胡永娜 王之盛＊ 李愛科

菜籽粕富含蛋白質(zhì)和氨基酸，是很好的植物性飼料蛋白質(zhì)資源［1］。但菜籽粕中由于硫代葡萄糖甙、單寧、植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子的存在，影響了飼料的安全性、適口性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值利用率，從而限制了其在畜禽飼糧中的使用［2－4］。菜籽粕經(jīng)微生物固態(tài)發(fā)酵后，可降低粗纖維含量，有效去除抗?fàn)I養(yǎng)因子，改善其適口性，同時(shí)產(chǎn)生小分子量的肽類物質(zhì)和益生菌，調(diào)節(jié)畜禽機(jī)體胃腸道微生態(tài)平衡，并提高消化酶活性。另外，微生物蛋白質(zhì)本身也是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源，可以提高飼料中蛋白質(zhì)的含量，使其氨基酸組成更加合理。然而，發(fā)酵菜籽粕的飼用價(jià)值并沒有充分體現(xiàn)出來。目前，關(guān)于添加發(fā)酵菜籽粕對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能影響的研究已有少量報(bào)道。吳文明等［5］在斷奶仔豬上的研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵菜籽粕替代部分豆粕能提高仔豬平均日增重，降低料重比，降低仔豬腹瀉率。蔣玉琴等［6］將發(fā)酵菜籽粕按不同比例添加到粉碎的雞飼料中，研究其對(duì)三黃雞生長(zhǎng)性能的影響，結(jié)果表明，添加比例在15%時(shí)，雞的平均日增重與對(duì)照組（不添加脫毒餅粕）基本接近，余勃等［7］和 Chiang等［8］也有過類似的研究報(bào)道。而發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞的免疫功能和消化酶活性方面的研究鮮有報(bào)道。因此，本研究擬采用混菌發(fā)酵處理菜籽粕，通過對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、免疫功能及消化酶活性相關(guān)指標(biāo)的分析，以探討微生物處理菜籽粕的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用1日齡健康愛拔益加（AA）肉仔雞180羽，按照初始體重?zé)o差異原則將其隨機(jī)分為3個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽。飼養(yǎng)試驗(yàn)時(shí)間為42 d，分為試驗(yàn)前期（1～21日齡）和試驗(yàn)后期（22～42日齡）。豆粕對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，菜籽粕組用未發(fā)酵菜籽粕等氮替代基礎(chǔ)飼糧中25%的豆粕，發(fā)酵菜籽粕組用固態(tài)發(fā)酵菜籽粕等氮替代基礎(chǔ)飼糧中25%的豆粕。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及材料

AA肉仔雞由北京華都肉雞場(chǎng)提供。固態(tài)發(fā)酵菜籽粕在實(shí)驗(yàn)室前期試驗(yàn)篩選的基礎(chǔ)上，采用混菌發(fā)酵，試驗(yàn)所用發(fā)酵菌株為本實(shí)驗(yàn)室保存菌株CG1.1001、CG1.3001和CG4.1001，分別為枯草芽孢桿菌（Bacill us subtilis）、糞腸球菌（Enter ococcus f aecalis）和產(chǎn)朊假絲酵母（Candida utilis），3株菌株的比例為1∶1∶2。原菜籽粕產(chǎn)自湖北武漢，其底物組成為80%菜籽粕＋10%麩皮＋10%玉米粉，水料比為1∶1，總接種量為20%?；旌衔锉谎b入發(fā)酵罐后在（30±2）℃靜止發(fā)酵3 d。發(fā)酵前后菜籽粕營(yíng)養(yǎng)成分和抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的變化見表1。

表1 發(fā)酵前后菜籽粕營(yíng)養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 2 Nutrient co mposition in r apeseed meal and f er mented r apeseed meal（DM basis） %

