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        低蛋白質(zhì)飼糧中添加尿素對肉兔生長發(fā)育及血液指標(biāo)的影響

        2012-09-20 00:32:20汪水平田興舟王紅楊鄧紅麗李岑曦
        動物營養(yǎng)學(xué)報 2012年4期
        關(guān)鍵詞:盲腸飼糧尿素

        汪水平 田興舟 何 琴 王紅楊 鄧紅麗 李岑曦

        (1.西南大學(xué)榮昌校區(qū),重慶 402460;2.西南大學(xué)重慶市牧草與草食家畜重點實驗室,重慶 400716)

        蛋白質(zhì)是動物生長發(fā)育及其產(chǎn)品產(chǎn)量和質(zhì)量提高的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。隨著我國畜牧業(yè)的發(fā)展,蛋白質(zhì)飼料供給日趨緊張,成為制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展和生產(chǎn)效率提高的重要因素之一。將尿素等非蛋白氮(non-protein nitrogen,NPN)作為反芻動物的蛋白質(zhì)飼料來源,是緩解目前蛋白質(zhì)飼料資源短缺的有效途徑之一。家兔是小型草食性單胃動物,具有發(fā)達(dá)的盲腸微生物區(qū)系和獨特的食糞習(xí)性,具備利用NPN的消化生理基礎(chǔ)[1]。目前,有關(guān)家兔能否利用尿素及其利用效率的研究很多,但不同試驗的結(jié)論不盡相同[2]。本試驗擬給肉兔飼喂尿素添加量不同的低蛋白質(zhì)飼糧,通過對其生長性能、主要臟器與胃腸道發(fā)育及血液指標(biāo)的考察,評估尿素的應(yīng)用效果,確定適宜用量,為NPN作為肉兔氮源提供科學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試驗材料

        尿素(分析純)購自北京康普匯維科技有限公司,含量為99%,系白色柱狀結(jié)晶,實測氮含量為46.49%。玉米過1 mm篩粉碎,實測干物質(zhì)含量為86.85%,粗蛋白質(zhì)含量為8.68%(干物質(zhì)基礎(chǔ))。將玉米粉和尿素按80∶20的比例混勻,使用洋工EXT50G精英型單螺桿干法膨化機(jī)在140℃下膨化,得糊化淀粉緩釋尿素。將制得的糊化淀粉緩釋尿素過1.5 mm篩粉碎,實測干物質(zhì)含量為92.00%,氮含量為9.89%(干物質(zhì)基礎(chǔ))。

        1.2 基礎(chǔ)飼糧

        參考 NRC(1998)[3]推薦的青年兔營養(yǎng)需要量并兼顧試驗?zāi)康?,配制粗蛋白質(zhì)含量較低的基礎(chǔ)飼糧,其組成及營養(yǎng)水平見表1。在配制試驗飼糧時,需在基礎(chǔ)飼糧玉米數(shù)量上,扣除各自添加的糊化淀粉緩釋尿素所含的玉米數(shù)量。試驗所用玉米均按糊化淀粉緩釋尿素制備工藝進(jìn)行膨化。所有飼料原料過1.5 mm篩粉碎,按不同試驗組分別混勻,再采用冷制粒工藝制成粒徑為4 mm的顆粒料。

        1.3 試驗設(shè)計

        選用50日齡、體重相近的健康新西蘭兔作為試驗動物。采用單因子隨機(jī)區(qū)組試驗設(shè)計,將120只新西蘭兔隨機(jī)分為4組,1個對照組和3個試驗組,每組15個重復(fù),每個重復(fù)2只。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,3個試驗組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加1%、2%和3%尿素(折合糊化淀粉緩釋尿素添加量分別為5%、10%和15%)的試驗飼糧。預(yù)試期為10 d,正試期為30 d。試驗組肉兔在預(yù)試期內(nèi)由基礎(chǔ)飼糧逐漸過渡到試驗飼糧。

        1.4 飼養(yǎng)管理

        試驗于2011年6月1日至2011年7月10日在重慶市榮昌縣西南大學(xué)榮昌校區(qū)“7+5”肉兔養(yǎng)殖創(chuàng)業(yè)組進(jìn)行。各組試驗兔公母各占1/2,相同性別的2只試驗兔飼養(yǎng)在同一籠中,兔舍為2層雙列式。采用顆粒料飼喂,自由采食與飲水,日喂2次(07:00和18:00),每次投料少量多添,每次投料時間不少于2 h。兔舍自然采光,自然通風(fēng),日打掃衛(wèi)生1次,保持兔舍清潔衛(wèi)生。試驗期間按兔場規(guī)定進(jìn)行防疫、驅(qū)蟲和消毒,并密切觀察試驗兔行為,發(fā)現(xiàn)異常立即處理。

