徐 磊，寧蓬勃，郭抗抗，董 平，董福軍，張彥明＊

（1.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西楊凌712100；2.靖邊縣動物疫病預防控制中心，陜西靖邊718500）

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV）于1974年首次在豬腎（porcine kidney，PK）細胞系中被發(fā)現(xiàn)［1］。PCV為圓環(huán)病毒科的成員，是動物病毒中最小的病毒，能夠在哺乳動物細胞中自主復制。病毒粒子為二十面體，無囊膜，直徑17 nm。PCV有2種基因型，PCV－1在世界范圍的豬群內(nèi)廣泛存在，被認為對豬沒有致病性，不會引起豬的任何臨床疾??；PCV－2于20世紀90年代發(fā)現(xiàn)于加拿大，是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）的病原體，并可以引起多種豬圓環(huán)病毒相關性疾?。≒orcine circovirus－associated diseases，PCVADs），主要侵害對象為斷奶仔豬和育肥豬。

PCV的基因組是大小1.7 kb的單鏈環(huán)狀DNA分子，包含ORF1和ORF2兩個主要的閱讀框（open reading frame，ORF）。ORF1稱為 Rep基因，編碼由314（PCV－1）、312（PCV－2）個氨基酸組成、大小為35.7 ku的蛋白質(zhì)，與病毒復制有關；ORF2稱為cap基因，編碼由233個氨基酸組成、大小為27.8 ku的衣殼蛋白，是病毒主要的免疫原性蛋白，與PCV－2特異性中和抗體產(chǎn)生密切相關，是研制針對PCV－2新一代疫苗的研究熱點。除了ORF1和ORF2，有研究發(fā)現(xiàn)ORF3表達的蛋白雖然不是病毒在細胞中復制時所必須的，但與病毒引發(fā)細胞凋亡，從而使機體發(fā)病有關［2］。

在世界上養(yǎng)豬業(yè)比較發(fā)達的國家，PCV－2被認為是給養(yǎng)豬業(yè)帶來損失最多的病原體之一。美國獸醫(yī)協(xié)會建議使用“豬圓環(huán)病毒相關疾病”（Porcine circovirus－associated disease，PCVAD）這個涵蓋性術語來描述與PCV－2感染有關的疾病綜合征，其主要癥狀包括消瘦，死亡率增加，呼吸道癥狀，腸炎，繁殖失敗，豬皮炎腎病綜合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS），但是還沒有試驗證據(jù)顯示PCV－2感染和PDNS的發(fā)生直接相關。在歐洲，文獻中使用豬圓環(huán)病毒病（Porcine circovirus disease，PCVD）的表述更為常見。在試驗條件下，豬單獨感染PCV－2并不會引起嚴重的PCVAD臨床癥狀，只有與豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、豬細小病毒（Porcine parvovirus，PPV）、豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopnemoniae，Mhyo）其中的一個或多個混合感染才能誘導產(chǎn)生明顯的PCVAD臨床癥狀。但是，PCV－2單獨感染剖腹產(chǎn)－不吃初乳（Caesarean－derived，colostrum－de－prived，CD／CD）豬或者無菌豬，可以導致嚴重的PCVAD 臨床癥狀［3］。

近年來至少鑒別出了3種有明顯區(qū)別的PCV－2基因 型，PCV－2a、PCV－2b 和 PCV－2c。PCV－2a和PCV－2b都不同程度的與PCVAD的發(fā)生相關；PCV－2c僅在丹麥的一些無臨床癥狀的豬群中有過報道［4］。2003年以前，歐洲和中國都出現(xiàn)過PCV－2a和PCV－2b，美國和加拿大只出現(xiàn)過PCV－2a。自2003年以來，伴隨著PCVAD臨床癥狀越來越嚴重，商品化豬群中的優(yōu)勢亞型逐漸變成了PCV－2b。PCV－2a和PCV－2b序列上的差異主要存在于cap基因上，包括一個“特征性氨基酸模體”區(qū)域［5］。盡管還沒有識別PCV－2a和PCV－2b的抗原結構，但目前基于PCV－2a的疫苗都能夠提供針對PCV－2b的交叉保護。就針對田間PCV－2b野毒株的保護力來說，現(xiàn)在還不確定基于PCV－2b的新型疫苗是否能夠提供比目前基于PCV－2a的疫苗更高的保護力。在此，我們將討論目前市面上商業(yè)化疫苗的效果和一些新型實驗性疫苗的研究進展。