1.3 試驗(yàn)飼糧

飼糧配制參考美國(guó)NRC（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要和中國(guó)肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004），按1～21日齡和22～42日齡2個(gè)階段配制飼糧，基礎(chǔ)飼糧為玉米－豆粕型飼糧。試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在國(guó)家糧食局科學(xué)研究院中試基地進(jìn)行。所有試驗(yàn)雞采用立體重疊式3層籠養(yǎng)，分階段飼養(yǎng)。全程采用粉料，從進(jìn)場(chǎng)就開始進(jìn)入試驗(yàn)。進(jìn)雞雛前1周，將雞舍及設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格清洗和消毒。采用空調(diào)、紅外燈和風(fēng)扇控溫。第1周室溫保持在33℃左右，每周降2℃，21日齡后雞舍溫維持在20℃，相對(duì)濕度控制在65%～67%。采用連續(xù)光照，自然通風(fēng)，整個(gè)試驗(yàn)期間自由采食和飲水。定期打掃圈舍衛(wèi)生。參照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能

分別于飼養(yǎng)肉仔雞的1、21和42日齡，以重復(fù)為單位稱雞只空腹重，同時(shí)記錄每個(gè)重復(fù)投料量和剩料重，計(jì)算2階段的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F／G）。記錄腹瀉與死亡情況，并在21和42日齡末計(jì)算各組的腹瀉率與死淘率。

1.5.2 免疫器官指數(shù)

分別于21和42日齡從每組中隨機(jī)抽取6只雞屠宰后，摘取脾臟、胸腺和法氏囊，稱鮮重以計(jì)算重量指數(shù)。

1.5.3 消化酶活性

21和42日齡時(shí)，采集屠宰雞只，收集十二指腸、空腸、回腸和盲腸的內(nèi)容物，－20℃保存。在未解凍前用分析天平稱重，然后按質(zhì)量體積比為1∶1的比例加入4℃的生理鹽水，在低溫（冰浴中）下勻漿30 s，然后用低溫離心機(jī)將勻漿液在2 500 r／min、4℃條件下離心10 min，取上清液若干后等分，－20℃條件下保存待測(cè)。蛋白酶的活性測(cè)定采用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB／T 10317—1999的方法，淀粉酶和脂肪酶的活性用試劑盒測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

表2 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 2 Co mposition and nutrient levels of experi mental diets（air－dry basis） %

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)過Excel 2003處理后，利用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件中的one－way ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著時(shí)采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，無論是在飼養(yǎng)前期（1～21日齡）還是后期（22～42日齡），發(fā)酵菜籽粕組肉仔雞的平均日采食量和平均日增重均優(yōu)于豆粕對(duì)照組和菜籽粕組（P＞0.05），發(fā)酵菜籽粕組的料重比低于菜籽粕組，與豆粕對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），但各組肉仔雞的平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著差異（P＞0.05）。發(fā)酵菜籽粕組較菜籽粕組可顯著提高肉仔雞全期（1～42日齡）的平均日增重3.73%（P＜0.05）。

表3 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞平均日增重、平均日采食量及料重比的影響Table 3 Eff ects of fer mented rapeseed meal on ADG，ADFI and F／G of br oilers

由表4可知，在試驗(yàn)前期和試驗(yàn)后期，發(fā)酵菜籽粕組的死淘率低于其他組，但差異不顯著（P＞0.05）；從腹瀉率來看，發(fā)酵菜籽粕組低于豆粕對(duì)照組和菜籽粕組，差異不顯著（P＞0.05）。

表4 發(fā)酵菜籽粕肉仔雞死淘率及腹瀉率的影響Table 4 Effects of fer mented rapeseed meal on mortality and diarrhea rate of broilers %

2.2 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞免疫器官的影響

由表5可知，21日齡發(fā)酵菜籽粕組提高了胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)。發(fā)酵菜籽粕組的肉仔雞胸腺和脾臟指數(shù)分別顯著高于菜籽粕組28.28%和36.58%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組的法氏囊指數(shù)高于豆粕對(duì)照組和菜籽粕組，但差異不顯著（P＞0.05）；42日齡菜籽粕組的肉仔雞脾臟指數(shù)顯著高于豆粕對(duì)照組51.00%（P＜0.05），而3組的胸腺和法氏囊指數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。

