李君海，徐 建，楊 波，王婷婷

(吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司，吉林 長春 130012)

通脈顆粒標準收載于衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第20冊(標準號：WS3-B-0824-91)，由川芎、葛根、丹參3味藥材組成，具有活血通脈的功能，用于治療缺血性心腦血管疾病、動脈硬化、腦血栓、腦缺血、冠心病、心絞痛等缺血性心腦血管疾病。原標準中未有含量測定項，因此本文采用高效液相方法測定了通脈顆粒中葛根素的含量，方法簡單、快速、重現性好，可以達到全面控制通脈顆粒質量的目的。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UItimate3000 紫外檢測器(德國戴安)；安捷倫1200紫外檢測器(美國安捷倫)；Meltter AE240雙量程電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)，AB204-E電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；色譜柱：依利特 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱。

1.2 試藥 甲醇為色譜純，水為重蒸水，乙醇為分析純。通脈顆粒(由修正藥業(yè)集團股份有限公司提供)；葛根素對照品(批號：110752-200511規(guī)格：20mg 供含量測定用)從中國食品藥品檢定研究院購入。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：依利特C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇-水(22∶78)，流速：1.0 mL/min，檢測波長：254 nm，柱溫：30 ℃。理論板數按葛根素峰計算應不低于4 000。葛根素峰與其他雜質峰分離度不小于1.5。

2.2 對照品溶液的制備 取葛根素對照品約8.5 mg，精密稱定為8.48 mg，置50 mL量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含葛根素0.084 8 mg)。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率150 W，頻率40 KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照樣品的制備 按處方稱取除葛根外的各藥，按其制備工藝制成空白制劑，再按“2.3”項下方法制成陰性對照樣品溶液。

2.5 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照樣品溶液各5 μL，在上述色譜條件下，分別注入液相色譜儀。結果：葛根素與樣品中其他組分分離較好(與相鄰峰的分離度均>2.0)，陰性對照樣品在與葛根素對照品相同保留時間處未見吸收峰出現，表明陰性對照無干擾。

2.6 線性關系范圍 精密吸取對照品溶液1、3、5、7、10、12、15、20 μL，按上述色譜條件分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(Y)，以進樣量為橫坐標(X)進行線性回歸。標準曲線方程為Y=6.06X+0.0157 (r=1)，結果表明：葛根素在0.084 8～1.69 6 μg范圍內呈良好線性關系。

2.7 精密度試驗 取本品(批號:20100605)，由不同人員、不同時間，使用不同高效液相色譜儀，按2.3項下方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件操作，測定葛根素的含量。結果：葛根素平均含量為6.71 mg/g，RSD%=0.4%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一批供試品溶液(批號20100605)5 μL，分別于制備后0、4、8、12、18、24 h注入液相色譜儀中，測得葛根素峰面積。結果：葛根素峰面積平均值為48.479，RSD=0.17%，表明在24 h內樣品的穩(wěn)定性良好。

2.9 重復性試驗 取同一批樣品(批號20100605)6分，精密稱定，按2.3項下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定葛根素含量。結果：葛根素平均含量為6.73 mg/g，RSD=0.28%，表明方法的重現性良好。

2.10 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量同一批號的樣品(批號20100605,葛根素含量6.73 mg/g)0.5g，共6分，分別精密加入葛根素對照品溶液(0.376 mg/mL)8 mL。按2.3項下方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件測定葛根素含量，計算回收率。結果供試品中葛根素的平均回收率為97.47%，RSD=1.00%，此方法準確可行。

3 討論

3.1 流動相的選擇[1]曾考察了以下流動相系統(tǒng)：甲醇-水(25∶75)、甲醇-水(22∶78)進行比較，結果以甲醇-水(22∶78)為流動相，系統(tǒng)參數最佳。

3.2 系統(tǒng)適用性實驗考察 分別采用了3根不同品牌色譜柱(依利特-C18柱、Thermo-C18柱、Welch naterials-C18柱)進行試驗，結果表明系統(tǒng)適用參數符合要求。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:312.