1 商品化疫苗

1.1 現(xiàn)有的商品化疫苗

2004年，第一個商品化的PCV－2疫苗在法國和德國面世。目前市場上用于預防豬群中PCVAD發(fā)生的商品化疫苗一共有5種，其分別是Merial生產(chǎn)的 Circovac HT5SS?，Boehringer Ingelheim 生產(chǎn)的Ingelvac CircoFLEX?，Intervet（Merck）生產(chǎn)的Circumvent?，Schering－Plough（Merck）生 產(chǎn) 的 Porcilis?PCV，Pfizer生產(chǎn)的 FosteraTMPCV（Suvaxyn?PCV－2 One Dose?升級版），這些都是基于PCV－2a基因型的生產(chǎn)的。

Circovac?（Merial）是用滅活的 PCV－2a病毒生產(chǎn)而成的，可以用于免疫大于3周齡的健康仔豬，也可以用于免疫健康經(jīng)產(chǎn)母豬。用Circovac?免疫仔豬一般需要一次肌肉內(nèi)注射，免疫后備母豬或者經(jīng)產(chǎn)母豬一般需要在交配前3周～4周免疫2次，分娩前2周～4周加強免疫1次。

Ingelvac CircoFLEX?（Boehringer Ingelheim），Circumvent?（Intervet／Merck），和 Porcilis?PCV（Schering－Plough／Merck）都是基于桿狀病毒中表達的PCV－2a Cap蛋白生產(chǎn)的亞單位疫苗，也已經(jīng)在市場上銷售，都可用于免疫大于3周齡的健康仔豬。這種疫苗是將PCV－2基因組中編碼Cap蛋白的片段克隆到昆蟲桿狀病毒中，通過培養(yǎng)昆蟲桿狀病毒，快速、大量獲得具備免疫原性的PCV－2Cap蛋白，再將其制成疫苗。大量田間試驗表明，該類疫苗可為仔豬提供良好的免疫保護。

FosteraTMPCV （Pfizer Animal Health Inc.）最近也已經(jīng)進入市場，它是Suvaxyn?PCV－2 One DoseTM（Fort Dodge Animal Health Inc.）的升級版。FosteraTMPCV疫苗是滅活的減毒嵌合病毒，其是將PCV－2a的cap基因克隆入無致病性PCV－1基因組骨架中。用FosteraTMPCV免疫大于3周齡的仔豬需只要一次肌肉內(nèi)注射，就能預防PCV－2感染和其引起的毒血癥。

1.2 現(xiàn)有商品化疫苗的免疫效果

在對照攻毒試驗中，市售PCV－2疫苗的效果已得到了廣泛的檢驗。由于普通豬單獨感染PCV－2產(chǎn)生的臨床癥狀有限，大多數(shù)研究疫苗免疫效果采用的攻毒模型是用幾種豬病原體混合感染。使用混合感染模型攻毒的優(yōu)點在于其更接近野外條件下的真實感染情況，現(xiàn)已經(jīng)知道有多種豬病原體能夠在混合感染后加劇PCVAD的臨床癥狀，例如與PRRSV的混合感染能夠加劇豬感染PCV－2，從而導致PCV－2在口鼻分泌液和排泄物中的含量增加。