表5 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞免疫器官的影響Table 5 Eff ects of fer mented rapeseed meal on immune organs of broilers g／kg

2.3 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞消化酶活性的影響

由表6可知，21日齡時(shí)，與豆粕對(duì)照組相比，菜籽粕組十二指腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著降低了5.58%、2.36%和8.40%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組十二指腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了5.00%、3.04%和15.11%（P＜0.05）；菜籽粕組空腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性較豆粕對(duì)照組分別顯著降低了6.81%、2.64%和5.35%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組較豆粕對(duì)照組空腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了4.12%、3.56%和18.30%（P＜0.05）；與豆粕對(duì)照組相比，菜籽粕組回腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著降低了6.53%、2.59%和7.69%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組空腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了4.62%、4.28%和15.03%（P＜0.05）；與豆粕對(duì)照組相比，菜籽粕組盲腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著降低了7.17%、2.78%和4.96%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組盲腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了4.23%、4.29%和17.58%（P＜0.05）。

42日齡時(shí)，菜籽粕組十二指腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性較豆粕對(duì)照組分別降低了6.67%（P＜0.05）、1.32%（P＜0.05）和5.77%（P＞0.05），發(fā)酵菜籽粕組較豆粕對(duì)照組十二指腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了5.96%、4.33%和12.98%（P＜0.05）；菜籽粕組空腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性較豆粕對(duì)照組分別顯著降低了5.48%、2.55%和6.46%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組空腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性較豆粕對(duì)照組分別顯著提高了3.91%、3.73%和21.09%（P＜0.05）；與豆粕對(duì)照組相比，菜籽粕組回腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著降低了6.66%、2.32%和0.71%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組回腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了4.15%、4.73%和15.49%（P＜0.05）；與豆粕對(duì)照組相比，菜籽粕組盲腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著降低了6.75%、1.70%和4.35%（P＜0.05），發(fā)酵菜籽粕組盲腸蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性分別顯著提高了3.56%、5.67%和19.26%（P＜0.05）。

3 討 論

3.1 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

許多研究報(bào)道表明，影響菜籽粕在家禽飼料中使用的限制因素主要是對(duì)畜禽有毒副作用的硫代葡萄糖甙、單寧和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)，從而在很大程度上制約了其在飼料中的應(yīng)用［9］。本研究利用混菌固態(tài)發(fā)酵菜籽粕有效地降低硫代葡萄糖甙等抗?fàn)I養(yǎng)因子的同時(shí)，提高了菜籽粕的粗蛋白質(zhì)和小肽含量，改善了菜籽粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和適口性，這與 Vig等［10］和孫宏［11］的報(bào)道一致。研究顯示，菜籽粕經(jīng)過發(fā)酵處理，使其中的抗?fàn)I養(yǎng)因子去除或減少，能有效提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能［5］。本研究結(jié)果表明，飼糧中固態(tài)發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞1～21日齡、22～42日齡及1～42日齡的平均日采食量和料重比均無顯著影響，這與余勃等［7］的結(jié)論相一致，發(fā)酵菜籽粕還降低了肉仔雞的腹瀉率和死淘率，但差異不顯著。而未發(fā)酵菜籽粕組降低了采食量，增加了死淘率，影響了肉仔雞的生長(zhǎng)性能，這與 Mc Neill等［12］的研究相一致。發(fā)酵菜籽粕組肉仔雞全期的平均日增重顯著高于未發(fā)酵菜籽粕組，這表明除采食量外，代謝能、蛋白質(zhì)和氨基酸的生物利用率及硫代葡萄糖甙含量也是引起肉仔雞生長(zhǎng)性能的關(guān)鍵，而發(fā)酵菜籽粕降解產(chǎn)生的小肽易于消化吸收，可能對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能具有改善作用。

表6 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞消化酶活的影響Table 6 Effects of fer mented rapeseed meal on digestive enzy me activity of broilers U／g