        表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table1 Composition and nutrient levels of the basal diet(DM basis) %

        1.5 測定指標(biāo)與方法

        1.5.1 飼養(yǎng)環(huán)境參數(shù)

        試驗兔飼養(yǎng)環(huán)境參數(shù)主要包括環(huán)境溫度、相對濕度和溫濕指數(shù)。在兔舍中部1.5 m高處掛置多頻道無線溫濕度計(EMR 812 HGN,Oregon Scientific,Inc.Portland,Oregon USA)主裝置,每日 02:00、08:00、11:00、14:00、20:00 測定舍內(nèi)溫度和相對濕度。溫濕指數(shù)計算公式為:

        式中:THI為溫濕指數(shù);T為溫度;RH為相對濕度。

        1.5.2 生長性能

        在正試期開始和結(jié)束時分別在晨飼前給試驗兔稱重,兩者相減即為增重,再計算日增重。在正試期內(nèi)每天記錄試驗兔的進(jìn)食量,計算日干物質(zhì)進(jìn)食量。日干物質(zhì)進(jìn)食量與日增重之比,即為料重比。

        1.5.3 血液指標(biāo)

        在正試期結(jié)束的次日,從每個重復(fù)中隨機(jī)挑選1只試驗兔,晨飼前心臟采血6 mL。取1 mL全血立即采用水楊酸鈉-靛酚藍(lán)顯色法[5]測定氨氮(ammonia nitrogen,NH3-N)含量,其余血液室溫斜置靜放1~2 h,3 000 r/min低溫離心15 min,所得血清于-80℃下保存待測。所有血清指標(biāo)均使用貝克曼庫爾特SYNCHRON CX5 PRO全自動生化儀測定,其中葡萄糖(glucose,GLU)含量采用己糖激酶終點法測定,尿素氮(urea nitrogen,UN)含量采用脲酶UV法測定,谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamate-pyruvate transaminase,GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamicoxaloacetic transaminase,GOT)活性均采用 IFCC速率法測定,堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性采用SFBC速率法測定。

        1.5.4 育肥性能

        采血后的試驗兔采用耳緣靜脈注射空氣法致死后,稱重(宰前重),立即剝皮,在同一位置去頭和去蹄,并移走除腎臟以外內(nèi)臟,靜止30 min后稱重,即為胴體重,再計算屠宰率。

        1.5.5 主要臟器發(fā)育狀況

        從試驗兔臟器中分離心臟、肝臟、脾臟及腎臟,分別稱重,再除以宰前重,即得各臟器系數(shù),以評估試驗兔主要臟器發(fā)育狀況。

        1.5.6 胃腸道發(fā)育狀況

        從試驗兔胃腸道中分離出胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、蚓突及大腸,測定各段的長度,再將胃腸道劃開,用生理鹽水沖洗干凈,隨即用吸水紙輕輕擦拭,清除表面附著水分后分別稱重,再除以宰前重,即得各自的系數(shù),以評估試驗兔胃腸道發(fā)育狀況。

        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

        試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2003軟件進(jìn)行處理,結(jié)果采用SPSS 11.5軟件中的GLM模塊進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗,用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 試驗兔健康狀況