用Suvaxyn?PCV－2 One Dose?免疫豬，免疫接種后（postvaccination，dpv）28 d后就有中和抗體產(chǎn)生。用PCV－2和PRRSV聯(lián)合攻毒，與未免疫組相比，免疫組肺臟損傷、排泄物排毒、血清中PCV－2含量降低、淋巴損傷顯著減少。有研究在不同動物模型上攻毒，比較 Suvaxyn?PCV－2 One Dose?，Circumvent?，CircoFLEX?的免疫效果，發(fā)現(xiàn)每一種疫苗都能夠誘導產(chǎn)生中和抗體。與未免疫的組相比，免疫組在 PCV－2、豬流感病毒（Swine influenza virus，SIV）和PRRSV聯(lián)合攻毒后血清中PCV－2病毒含量降低、淋巴損傷減少［6］。PCV－2 免疫時，PRRSV的感染狀況并沒有影響免疫效果，免疫已有PCV－2毒血癥的豬則能降低 PCV－2、PRRSV、PPV聯(lián)合攻毒后的PCV－2毒血癥和淋巴組織中PCV－2含量［7］。用Suvaxyn?PCV－2 One Dose?來免疫公豬后，以PCV－2和MHYO聯(lián)合攻毒，與未免疫豬相比，免疫豬血液中PCV－2含量減少，排泄物與精液中病毒排出量降低，從而可以預防嚴重臨床癥狀的發(fā)生［8］。 用 Suvaxyn?PCV－2 One Dose?或 者 CircoFLEX?免疫豬，與未免疫的豬相比，免疫豬血清中病毒含量降低，淋巴損傷減少，增重提高。

很多研究都是在對照試驗條件下研究疫苗免疫效果的，其都證明了這些商品化疫苗在對抗PCV－2感染時的良好效果。在普通豬上使用能夠復制PCVAD臨床癥狀的混合感染模型，證明免疫接種能夠有效的降低PCV－2復制到系統(tǒng)水平的能力。所以說，即使豬群在復雜外界條件下可能暴露于各種感染性的豬病原體，使用市售疫苗而產(chǎn)生的保護性免疫可以很好的保護豬群。

2 實驗性疫苗

現(xiàn)在市面上的商品化PCV－2疫苗都是基于PCV－2a基因型的且效果確實，但是現(xiàn)在世界范圍內(nèi)豬群PCV－2的主要流行亞型是PCV－2b基因型。盡管亞單位和滅活苗有其穩(wěn)定和安全的優(yōu)點，但是一些新的疫苗技術已經(jīng)被用于誘導產(chǎn)生針對PCV－2的免疫反應，從而預防PCV－2感染。與滅活苗或亞單位苗相比，改良減毒活疫苗（modified live－attenuated vaccines，MLV）能夠刺激機體產(chǎn)生細胞免疫反應和體液免疫反應；DNA疫苗和其他一些載體疫苗亦具有將PCV－2抗原遞呈給宿主的能力，具有發(fā)展為新型疫苗的巨大潛力。

2.1 改良減毒活疫苗

一般來說，改良減毒活疫苗能同時誘導產(chǎn)生細胞免疫和體液免疫反應，與現(xiàn)在的亞單位苗或滅活苗相比，能產(chǎn)生更好的保護力。有報道稱，在細胞上連續(xù)傳代使PCV－2野型減毒的方法是可行的，PCV－2在PK－15細胞上傳代120次之后，cap基因的兩個核苷酸發(fā)生了突變。傳代120次的病毒（P120）包含了cap基因上P110A和R191S的突變，這種突變能夠提高PCV－2在體外的生長能力，但又使其在體內(nèi)是減毒的，說明P120是MLV很有潛力的候選毒株［9］。但是這種策略的缺點在于MLV有恢復到致病性表型的可能性，并最終可能導致豬發(fā)病。

