唐勝球 梁桂桃 董小英

(韶關(guān)學(xué)院英東農(nóng)業(yè)科學(xué)與工程學(xué)院，韶關(guān) 512005)

應(yīng)用抗生素引起的抗藥性問題已引起了廣大消費(fèi)者的巨大恐慌，這使得在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中減少抗生素的用量或研發(fā)抗生素的替代品變得日益緊迫。為此，歐盟已于2006年全面禁止以促生長為目的抗生素在動(dòng)物飼料中的亞治療量應(yīng)用[1]，其他各國也紛紛推出相關(guān)立法，限制抗生素在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用?？梢?，研究與開發(fā)綠色安全植物源添加劑顯得尤為重要。銀杏(Ginkgo biloba L.)又稱白果樹，古又稱鴨腳樹或公孫樹，是多功能樹種之一，屬裸子植物，為我國特產(chǎn)植物。我國銀杏資源約占世界總量的70% ～80%，除黑龍江、吉林、內(nèi)蒙古、寧夏、青海等省、自治區(qū)外，其他20多個(gè)省區(qū)或多或少都有銀杏分布。研究發(fā)現(xiàn)，銀杏是一種具有多種藥理功能的中藥[2]，含有黃酮類、酚類、萜類以及氨基酸類等多種化學(xué)成分。從銀杏葉中提取的有效活性成分主要有2類活性物質(zhì)，分別是銀杏萜內(nèi)酯類化合物和黃酮類化合物，還含有少量的聚戊烯醇、多酚類、有機(jī)酸、生物堿、酮類、糖類和原花青素等成分以及多種微量元素等[3]，總稱為銀杏葉提取物(extract of Ginkgo biloba，EGb)。目前，國際市場上通行的EGb含量標(biāo)準(zhǔn)為:銀杏黃酮24%、銀杏萜內(nèi)酯6%、花青素7%，以及未知成分A物質(zhì)3%、B物質(zhì)2%、C物質(zhì)20%、Y物質(zhì)5%、Z物質(zhì)4%、不明成分13%、水與溶劑3%、銀杏酸小于5%，其他成分3%。臨床上所用的EGb為國際標(biāo)準(zhǔn)提取物EGb 761，是將EGb的有效成分加以分離、富集后制成的一種標(biāo)準(zhǔn)制劑，主要成分包括24%的黃酮甙以及6%的萜內(nèi)酯類等，可作為一種天然的自由基清除劑，具有抗氧化、抗菌消炎以及改善缺血心肌功能等生理功效，其藥用價(jià)值十分突出。迄今為止，從銀杏葉片分離出的黃酮類物質(zhì)就達(dá)38種[4-5]，包括黃酮、異黃酮、雙氫黃酮等，具有清熱解毒、降壓降血脂與提高免疫力等生物學(xué)功能[6-10]。萜內(nèi)酯已分離出6種，統(tǒng)稱為銀杏內(nèi)酯(ginkgolide)，其中 ginkgolide A、B、C、M、J 5種屬二萜類化合物，另一個(gè)為倍半萜化合物，稱為白果內(nèi)酯(bilobalide，BB)或銀杏新內(nèi)酯。銀杏內(nèi)酯是一種血小板活化因子(plateletactivating factor，PAF)的特效拮抗劑，而PAF是引起心腦血管病、哮喘等許多疾病的重要因素，采用高純銀杏內(nèi)酯可研制出治療上述疾病的銀杏類藥物。本文主要就EGb生物學(xué)功能及其在家禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用作一概述。

1 EGb的生物學(xué)功能

大量研究表明，EGb具有抗菌、保護(hù)胃腸黏膜、抑制細(xì)胞凋亡、降血脂、抗腫瘤、提高免疫力、抗氧化與消除自由基等多種生理功能，在生命科學(xué)與醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。其中，用作人與動(dòng)物機(jī)體生理調(diào)節(jié)劑或治療藥物的應(yīng)用，主要功能體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。

1.1 抗菌功能

曲曉華等[11]采取常壓煎煮、高壓煎煮、微波提、乙醇冷浸漬取4種方法提取銀杏葉活性物質(zhì)，并選擇大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌3種指示菌檢測EGb的抑菌效果。結(jié)果表明，EGb具有一定的抑菌效果，且其抑菌效果隨提取方式、菌種和濃度的不同而有差異，溫度對其抑菌效果沒有影響，銀杏葉活性物質(zhì)顯示出良好的熱穩(wěn)定性。以銀杏葉乙醇-水提取物制成含不同濃度EGb的微生物培養(yǎng)基，接種一系列病原微生物進(jìn)行抑菌活性研究，發(fā)現(xiàn)EGb對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、枯草桿菌、變形桿菌與產(chǎn)氣桿菌等均有強(qiáng)烈的抑制作用[12]。

