒光原位雜交能夠很容易的將白色念珠菌從其它細(xì)胞中區(qū)分開來。

隨著生物學(xué)上對(duì)白色念珠菌研究的進(jìn)一步深入，相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)，給白色念珠菌在21世紀(jì)能夠被廣泛深入的研究打下了良好基礎(chǔ)。

2.2.2.2 以蛋白質(zhì)等其他大分子為目標(biāo)的快速檢測(cè)方法 除了利用基因作為檢測(cè)對(duì)象的分析方法的建立外，也有許多研究者將目光投向了具有免疫特性的功能蛋白與受體上。

1999年Mardh PA等人［19］于2002年報(bào)道了直接免疫熒光法檢測(cè)白色念珠菌，直接免疫熒光技術(shù)與間接免疫熒光技術(shù)相比，前者背景染色淺、簡(jiǎn)單易行、用時(shí)少、易于區(qū)分正常寄居和致病狀態(tài)。目前這種方法被推廣應(yīng)用于婦女白色念珠菌陰道炎的檢測(cè)中。

2.3 白色念珠菌快速檢測(cè)方法的發(fā)展趨勢(shì)

近年來，早期的白色念珠菌快速檢測(cè)方法不斷地優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件、簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟、降低檢測(cè)成本。此外，新的檢測(cè)方法向著速度更快、檢測(cè)限更低、通量更高、能夠同時(shí)檢測(cè)多種微生物的方向發(fā)展，熒光定量PCR、RNA印跡雜交等諸多新技術(shù)已越來越普遍地應(yīng)用于白色念珠菌的快速檢測(cè)中來。

2.3.1 以PCR技術(shù)為核心的新型PCR檢測(cè)方法蓬勃發(fā)展 2003年盧雪紅、羅萍等［20］應(yīng)用復(fù)合 PCR法，檢測(cè)老年人未感染的及已感染的腹膜透出液中的金黃色葡萄球菌和白色念珠菌。復(fù)合PCR法與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法相比具有快速、特異、敏感的優(yōu)點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)近年來老年人腹透液中白色念珠菌感染率明顯增高。

Mirhendi等［21］報(bào)道了一種新的引物，可以同時(shí)用于普通PCR和PCR－RFLP方法檢測(cè)白色念珠菌，當(dāng)PCR用于檢測(cè)純化的DNA時(shí)，此方法的精確度大約為1pg真菌DNA。

Kyle T.Beggs，Ann R.Holmes等人［22］設(shè)計(jì)了針對(duì)口腔中白色念珠菌反轉(zhuǎn)錄的特異性引物，對(duì)白色念珠菌mRNA進(jìn)行了檢測(cè)。

Silvia Arancia等人［23］報(bào)道了利用CaMP65特異性探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析，建立了一種快速檢測(cè)和量化白念珠菌的生物樣品(血、尿和血清)的方法。

Grzegorz Kofla等人［24］在研究中利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(TaqMan)試驗(yàn)做了簡(jiǎn)短的報(bào)道，對(duì)MDR1，CDR1和ERG11的基因表達(dá)水平的量化分析。

Huaguo Xiang等人［25］設(shè)計(jì)了一對(duì)通用引物，其靶向從28S rRNA到5.8S rRNA的基因區(qū)域ITS2區(qū)，用來擴(kuò)增6種PCR念珠菌屬的致病菌包括C.albicans，C.tropicalis，C.krusei，C.glabrata，C. parapsilosis，C.dubliniensis。實(shí)驗(yàn)結(jié)果該方法檢出率和靈敏度遠(yuǎn)高于培養(yǎng)法和濕片法。

2008年劉有旺等人［26］報(bào)道了一種快速檢測(cè)奶牛酵母菌性乳腺炎的方法，研究人員根據(jù)白色念珠菌ITS1－ITS2部分的保守序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物，建立了PCR檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)表明，方法的特異性為100%，敏感性檢測(cè)的最低濃度為:1.25×103CFU/mL，該方法具有快速、準(zhǔn)確和特異的優(yōu)點(diǎn)。

2.3.2 結(jié)合物理新方法的應(yīng)用嘗試 2009年Rafael Mulero等人［27］提出了一種新的檢測(cè)方法，它利用恒定電流通過微孔，測(cè)量當(dāng)單獨(dú)的念珠菌改變位置或通過微管時(shí)，外部電流形態(tài)的變化，從而計(jì)算出其濃度含量。這種方法在白色念珠菌的檢測(cè)上尚屬首次。也成為白色念珠菌快速檢測(cè)法研究的新視角。