研制嵌合疫苗是一種更合理更安全的方法。盡管主要的表型不同，無致病性的PCV－1和與PCVAD相關的PCV－2是遺傳學上非常接近的病毒，有著相似的基因組結構，而且有報道顯示PCV－1和PCV－2的復制基因（rep）是可以互換的。有人將PCV－2a型的ORF2克隆到缺失ORF2的PCV－1型的骨架中，獲得PCV1－2a重組嵌合病毒，這種嵌合病毒是減毒的但具有感染性［10］。用滅活的PCV1－2a免疫豬后，對免疫豬群用PCV－2a野毒攻毒，結果表明滅活的PCV1－2a嵌合病毒能夠誘導產(chǎn)生針對PCV－2a的保護性免疫應答［9］。還有其他研究表明活的嵌合病毒也是減毒的，具有免疫原性且遺傳特性穩(wěn)定，能夠提供與現(xiàn)在市售的滅活苗和亞單位苗相似的針對 PCV－2a和PCV－2b的保護力［7］。另一種制備嵌合病毒的方法是將PCV－2b的ORF2克隆到PCV－1骨架中。因為一些流行病學方面的研究表明，自然感染PCV－2的豬群中流行亞型是PCV－2b，且PCV－2b的毒力似乎比PCV－2a更強一些，進一步的系統(tǒng)發(fā)育評估表明，PCV－2a在進化上比PCV－2b更加古老，從PCV－2a到PCV－2b的轉變與PMWS的發(fā)生密切相關［4］。而現(xiàn)在市場上的商品化疫苗都是基于PCV－2a研制而成的滅活疫苗或重組疫苗。因此，也有人用PCV－2b的ORF2替換PCV－1的ORF2，包裝出了一種新的嵌合病毒。這種嵌合病毒在動物體內(nèi)是減毒的，能夠誘導機體產(chǎn)生免疫保護，并且可以產(chǎn)生對PCV－2a的交叉保護，可以作為一種改良減毒活病毒疫苗［3］。在另一項研究中，用 嵌 合 PCV1－2b免疫豬后，以 PCV－2b、PRRSV、PPV三重感染模型聯(lián)合攻毒，顯示豬得到了良好保護［11］。嵌合的PCV1－2b病毒可以在豬群中正常接觸時傳播但依舊保持其減毒的特性，說明PCV1－2b的復制并沒有在PRRSV出現(xiàn)時變化。

將嵌合PCV1－2a和PCV1－2b作為改良減毒活疫苗的研究表明，嵌合PCV1－2a和PCV1－2b病毒是減毒的，能夠在普通豬上誘導廣泛的保護性免疫應答，作為一種改良活減毒疫苗具有很大的潛力。與通過連續(xù)細胞培養(yǎng)傳代來使PCV－2野型減毒的傳統(tǒng)方法不同，嵌合PCV1－2病毒從根本上消除了人們對于MLV毒力返強的擔心。雖然現(xiàn)在市面上的PCV－2疫苗十分有效，但是在豬群中使用更安全的改良活減毒疫苗不但可以降低免疫成本，而且能同時誘導針對PCV－2的細胞免疫和體液免疫。

2.2 DNA疫苗

已經(jīng)有報道可以在再小鼠和豬模型上用DNA誘導特異性免疫反應，有人直接將帶有PCV－2基因組的質(zhì)粒DNA注射到豬的肝臟、淋巴結、肌肉中，可以產(chǎn)生與接種感染性病毒相同的感染。肌肉內(nèi)直接注射包含有二聚嵌合PCV1－2a基因組的質(zhì)粒DNA，也可以誘導豬產(chǎn)生保護性免疫［10］。因此，包含有二聚嵌合PCV1－2a基因組的質(zhì)粒DNA可以當做MLV，以DNA的形式直接投飼給豬，使用包含有二聚嵌合PCV1－2a基因組的質(zhì)粒DNA作為MLV有一個巨大的優(yōu)勢，其就是大規(guī)模生產(chǎn)高純度的質(zhì)粒DNA相對容易，因此可以降低免疫成本。

有報道稱，在豬和小鼠肌肉內(nèi)注射編碼PCV－2單個基因的質(zhì)粒DNA，同樣可以誘導針對PCV－2的免疫反應。帶有PCV－2 cap基因的質(zhì)粒（p ORF2）可以誘導豬產(chǎn)生保護性免疫［12］。也有在小鼠模型上研究DNA免疫的，在小鼠上用“基因槍”投遞p ORF2產(chǎn)生了PCV－2特異性抗體的血清轉化。在小鼠模型上，在刺激產(chǎn)生PCV－2特異性中和抗體時，遞呈p ORF2比單獨遞呈Cap蛋白更加有效。與未免疫的小鼠相比，用p ORF2免疫后的小鼠能降低攻毒后淋巴結腫的PCV－2病毒含量和微觀組織損傷。亦有報道稱，將編碼ORF1或ORF3的DNA與p ORF2同時投遞，將會干擾p ORF2單獨提供的保護性免疫［13］。有趣的是，另一個研究發(fā)現(xiàn)小鼠的DNA“基因槍”免疫方法在聯(lián)合投遞p ORF2／pORF3或p ORF1／p ORF2／p ORF3時效果最好［14］。因為管理政策上的原因，這些DNA疫苗的前景還不甚明朗。然而，美國境內(nèi)已經(jīng)批準了第一個農(nóng)業(yè)部（USDA）執(zhí)照的針對馬西尼羅熱病毒（Horse West Nile virus）的DNA疫苗，打開了未來相似疫苗進入市場的大門。