1.2 抗氧化與清除自由基作用

生物體內(nèi)常見的自由基有超氧陰離子自由基(O2-·)、羥自由基(·OH)與烷氧自由基(RO·)等。銀杏葉中黃酮類化合物具有抗氧化和清除自由基功能，其作用機(jī)理可分為以下3方面:1)與O2-·反應(yīng)阻斷該自由基引發(fā)連鎖反應(yīng);2)與脂質(zhì)過氧基(ROO·)反應(yīng)阻斷脂質(zhì)過氧化過程;3)與金屬離子鰲合而阻斷自由基生成。研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉中黃酮類化合物B環(huán)上的3，4-鄰二羥基是具有清除自由基生物活性的關(guān)鍵基團(tuán)，其他位上的羥基起一定作用，這可能是由于鄰位羥基的存在可使1個(gè)羥基形成羰基之后易與鄰位的羥基形成分子內(nèi)氧鍵，使氧化后的物質(zhì)穩(wěn)定，進(jìn)而中斷自由基導(dǎo)致的鏈反應(yīng)[13]。EGb中含有的還原羥基功能團(tuán)，可以直接發(fā)揮抗氧化功能，清除氧自由基，調(diào)節(jié)超氧化物歧化酶(SOD)與過氧化氫酶的活性，清除一氧化氮(NO)，進(jìn)而起到對心肌缺血灌注損傷的保護(hù)作用和保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞以避免損傷，故對動(dòng)脈粥樣硬化的形成具有潛在的防治功能[14]。牟玲麗等[15]研究表明，銀杏葉體外抗氧化作用的主要活性成分為黃酮類成分，內(nèi)酯類成分無明顯抗氧化作用。

1.3 保護(hù)胃腸黏膜

采用大鼠束縛-冷凍應(yīng)激模型和小鼠無水乙醇損傷模型研究EGb對胃黏膜損傷指數(shù)的影響，通過觀察實(shí)驗(yàn)鼠胃液分泌量、胃液酸度和胃蛋白酶活性的變化，發(fā)現(xiàn)EGb可抑制束縛-冷凍應(yīng)激和無水乙醇引起的胃黏膜損傷[16]。Ozdemir等[17]報(bào)道，在缺氧/再充氧(H/R)處理引起腸道損傷而誘發(fā)疾病的小鼠模型中，EGb 761對腸道損傷具有保護(hù)作用。

1.4 抑制細(xì)胞凋亡

研究指出，硫酸亞鐵和過氧化氫可誘導(dǎo)鼠小腦粒細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞膜流動(dòng)性，改變膜蛋白質(zhì)的構(gòu)象。采用EGb 761預(yù)處理粒細(xì)胞能有效減弱因硫酸亞鐵和過氧化氫誘導(dǎo)的氧化作用，可保護(hù)小腦粒細(xì)胞，從而減緩粒細(xì)胞凋亡[18]。用β-淀粉樣多肽(Aβ)處理細(xì)胞會(huì)誘發(fā)自由基的生成，促進(jìn)葡萄糖攝入和細(xì)胞凋亡。采用EGb 761可抑制Aβ所誘導(dǎo)的細(xì)胞調(diào)亡，但不能解除Aβ造成的神經(jīng)毒性，并呈劑量依賴性[19-20]。其機(jī)理為EGb 761可通過阻止Aβ誘發(fā)的可擴(kuò)散性、可溶性毒害神經(jīng)的配基，以達(dá)到抑制細(xì)胞凋亡的功能。

1.5 降血脂功能

EGb可明顯提升高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)含量，抑制 PAF，降低血液黏度以及血漿膽固醇與血纖蛋白原的合成，改善血漿磷脂和膽固醇的比例。試驗(yàn)報(bào)道，銀杏黃酮能促進(jìn)脂肪細(xì)胞的脂解作用。0.005～100.000 μmol/L銀杏黃酮影響3T3-L1脂肪細(xì)胞脂解作用的研究發(fā)現(xiàn)，銀杏黃酮以濃度依賴性方式促進(jìn)脂肪分解。銀杏黃酮濃度為0.1～0.5 μmol/L時(shí)，細(xì)胞脂解活性出現(xiàn)最高峰;隨著濃度逐漸升高，細(xì)胞脂解活性逐漸降低，在100 μmol/L時(shí)消失;銀杏黃酮濃度為10～100 μmol/L時(shí)只有部分細(xì)胞失去活性[21]。另有報(bào)道，給SD大鼠飼喂高脂飼料10 d后，加喂EGb，18 d后與對照組相比，SD大鼠的血清中膽固醇含量極顯著降低，甘油三酯也顯著降低，說明EGb具有明顯降低血脂的作用[22]。