3.2 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞免疫功能的影響

肉仔雞脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)反映機(jī)體主要免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育狀況，是從免疫器官發(fā)育的角度評(píng)價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)。免疫器官的發(fā)育狀況直接影響機(jī)體免疫應(yīng)答水平和抵抗外來微生物感染和入侵的能力，其絕對(duì)重量和相對(duì)重量的增加或降低，可表明機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫機(jī)能增強(qiáng)或降低［13－15］。由本試驗(yàn)結(jié)果來看，無論是在前期還是后期發(fā)酵菜籽粕對(duì)法氏囊指數(shù)均無顯著影響，發(fā)酵菜籽粕能夠顯著提高肉仔雞前期的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，但在肉仔雞生長(zhǎng)后期，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均沒有產(chǎn)生顯著變化。胸腺是家禽的一級(jí)淋巴器官，而脾臟則是家禽體內(nèi)最大的淋巴器官，因此肉仔雞的胸腺和脾臟相對(duì)重量增加，意味著發(fā)酵菜籽粕可以刺激肉仔雞的免疫應(yīng)答反應(yīng)，促進(jìn)肉仔雞免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)肉仔雞的免疫功能，這在發(fā)酵菜籽粕應(yīng)用試驗(yàn)中尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)制備的發(fā)酵菜籽粕的活菌數(shù)達(dá)到1.4×109CFU／g，Li等［16］曾證實(shí)，芽孢桿菌能夠刺激肉仔雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)的增加，因此推斷胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的增加可能與菜籽粕發(fā)酵后產(chǎn)生了芽孢桿菌等有益微生物有關(guān)，對(duì)此有待于進(jìn)一步研究。

3.3 發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉仔雞消化酶活性的影響

消化酶是動(dòng)物消化利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的首要工具，其活性高低直接影響到動(dòng)物對(duì)飼料的利用程度［17］。十二指腸、空腸、回腸和盲腸內(nèi)容物中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性的變化是反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)、淀粉和脂肪消化能力的一個(gè)重要指標(biāo)［18］。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵菜籽粕可顯著提高肉仔雞十二指腸、空腸、回腸和盲腸的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。發(fā)酵菜籽粕能提高肉仔雞腸道消化酶活性，可能是以下幾方面的原因：1）菜籽粕經(jīng)發(fā)酵處理后，其中的硫代葡萄糖甙等抗?fàn)I養(yǎng)因子已經(jīng)大部分被去除，肉仔雞采食進(jìn)入消化道后，對(duì)腸道不會(huì)造成過敏反應(yīng)和損傷，從而保證消化酶的正?；钚裕?9］；2）增加了肉仔雞小腸各段絨毛高度，降低了隱窩深度，有效地維持了腸絨毛的光滑平整狀態(tài)，提高了消化酶活性；3）發(fā)酵產(chǎn)生的小肽類物質(zhì)能顯著增加腸道食糜中蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等消化酶的分泌與活性［20］。發(fā)酵菜籽粕中乳桿菌分泌的乳酸能激活酸性蛋白酶活性，在消化過程中與體內(nèi)的酶起到協(xié)同作用，也可使腸道環(huán)境偏酸性，有利于刺激腸壁消化腺的代謝分泌活動(dòng)，增加消化酶的分泌量，提高消化酶的活力。但具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

①固態(tài)發(fā)酵菜籽粕等氮替代基礎(chǔ)飼糧中25%的豆粕對(duì)肉仔雞全期的平均日采食量無顯著影響。

②固態(tài)發(fā)酵菜籽粕等氮替代基礎(chǔ)飼糧中25%的豆粕可明顯提高肉仔雞的免疫能力和腸道消化酶活性，有利于提高肉仔雞全期平均日增重，促進(jìn)肉仔雞的生長(zhǎng)。

［1］ 席鵬彬，馬永喜.中國(guó)菜籽餅粕化學(xué)組成特點(diǎn)及其影響因素的研究［J］.中國(guó)畜牧雜志，2004，40（10）：12－15.