2.3 載體疫苗

現(xiàn)在市售的亞單位疫苗都是基于桿狀病毒表達系統(tǒng)表達的Cap蛋白的，盡管也有人探索其他生產(chǎn)和遞呈抗原的表達方法。

有人用乳酸球菌作為遞呈載體來表達PCV－2抗原蛋白（Cap蛋白）從而制備口服疫苗［15］。其將一段刪除核定位信號序列的Cap基因（d Cap）克隆到大腸埃希菌／乳酸球菌的穿梭載體pSEC：LEISS中。將細菌培養(yǎng)物通過口服途徑免疫小鼠，可以在小鼠血清中檢測到PCV－2特異性IgG抗體的顯著提高。而且不同于大腸埃希菌或桿狀病毒表達系統(tǒng)，乳酸球菌是食用級細菌，它沒有任何致病力，非常適合用作生產(chǎn)口服疫苗。以化學方法合成帶有酵母優(yōu)化的密碼子使用序列 （yeast－optimized codon usage sequence）的cap基因（opt－cap），將其克隆到大腸埃希菌／酵母穿梭載體p YES2中?？诜曃菇湍副磉_系統(tǒng)表達的PCV－2 Cap蛋白，也能在小鼠體內(nèi)誘導抗PCV－2的抗體［16］。

有研究在λ噬菌體表面展示來源于PCV－2 cap基因的特定免疫顯性表位，在豬上免疫后可以誘導產(chǎn)生針對PCV－2的特異性中和抗體［17］。λ噬菌體的小衣殼蛋白D在噬菌體表面形成三聚體，與D蛋白融合的多肽能夠在大腸埃希菌質(zhì)粒中表達，且仍具可溶性。其構建了一個共表達系統(tǒng)來展示PCV－2 Cap（CAP）蛋白的4個主要抗原區(qū)，將其展示在λ展示粒子上（lambda display particles，LDP），LDP－DCAP在對豬進行免疫時表現(xiàn)出了良好的免疫原性，可以同時誘導針對PCV－2的細胞和體液免疫及中和抗體的產(chǎn)生。且在不添加佐劑的條件下，用LDPD－CAP蛋白來免疫豬，即可得到較強免疫效果。

桿狀病毒作為一種新興的具有吸引力的哺乳動物細胞基因遞呈載體，近年來越來越受到人們的重視。有人用帶有水皰性口炎糖蛋白（VSV－G）的假型桿狀病毒作為載體來表達Cap蛋白，其受到巨細胞病毒立即早期（CMV－IE）增強子／啟動轉錄水平的控制［18］。得到的重組桿狀病毒（BV－G－OFR2）能夠在哺乳動物細胞上高效的轉入和表達蛋白。直接用1×108或者1×109pfu／每鼠的BV－G－OFR2免疫小鼠，能夠誘導小鼠產(chǎn)生較高的PCV－2特異性的中和抗體和細胞免疫反應。即使在1×108pfu／鼠的劑量下，與DNA疫苗相比，BV－G－OFR2表現(xiàn)出了更好的免疫原性。BV－G－OFR2既有較高的免疫原性，又有假型桿狀病毒的獨特優(yōu)勢，包括易于操作、擴大培養(yǎng)簡單、無毒性、宿主無預先存在的針對桿狀病毒的抗體。