3 結(jié)論

國(guó)內(nèi)外食品藥品中常檢出白色念珠菌，該菌的致病性已引起國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注，因此，在食品藥品中檢測(cè)白色念珠菌具有重要的衛(wèi)生意義。目前食品中容易被白色念珠菌所污染的第一大類產(chǎn)品就是乳制品。由于奶牛酵母菌性乳腺炎大多數(shù)是由白色念珠菌引起的，因此感染該病癥的牛所產(chǎn)牛乳有可能也帶有致病菌。此外藥食同源的中藥材以及其制品中也易帶菌。

國(guó)外已對(duì)該致病菌做了相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)分析，如《日本藥典》(第15版)對(duì)用前需加開水的草藥的微生物指標(biāo)中都規(guī)定了(10g樣品中)不能檢出白色念珠菌的限量要求。但我國(guó)目前仍未正式出臺(tái)相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，因此迫切需要制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以便于我國(guó)食品藥品檢驗(yàn)監(jiān)管，從而保障我國(guó)人民食品藥品安全，并促進(jìn)進(jìn)出口食品、中藥材安全衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際接軌。目前國(guó)家檢驗(yàn)檢疫局已經(jīng)開始著手制定相關(guān)行業(yè)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，相信在不久的將來，白色念珠菌的檢測(cè)水平的提高將推動(dòng)我國(guó)食品安全上升到新的高度。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.第二部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄103－107.

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Research progress on the detection method of Candida albicans

OUYANG Ke－pei1，2，3，4，LIU Sheng－feng2，3，XIAO Jin－wen2，3，LI Ying－guo2，3，LI Hong－jun1，4，*，HE Zhi－fei1，4
(1.College of Food Science，Southwest University，Chongqing 400715，China; 2.Chongqing Entry＆Exit Inspection and Quarantine Bureau，Chongqing 400020，China; 3.Chongqing Import and Export Food Safety Engineering Technology Research Center，Chongqing 400020，China; 4.Chongqing Special Food Programme and Technology Research Center，Chongqing 400715，China)

Candida albicans is one of the most important pathogens in fungal infection.The progresses in the recent studies related to the biologic characterizations and the detcction method of Candida albicans was reviewed.At present our country had not yet been introduced food of Candida albicans in testing standards.This article researched of Candida albicans detection technology development history，wanted to provide some references for the majority of researchers and industry law makers.

Candida albicans;characterizations;detection method

TS201.2

A

1002－0306(2012)08－0420－05

近年來，隨著人類環(huán)境、疾病等方面的改變，真菌類感染的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，白色念珠菌是導(dǎo)致真菌感染的重要致病菌之一，此外它還是重要的食源性致病菌。因此，開展白色念珠菌檢測(cè)方法研究在醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)、食品安全檢測(cè)領(lǐng)域都具有重要意義。目前，有關(guān)白色念珠菌快速檢測(cè)的相關(guān)報(bào)道多見于國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，在食品檢測(cè)方面尚屬空白，國(guó)內(nèi)外也沒有出臺(tái)相關(guān)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。目前國(guó)內(nèi)所采用的方法和正在制定的標(biāo)準(zhǔn)采用的方法也都是傳統(tǒng)方法，這些方法易產(chǎn)生假陽(yáng)性的情況，且耗時(shí)長(zhǎng)。采用PCR、熒光定量PCR方法不僅可以快速檢測(cè)白色念珠菌，還可以準(zhǔn)確定量。由于白色念珠菌是一種條件致病菌，其致病性與之存在量效關(guān)系，因此定量檢測(cè)方法的建立對(duì)判斷食品受污染的程度以及可食用性無疑有著重要的意義。另外，采用RT－PCR的方法可以快速鑒定區(qū)分白色念珠菌死菌與活菌，亦可了解食品原料加工中受污染的情況。

2011－12－16 *通訊聯(lián)系人

歐陽(yáng)珂珮(1986－)，女，碩士研究生，研究方向:食品生物技術(shù)。

重慶市科委攻關(guān)項(xiàng)目(CSTS2011AC1057);質(zhì)檢公益項(xiàng)目(201010045)。