［2］ CAMPBELL L D，SMITH T K.Response of growing chicks to high dietar y content of rapeseed meal［J］.Britain Poultry Science，1979，20：231－237.

［3］ ELANGOVAN A V，VERMA V S，SASTRYV R B，et al.Eff ect of feeding high glucosinolate rapeseed meal to laying Japanese quail［J］.Asian－Australasian Jour nal Ani mal Science，2001，14：1304－1307.

［4］ SUN Z D，ISMOND M A H.Study on the extraction，isolation of canola meal protein after removing the phenolic co mpounds［J］.Jour nal of Huazhong Agricultural University，1999，18（4）：394－396.

［5］ 吳文明，張麗娟.發(fā)酵菜粕對(duì)仔豬生產(chǎn)性能影響的試驗(yàn)研究［J］.飼料廣角，2010，2：23－24.

［6］ 蔣玉琴，李榮林.復(fù)合菌脫毒菜籽餅粕及其應(yīng)用Ⅱ：日糧添加脫毒菜粕對(duì)三黃雞生長(zhǎng)的影響［J］.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2001，17（1）：52－55.

［7］ 余勃，游金明.固態(tài)發(fā)酵菜粕替代日糧中豆粕對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2009，21（2）：239－244.

［8］ CHIANG G，LU W Q，PIAO X S，et al.Effects of feeding solid－state f er mented rapeseed meal on perf or mance，nutrient digestibility，intestinal ecology and intestinal morphology of broiler chickens［J］.Asian－Australasian Jour nal Ani mal Science，2010，23（2）：263－271.

［9］ TRIPATHI M K，MISHRA A S.Glucosinolates in animal nutrition：a review［J］.Ani mal Feed Science and Technology，2006，132：1－27.

［10］ VIG A P，WALIA A.Beneficial effects of Rhizopusoligospor us f er mentation on reduction of glucosinolates，fibre and phytic acid in r apeseed （Brassica napus）meal［J］.Bioresource Technology，2001，78（3）：309－312.

［11］ 孫宏.微生物發(fā)酵法對(duì)菜粕脫毒及蛋白質(zhì)改良的研究［D］.碩士學(xué)位論文.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009：60－64.

［12］ MCNEILL L，BEMARD L K，MACLEOD M G.Food intake，gr owth rate，f ood conversion and f ood choice in br oilers fed on diets high in r apeseed meal and pea meal with observations of the resulting poultry meat［J］.Britain Poultry Science，2004，45：519－523.

［13］ STUKIE P D，BENZO C A.Avian physiology［M］.New Yor k：Springer－Verlag，1986.

［14］ KATANBAF M N，DUNNINGTON E A，et al.Re－stricted f eeding in early and late－f eathering chickens［J］.Poultry Science，1989，68：344－351.

［15］ 何濤.棉籽粕的發(fā)酵脫毒及其在肉仔雞中的應(yīng)用研究［D］.碩士學(xué)位論文.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2008：44.

［16］ LI S P，ZHAO X J，WANG J Y.Synergy of astragalus polysaccharides and pr obiotics（Lactobacillus and Bacillus cereus）on i mmunity and intestinal micr obiota in chicks［J］.Poultry Science，2009，88（2）：519－525.

［17］ 羅輝，劍葉華.微生態(tài)制劑對(duì)魚類腸道結(jié)構(gòu)和消化酶活性的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2006，25（2）：105－108.

［18］ 楊鳳.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999：18－21.

［19］ 劉海燕，閆曉剛.發(fā)酵酶解豆粕對(duì)小鼠血液抗氧化指標(biāo)和胃腸道消化酶活性及腸道菌群的影響［J］.中國(guó)畜牧雜志，2011，47（21）：41－44.

［20］ 王恬，傅永明，呂俊龍，等.小肽營(yíng)養(yǎng)素對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能及小腸發(fā)育的影響［J］.畜牧與獸醫(yī)，2003，35（6）：4－8.