        在預(yù)試期由基礎(chǔ)飼糧逐漸過渡到試驗飼糧時,試驗兔的反應(yīng)依尿素添加量而異。1%和2%尿素組試驗兔沒有出現(xiàn)不良反應(yīng),過渡順利。3%尿素組試驗兔進(jìn)食量逐漸減少,甚至拒食,以致逐漸消瘦;排糞、排尿頻率和數(shù)量明顯減少,糞便顆粒變小,且呈干結(jié)狀;部分精神萎靡,蜷臥成團(tuán),畏冷,不時顫抖;在完全飼喂試驗飼糧的第2天,有80%的試驗兔出現(xiàn)呼吸急促、平衡失調(diào)、歪頭斜腦等表征,并在出現(xiàn)上述表征后不久高聲鳴叫數(shù)聲后頭歪向一側(cè)而亡;解剖可見腹部臌氣,胃壁及腸壁稀薄,觸手可破,后腸內(nèi)糞便顆粒黏結(jié)呈線狀,肝臟和腎臟暗紅,未發(fā)現(xiàn)病灶,血液暗紅,黏滯度較高,可以斷定為氨中毒。鑒于3%尿素組試驗兔的健康狀況,剩余的20%未進(jìn)入正試期,轉(zhuǎn)喂基礎(chǔ)飼糧,之后逐漸恢復(fù)進(jìn)食,體況好轉(zhuǎn)。1%尿素組試驗兔進(jìn)入正試期后,一切正常。2%尿素組試驗兔在正試期前期進(jìn)食和健康狀況正常,后期進(jìn)食量逐漸減少,體況消瘦,排糞、排尿頻率和數(shù)量減少,糞便顆粒變小,有氨中毒征兆,但未危及生命,直至試驗結(jié)束。由于基礎(chǔ)飼糧粗纖維水平較高,粗料高、低質(zhì)搭配合理,同時試驗期間環(huán)境衛(wèi)生保持良好,故試驗兔均未出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。

        2.2 試驗兔飼養(yǎng)環(huán)境參數(shù)

        由圖1可知,試驗期兔舍內(nèi)溫度、相對濕度和溫濕指數(shù)最高分別為33.42℃、91.75%和84.92,最低分別為22.70℃、58.77%和69.49,表明試驗兔處于高溫高濕飼養(yǎng)環(huán)境中。由表2可知,試驗期兔舍內(nèi)溫度平均為27.86℃,相對濕度平均為78.91%,溫濕指數(shù)平均為79.22。

        圖1 試驗兔飼養(yǎng)環(huán)境參數(shù)日變曲線Fig.1 Daily change curves of feeding environmental parameters for experimental rabbits

        表2 試驗兔飼養(yǎng)環(huán)境參數(shù)Table2 Feeding environmental parameters for experimental rabbits

        2.3 試驗兔生長、育肥性能

        由表3可知,3組試驗兔始重差異不顯著(P>0.05)。1%尿素組試驗兔末重、增重和日增重均極顯著高于對照組和2%尿素組(P<0.01)。2%尿素組試驗兔日干物質(zhì)進(jìn)食量、胴體重和屠宰率均極顯著低于對照組和1%尿素組(P<0.01),而料重比則極顯著高于對照組和1%尿素組(P<0.01)。

        表3 試驗兔生長、育肥性能Table3 Growth and finishing performance of experimental rabbits

        2.4 試驗兔血液指標(biāo)

        由表4可知,3組試驗兔血清葡萄糖含量差異不顯著(P>0.05)。1%和2%尿素組試驗兔全血氨氮含量和血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著或極顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01)。此外,2%尿素組試驗兔血清尿素氮含量以及谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶活性均極顯著高于對照組和1%尿素組(P<0.01)。

        表4 試驗兔血液指標(biāo)Table4 Blood indices of experimental rabbits

        2.5 試驗兔主要臟器發(fā)育狀況

        由表5可知,3組試驗兔心臟和脾臟系數(shù)均差異不顯著(P>0.05),而肝臟重和系數(shù)均差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01)。2%尿素組試驗兔心臟、脾臟和腎臟重均顯著低于對照組和1%尿素組(P<0.05),而腎臟系數(shù)則極顯著高于對照組和1%尿素組(P<0.01)。

        表5 試驗兔主要臟器重量與系數(shù)Table5 Weight and coefficient of main organs of experimental rabbits

        2.6 試驗兔胃腸道發(fā)育狀況

        由表6可知,3組試驗兔胃、十二指腸、空腸和大腸系數(shù)均差異不顯著(P>0.05)。2%尿素組試驗兔胃重、十二指腸重與長、空腸重與長、回腸重與長、盲腸重與系數(shù)、蚓突重與系數(shù)及長、大腸重與長顯著或極顯著低于對照組和1%尿素組(P<0.05或P<0.01)。此外,2%尿素組試驗兔回腸系數(shù)及盲腸長顯著或極顯著低于對照組(P<0.05或 P<0.01)。