1.6 抗病毒消炎

報(bào)道證實(shí)，銀杏葉甲醇提取物中的十七碳烯水楊酸和氯仿提取物中的白果黃素有抑制人類皰疹病毒(human herpesvirus 4，HHV-4)、12-O- 十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)致癌啟動(dòng)因子活性的作用，且活性很強(qiáng)，其效果超過了維生素A酸(維甲酸)[23]。此外，銀杏葉中雙黃酮物質(zhì)可參與機(jī)體炎癥反應(yīng)，從中所分離出的幾種成分抗炎效果依次為穗花杉雙黃酮＞銀杏雙黃酮＞金松雙黃酮[24]。

1.7 提高免疫力及其他

研究表明，EGb可提高機(jī)體免疫力，對人和動(dòng)物的疾病防治具有重要意義。文獻(xiàn)報(bào)道，EGb可調(diào)節(jié)小鼠中性粒細(xì)胞吞噬殺傷功能和淋巴細(xì)胞生理活性。經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，銀杏葉乙醇提取物與水提取物均可明顯增強(qiáng)小鼠中性粒細(xì)胞髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)的釋放和淋巴細(xì)胞線粒體脫氫酶的活性，對小鼠機(jī)體免疫細(xì)胞發(fā)揮生理功能有促進(jìn)作用;此外，研究還發(fā)現(xiàn)銀杏葉多糖可使吞噬細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變、體積相應(yīng)變大，大部分細(xì)胞呈現(xiàn)活性狀態(tài)，吞噬功能顯著增強(qiáng)，并明顯提高吞噬細(xì)胞酸性磷酸酶的反應(yīng)活性[25]。應(yīng)用單克隆抗體和放射性滲入法檢測胸腺T細(xì)胞和伴刀豆球蛋白(concanavalin A，ConA)誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)EGb可明顯增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖，提高胸腺Thy-1細(xì)胞的百分率;并可增加腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，明顯增加脾臟、胸腺的重量，提高外周血T淋巴細(xì)胞酯酶的染色率，使血清免疫球蛋白G(IgG)含量增加，該結(jié)果提示EGb可作為免疫增強(qiáng)劑增強(qiáng)生物機(jī)體免疫力[26]。

此外，大量研究證實(shí)，EGb還具有抗腫瘤與癌癥[27]、抗輻射[28]、影響細(xì)胞轉(zhuǎn)錄[29]、提高學(xué)習(xí)記憶[30-32]與抗焦慮[33]等生物學(xué)作用。

2 EGb在家禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用

2.1 在雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用

目前，EGb在蛋雞飼養(yǎng)中的應(yīng)用研究少有報(bào)道。Hirama[34]指出，蛋雞飼糧中添加 0.01% ～1.50%EGb可降低雞蛋中膽固醇含量，提高蛋重量，增多蛋黃量，并使蛋殼變厚，從而有利于雞蛋商業(yè)與食用品質(zhì)的改善。而關(guān)于EGb在肉雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用卻有大量報(bào)道。臧素敏等[35]發(fā)現(xiàn)，在羅斯雌性肉仔雞飼糧中添加0.03% ～0.12%EGb具有一定的促生長作用，其中以添加0.06%EGb的試驗(yàn)組促生長效果最為明顯，0.48%EGb試驗(yàn)組肉仔雞腹脂率明顯降低，0.24%EGb試驗(yàn)組肉仔雞肝脂肪含量極顯著降低，但未表現(xiàn)出促生長作用;而在肉仔雞飼糧中添加0.06% ～0.12%EGb能顯著或極顯著降低血清甘油三酯含量，并有提高血清HDL含量、降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及總膽固醇(T-CHO)含量的趨勢。該課題組還發(fā)現(xiàn)，添加0.24%EGb能極顯著降低肉仔雞血清丙二醛(MDA)含量，顯著提高SOD活性，從而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力[36]。楊小燕等[37]也報(bào)道，0.8%EGb能顯著提高肉雞后期增重和飼料轉(zhuǎn)化率，顯著降低肉雞腹脂率;肉雞屠宰率隨著EGb添加水平的增加呈提高的趨勢，但不顯著;1.0%EGb顯著提高肉雞全凈膛率;0.8%、1.0%EGb顯著提高肉雞法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)和新城疫抗體滴度;1.0%EGb顯著提高肉雞血清球蛋白和IgG含量?？梢?，在飼糧中添加一定水平的EGb對肉雞產(chǎn)肉性能和免疫性能有一定的促進(jìn)作用。