偽狂犬病也是一種重要的豬病，經(jīng)常與圓環(huán)病毒合并感染。有報道稱用偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）作為活病毒疫苗載體的研究工作中取得突破性進展［19］，為研制抗豬圓環(huán)2型和偽狂犬病毒感染的二價疫苗提供了可能。有人構建了能表達Cap蛋白的重組PRV，能夠誘導豬產(chǎn)生針對PCV－2和PRV的體液免疫反應［20］。其方法是將豬圓環(huán)2型病毒ORF2基因插入pIECMV質(zhì)粒，并與偽狂犬病病毒 Tk－／g E－／LacZ＋共轉染至IBRS－2細胞系中，產(chǎn)生 Tk－／gE－／ORF2＋重組病毒。以重組病毒免疫接種4周齡的仔豬后，仔豬獲得了很高的針對PCV－2和PRV的體液免疫。另一組研究人員將PCV ORF1和部分ORF2基因片段經(jīng)插入到轉移載體內(nèi)，重組轉移質(zhì)粒共轉染至IBRS－2細胞中，得到能表達PCV ORF1－ORF2融合蛋白的PRV，其在細胞中的生長特性和原載體病毒類似。在Balb／c小鼠和豬體的動物試驗中，通過PRV中和試驗、針對PCV－2的ELISA檢測和PCV－2特異性淋巴細胞增殖試驗驗證了PRV－PCV－2重組病毒可以誘導產(chǎn)生高水平的抗PRV和抗PCV－2抗體；并在致死性PRV／Ea株的攻毒試驗中有著較好的保護效果，這項研究與另一項研究結果一致［20］。但是由于一些國家的RPV凈化計劃，還不能確定PRV載體能否用于豬群免疫。

與其他表達載體相比，腺病毒（Adenovirus）載體具有許多優(yōu)點，例如：①基因結構與功能清晰；②能感染多種細胞和組織；③復制迅速，能夠產(chǎn)生高滴度的病毒；④不插入染色體，不會引起插入突變；⑤有較強被外源基因插入的能力。因此，在重要的人類和動物疾病方面，腺病毒已廣泛應用于基因疫苗和基因治療中。γ干擾素（interferon gamma，IFN－γ）是一種由激活的CD4＋、CD8＋T淋巴細胞和自然殺傷（natural killer，NK）細胞產(chǎn)生的細胞因子。IFN－γ具有抗病毒活性和佐劑樣效果的雙重作用，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)活性。而且有很多研究證實，包含細胞因子和保護性抗原的融合基因通常具有協(xié)同效應，與單獨的抗原相比，能夠誘導更佳的免疫反應。因此，有人構建了能夠編碼PCV－2Cap蛋白和豬IFN－γ的重組腺病毒，命名為r Ad－ORF2－IFN－γ［21］。將其轉染AD293細胞后能夠收集到滴度高達109.899TCID50／mL的病毒。這種重組病毒能夠誘導產(chǎn)生較高的PCV－2特異性中和抗體。抗體水平比單獨r Ad－ORF2或單獨者腺病毒誘導的都高。以PCV－2攻毒后，與未免疫豬相比，免疫豬有更高的增重和較低的淋巴結微觀病變與毒血癥發(fā)病率。

也有研究采用大腸埃希菌表達系統(tǒng)，引入密碼子優(yōu)化的cap基因，表達并純化得到PCV－2 Cap蛋白［22］。用優(yōu)化的大腸埃希菌密碼子來替代ORF2 5＇端的精氨酸密碼子后，克服了原核表達系統(tǒng)病毒蛋白表達量過低的問題。每升細菌培養(yǎng)物的蛋白產(chǎn)量可達10 mg，采用單陽離子交換層析法純化后可得到均一度超過95%的蛋白。盡管大腸埃希菌表達的Cap蛋白不能自我組裝成病毒樣顆粒（virus－like particles，VLPs），但用重組Cap蛋白免疫小鼠后產(chǎn)生的特異性抗體與自然感染PCV－2病毒后產(chǎn)生的相同。

以桿菌屬的減毒菌株支氣管炎博德特菌（Bordetella bronchiseptica）為載體可以表達PCV－2 Cap蛋白，經(jīng)滴鼻途徑免疫小鼠和豬后，采用ELISA方法可在被免疫的動物血清中檢測到特異性抗體。用構建的活苗免疫豬，以PCV－2進行攻毒，免疫豬淋巴結內(nèi)PCV－2含量顯著降低，從而達到了用活疫苗免疫來預防PCV－2感染的目的［23］。雖然研究人員在以細菌為載體的PCV－2基因工程疫苗領域進行了很多探索和嘗試，但目前尚沒有這方面的PCV－2疫苗在市場上銷售。

總之，活載體疫苗能夠誘導產(chǎn)生很強的針對PCV－2的免疫反應，而不會有PCV－2感染的風險。然而人們對活載體疫苗的使用還是有些擔心，首先是使用的載體其免疫原性也許會干擾針對PCV－2的免疫；其次是在田間使用活載體疫苗的過程中活疫苗載體毒力可能會返強。