        3 討論

        3.1 低蛋白質(zhì)飼糧中添加尿素對肉兔生長、育肥性能的影響

        動物短時間進(jìn)食大量尿素會導(dǎo)致氨中毒,這一點在反芻動物上早有定論[6]。本試驗表明,肉兔也不例外。事實上,為使尿素能很好地充當(dāng)肉兔氮源,本試驗做了以下措施:1)制備糊化淀粉緩釋尿素,改善尿素飼糧的適口性,降低尿素分解速度;2)配制粗蛋白質(zhì)含量(11.11%)較低的基礎(chǔ)飼糧,提高尿素氮利用率;3)基礎(chǔ)飼糧中玉米所占比例較大,且經(jīng)過糊化,供能效果更佳。然而,肉兔在完全進(jìn)食3%尿素飼糧的第2天就出現(xiàn)大批因氨中毒造成的死亡。盡管肉兔可長達(dá)30 d完全進(jìn)食2%尿素飼糧,但其后期一直處于亞健康狀態(tài),表現(xiàn)出氨中毒的征兆,說明肉兔對2%尿素飼糧的耐受能力有限,這是2%尿素組試驗兔生長發(fā)育幾乎停滯的原因。本試驗中,飼糧中添加1%的尿素能極顯著提高肉兔日增重,具有降低料重比的趨勢,對屠宰率亦能略微提高,表明1%尿素添加量可改善肉兔的生長、育肥性能。研究者對尿素在家兔飼糧中的應(yīng)用效果一直存在爭議。張寶慶等[7]將27只生長獺兔隨機(jī)分為3組,分別飼喂含有0、1%和2%尿素的飼糧,結(jié)果獺兔增重、日增重、日進(jìn)食量及屠宰率均差異不顯著,而綜合考慮生長性能、屠宰性能及肉和毛皮品質(zhì)等指標(biāo),認(rèn)為1%尿素添加量效果較好。孔祥浩等[8]報道,在玉米秸粉含量為50%的顆粒料中添加1%的尿素會顯著降低3月齡塞北兔日增重,而對日進(jìn)食量和料重比分別具有降低和提高的趨勢。周維仁等[9]在低蛋白質(zhì)基礎(chǔ)飼糧(粗蛋白質(zhì)含量為10.12%)中添加1%、2%和3%的尿素,分別飼喂5只2.5月齡的新西蘭兔30 d,發(fā)現(xiàn)肉兔日增重有隨尿素添加量增加而提高的趨勢,而綜合考慮血清氨氮、尿素氮含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性等指標(biāo),認(rèn)為各添加量均不會影響肉兔的生長,且長時間高劑量飼喂不會對肉兔生理狀況產(chǎn)生不良影響。周維仁等[10]報道,給5只2月齡新西蘭公兔飼喂添加3%尿素的低蛋白質(zhì)飼糧(粗蛋白質(zhì)含量為10.12%),與飼喂粗蛋白質(zhì)含量為15.30%的飼糧相比,日增重略有降低。周維仁等[11]認(rèn)為,飼糧中添加1%~2%的尿素作為飼糧蛋白質(zhì)的補充,可促進(jìn)兔的生長;飼糧中添加3%的尿素后,兔的生長比對照組略有加快,飼料報酬明顯改善,試驗過程中未出現(xiàn)氨中毒現(xiàn)象。對比上述試驗可以發(fā)現(xiàn),基礎(chǔ)飼糧的配方與配制、試驗動物的品種與年齡、參與試驗的動物只數(shù)及飼養(yǎng)管理等因素使得不同研究結(jié)果缺乏可比性。

        表6 試驗兔胃腸道重量與系數(shù)及腸道長度Table6 Weight and coefficient of gastrointestinal tract and length of intestinal tract of experimental rabbits