此外，黃其春等[38]發(fā)現(xiàn)，EGb可提高肉雞血清新城疫病毒(NDV)的抗體水平，加強(qiáng)肉雞后期飼養(yǎng)中對NDV的保護(hù)能力。這表明EGb可增強(qiáng)機(jī)體對疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng)，促進(jìn)抗體生成，從而提高雞的免疫機(jī)能，使肉雞的抗病力增強(qiáng)。在利用EGb抑制10日齡雞胚人工感染NDV增殖的試驗(yàn)中也表明，EGb對NDV增殖具有抑制作用[39]。

2.2 在鴨養(yǎng)殖中的應(yīng)用

EGb在國內(nèi)肉鴨養(yǎng)殖業(yè)中也有少量應(yīng)用。研究報(bào)道，飼糧中應(yīng)用EGb能顯著提高肉鴨的屠宰率、全凈膛率、半凈膛率(母鴨分別提高6.00%、5.85%、6.60%;公鴨分別提高4.89%、3.38%、4.15%);在母鴨飼糧中添加EGb，還能極顯著降低其肝脂率，顯著提高皮脂率與肝臟指數(shù);而就公鴨而言，飼喂含EGb的飼糧，各試驗(yàn)組腹脂率均降低，但差異不顯著[40]。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，EGb具有降低肉鴨血清中低密度脂蛋白(LDL)與T-CHO含量，以及降低鴨肝臟脂蛋白脂酶(LPL)和肝臟蘋果酸脫氫酶(MDH)活性的功能[41]。上述研究提示，EGb可顯著改善肉鴨的胴體性能，降低肉鴨的血脂水平，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。

2.3 在鵪鶉養(yǎng)殖中的應(yīng)用

在EGb影響高脂喂養(yǎng)誘發(fā)鵪鶉高脂血癥的研究中，魏建明等[42]發(fā)現(xiàn)EGb可顯著降低血清中的甘油三酯、膽固醇與LDL水平，還可使肝重量系數(shù)明顯減輕，脂肪空泡數(shù)明顯減少。該結(jié)果提示，EGb在防治鵪鶉高脂血癥和肝脂肪變性等方面具有明顯的藥理功能。

3 飼用EGb的開發(fā)前景

銀杏為特有樹種，其資源以我國最為豐富，擁有量居世界首位[43]。因此，我國開發(fā)飼用EGb應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)，具有得天獨(dú)厚的資源基礎(chǔ)，且有利于森林綜合效益的提高與飼料資源的拓展。經(jīng)研究證實(shí)，飼用EGb含有內(nèi)酯類、黃酮類與酚類等多種生物活性成分，為一種全天然、無公害的綠色飼料添加劑，具有促進(jìn)動(dòng)物生長，提高機(jī)體抗氧化與免疫力，并能改善胴體組成和肌肉品質(zhì)等作用[38，43-46]。但與此同時(shí)，EGb 中烷基酚類化合物，如銀杏酚、白果酚以及銀杏酸等可致接觸性過敏和中毒，抑制神經(jīng)系統(tǒng)和多種重要的酶系統(tǒng)，具有潛在的致畸、致癌與致誘變作用[47-49]。為此，常采用樹脂法與萃取法等工藝進(jìn)行銀杏酸脫除，可降低EGb中的毒副成分[50-51]，以保障其應(yīng)用安全性。

因此，在開發(fā)EGb用作新型飼料添加劑的過程中，應(yīng)盡量改善其提取工藝，最大限度地去除有毒有害成分，以降低其毒副作用。此外，目前EGb的生產(chǎn)成本大致為450～550元/kg。故在養(yǎng)殖業(yè)中應(yīng)用EGb，須適時(shí)適量添加，全面加以綜合考慮，方可取得更大的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)與生態(tài)效益。經(jīng)過科技工作者的多年努力，相關(guān)技術(shù)的日趨完善，飼用EGb已逐漸應(yīng)用于畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，且呈現(xiàn)出十分廣闊的應(yīng)用前景。

4 小結(jié)

隨著人們對食品安全、藥物殘留等問題的重視，傳統(tǒng)抗生素的負(fù)面影響日益凸顯。為此，開發(fā)天然綠色無污染新型飼料添加劑的任務(wù)迫在眉睫。EGb對動(dòng)物健康和抗病能力均有明顯的促進(jìn)作用，有利于提高動(dòng)物繁殖與生長性能，在家禽養(yǎng)殖中已有大量應(yīng)用。隨著調(diào)節(jié)免疫、抑制病原、抵抗氧化應(yīng)激，促進(jìn)繁殖力和生長性能等生物學(xué)作用的深入研究，EGb可望在畜禽漁等養(yǎng)殖行業(yè)中廣泛應(yīng)用，其前景十分看好。

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