2.4 標記疫苗

由于豬群中PCV－2感染的廣泛存在，發(fā)展一種能夠區(qū)別自然感染和免疫產(chǎn)生抗體的方法就顯得尤其重要。用具有新型抗原表位的疫苗免疫豬后，可用血清學方法將免疫豬和自然感染豬區(qū)分開來。最近，有報道稱研發(fā)了一種ELISA方法（Bacucheck－TM，Intervet／Schering Plough／Merck），可以來用來確認 Porcilis PCV （Schering－Plough／Merck）免疫后豬的免疫狀態(tài)。這種ELISA方法能夠檢測到Porcilis PCV疫苗免疫后出現(xiàn)的針對baculomarkers的抗體（baculomarkers是疫苗中Cap蛋白的一個特征性標記），從而證明豬體內(nèi)的抗體是來源于免疫還是自然感染［24］。然而，還沒有其他的類似產(chǎn)品來證明其他市售疫苗的免疫狀態(tài)。

表達具有感染性的PCV－2和嵌合PCV1－2b表面的新穎抗原表位，是生產(chǎn)標記疫苗的新途徑。有報道稱PCV－2基因組cap基因的C端至少容許插入27個氨基酸，而且插入后的氨基酸剛好是暴露在病毒粒子表面。減毒活嵌合PCV1－2a病毒能展示短抗原表位標簽，從而誘導感染豬產(chǎn)生抗PCV－2抗體和抗表位標簽抗體，從而給后續(xù)的特異性抗體檢測帶來便利［25］。這項研究隨后被另一個試驗證實，其成功在PCV－2cap基因的C端插入11個氨基酸標簽后，病毒在小鼠模型上具有感染性和免疫原性［26］。因此，減毒的帶抗原表位標簽的PCV－2或嵌合PCV1－2，可以作為一種優(yōu)秀的標記MLV，能夠給追蹤豬群中疫苗毒的傳播帶來便利。

3 展望

現(xiàn)在市面上的所有PCV－2疫苗都能有效的降低PCV－2感染農(nóng)場中臨床疾病的發(fā)生，提高豬群生產(chǎn)指數(shù)。雖然疫苗免疫接種并不能夠完全防止PCV－2的感染和傳播，但是能夠極大的降低毒血癥、系統(tǒng)水平的病毒含量和病毒的外排，從而降低環(huán)境中的病毒含量?？紤]到豬病原體的混合感染給豬群健康和生產(chǎn)指數(shù)帶來的影響，對豬進行免疫從而最大限度的減少其他健康豬群暴露于PCV－2是很重要的。

盡管現(xiàn)在市面上的疫苗都是基于PCV－2a基因型的且具有較好的免疫效果，但下一代的疫苗應該是基于PCV－2b基因型的，由于目前PCV－2主要的流行亞型已經(jīng)逐漸變成PCV－2b。已經(jīng)有證據(jù)顯示，在豬群中可以自然發(fā)生PCV－2不同亞型的混合感染，并且已經(jīng)發(fā)生了PCV－2a和PCV－2b的重組體的感染［27］?；赑CV－2b的新型疫苗技術，包括標記疫苗和安全的改良減毒活疫苗，能夠在提高細胞免疫和體液免疫的同時降低PCV－2免疫成本。

分子生物學的飛速發(fā)展為改良減毒活疫苗、DNA疫苗、載體疫苗、標記疫苗這樣的新型疫苗的發(fā)展提供堅實的理論基礎和豐富的材料。但是需要強調(diào)的是，研發(fā)一個成功而實用的疫苗，并不是僅僅依據(jù)基因工程原理和分子生物學理論即可完成的，還必須考慮到病毒的病原特性、疾病的發(fā)病機理、動物的免疫保護機制以及病毒感染的流行病學特點。相信隨著研究的深入，最終將會研發(fā)出更加安全高效的疫苗，從而控制PCV－2的流行，減少養(yǎng)豬業(yè)的損失。

［1］Tischer I，Gelderblom H，Vettermann W，et al.A very small porcine virus with circular single－stranded DNA［J］.Nature，1982，295：64－66.

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