        3.2 低蛋白質(zhì)飼糧中添加尿素對肉兔血液指標(biāo)的影響

        尿素水解是尿素在脲酶的作用下分解成氨和二氧化碳,而脲酶是由消化道內(nèi)厭氧微生物產(chǎn)生的,其活性最適pH為7~9,當(dāng)pH低于3或高于9時,脲酶幾乎無活性[12]。家兔的胃和小腸pH較低,且微生物數(shù)量少,脲酶活性不高,故尿素在其中幾乎不被水解[13]。但是,尿素是小分子物質(zhì),進(jìn)入動物體內(nèi)可不經(jīng)改變就從胃和小腸中吸收進(jìn)入血液[14]。因此,家兔食入尿素后,一部分很快通過胃和小腸吸收進(jìn)入血液,再循環(huán)至盲腸和肝臟;另一部分直接進(jìn)入盲腸,在微生物分泌的脲酶作用下,分解成氨和二氧化碳。其中,一部分氨擴(kuò)散到血液中,進(jìn)入肝臟合成尿素去毒。本試驗中,肉兔血清尿素氮主要來自食入尿素的直接吸收和氨的合成,而全血氨氮主要是尿素分解產(chǎn)生的。因此,隨著飼糧尿素添加量的增加,肉兔血清尿素氮和全血氨氮含量升高。葡萄糖作為重要的營養(yǎng)性單糖,是動物代謝活動快速應(yīng)變需能的最有效營養(yǎng)素,是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉組織、脂肪組織、胎兒生長發(fā)育及乳腺等代謝的唯一能源[15]。本試驗中,肉兔血清葡萄糖含量組間差異不顯著,表明飼糧中添加尿素不會影響肉兔葡萄糖的供應(yīng)。血清中的酶絕大部分來自動物的各種組織器官,其活性高低與相應(yīng)組織器官的代謝水平和功能狀態(tài)有關(guān),而機(jī)體的調(diào)節(jié)和適應(yīng)能力在很大程度上取決于各組織器官的機(jī)能水平[4]。通常,各種酶以恒定的活性存在于血清中,當(dāng)某一種組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)或功能改變時,與之相關(guān)的酶的活性在血清中會隨之發(fā)生改變[4]。谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝細(xì)胞漿中,是動物最敏感的肝功能檢測指標(biāo)之一;谷草轉(zhuǎn)氨酶在肝細(xì)胞、心肌和骨骼肌中含量均較高,對肝臟不具特異性[16]。隨著動物長大成熟和骨骼成年化,來自成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶逐漸減少,而來自肝細(xì)胞的堿性磷酸酶逐漸增多[16]。當(dāng)肝功能損害時,上述酶即釋放于血清中,使其活性急劇升高。本試驗中,隨著飼糧尿素添加量的增加,試驗兔血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及堿性磷酸酶活性增強,表明肉兔肝臟受損害程度逐漸加強。實際上,無論是處理多余的尿素還是多余的氨,都會增加肝臟負(fù)擔(dān),從而影響肉兔健康。

        3.3 低蛋白質(zhì)飼糧中添加尿素對肉兔主要臟器和胃腸道發(fā)育狀況的影響

        由于2%尿素組試驗兔生長幾乎停滯,這會嚴(yán)重影響其主要臟器及胃腸道發(fā)育,故無論主要臟器重或系數(shù),還是胃腸道重或系數(shù),亦或腸道長度,低于對照組和1%尿素組都在可理解范圍內(nèi)。例外的是,2%尿素組試驗兔腎臟和盲腸系數(shù)要大于對照組和1%尿素組,表明飼糧中添加2%的尿素實際上促進(jìn)了肉兔腎臟和盲腸的發(fā)育。尿素在兔體內(nèi)首先是被盲腸微生物利用,合成微生物蛋白,而無法利用的尿素則由腎臟排出[1]。因此,盲腸和腎臟是兔處理尿素的重要器官。按照拉馬克的“用進(jìn)廢退”進(jìn)化論觀點,2%尿素組試驗兔腎臟和盲腸在活躍地處理尿素,換句話說,飼糧中添加2%的尿素增加了肉兔腎臟和盲腸新陳代謝的強度。1%尿素組和對照組試驗兔生長正常,但前者的肝臟重和系數(shù)卻顯著低于后者,同時結(jié)合血液指標(biāo)來看,可以認(rèn)為飼糧中添加1%的尿素對肉兔肝臟的發(fā)育產(chǎn)生了不利影響。由于沒有設(shè)立正常蛋白質(zhì)飼糧的對照組,故無法得知究竟是蛋白質(zhì)不足增強肝臟利用內(nèi)源尿素的能力而促進(jìn)了對照組試驗兔肝臟發(fā)育,還是盲腸吸收氨的毒性作用抑制了1%尿素組試驗兔肝臟發(fā)育。此外,1%尿素組試驗兔胃腸道重量與系數(shù)及腸道長度與對照組相比均無顯著差異,表明飼糧中添加1%的尿素不會影響肉兔胃腸道的發(fā)育。

        4 結(jié)論

        本試驗條件下,低蛋白質(zhì)飼糧中添加3%的尿素會造出肉兔氨中毒死亡;添加2%的尿素會使肉兔生長發(fā)育停滯;添加1%的尿素可改善肉兔生長、育肥性能,但會對肝臟的發(fā)育產(chǎn)生不利影響。

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