陳宇 杜勇 李浩渤

Fascin蛋白是由Bryan等［1］在海膽的卵母細胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)，又稱為聚束蛋白，是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白。它與F-肌動蛋白結(jié)合后的結(jié)構(gòu)加強了肌動蛋白細胞骨架，對細胞移動起著重要作用［2］。研究發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白的增加可引起腫瘤細胞膜表面突起增多，增殖旺盛，影響細胞黏附能力的改變，改變細胞與細胞外基質(zhì)的黏附能力，增強腫瘤細胞的運動能力，以及通過細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等途徑增強腫瘤組織的局部侵襲轉(zhuǎn)移能力。以往研究發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在多種腫瘤組織和癌前病變組織中呈現(xiàn)上調(diào)表達［3］。Fascin蛋白在腫瘤細胞中的上調(diào)表達與腫瘤組織分級、淋巴遷移及侵襲密切相關(guān)，研究Fascin蛋白對腫瘤早期診斷、預(yù)后判定、輔助治療選擇具有重要意義。本研究通過免疫組化的試驗方法檢測fascin蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及與口腔鱗狀細胞癌組織學(xué)分級的關(guān)系，為口腔鱗狀細胞癌的預(yù)后判斷及臨床治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 試驗組(OSCC組):收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院1991年至2009年口腔鱗狀細胞癌蠟塊標(biāo)本60例(取標(biāo)本前未經(jīng)任何治療)。其中男38例，女22例;年齡41～77歲，平均年齡58.7歲。根據(jù)國際腫瘤組織學(xué)分級，試驗標(biāo)本分為高分化(well differentiated)31例、中度分化(moderately differentiated)21例、低分化(poorly differentiated)8例，標(biāo)本均經(jīng)有經(jīng)驗的病理醫(yī)師閱片后確診。對照組(NM組):正常口腔黏膜組織40例，均取自囊腫旁及牙槽骨整形手術(shù)時切除的正常黏膜組織。其中男25例，女15例;年齡21～68歲，平均年齡40.5歲。

1.2 主要試劑與儀器 試劑:SP免疫組化試劑盒、一抗(購自博士德分裝抗體)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑、多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購于河北博海生物有限公司。儀器:Olympus PM-10ADS型雙目顯微鏡、LEICA石蠟切片機，ZHPY-型恒溫式附貼切片展片儀(河北醫(yī)科大學(xué))，多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(tǒng)(美國Media Cybernetics公司Image-Pro Plus)、離心機(北京離心機廠 LDZ5-2型)、移液器(德國 EPPENDORF)、低溫冰箱(日本三洋MDF-382E型)、PGB/20-002臺式保溫培育箱(中華人民共和國重慶試驗設(shè)備廠)、ZD-Ⅲb快速生物試驗用微波爐(上海中達醫(yī)學(xué)醫(yī)用研究所)。

1.3 對照試驗 用已知的Fascin蛋白陽性的胃癌標(biāo)本作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.4 試驗方法 采用免疫組織化學(xué)SP法(過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素法)。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個蠟塊切為5 μm的切片，共切4張，1張HE染色，1張作為陰性對照，1張Fascin蛋白染色，。

1.5 結(jié)果判定 Fascin蛋白染色判定參照Hashimoto的標(biāo)準(zhǔn)，以細胞膜和細胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒為陽性染色，每張切片隨機計數(shù)10個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞。據(jù)陽性細胞百分率判定:(1)未見棕黃色顆粒為陰性;(2)＜25%為弱陽性(+);(3)25%～75%為陽性(++);(4)＞75%為強陽性(+++)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組Fascin蛋白陽性率比較 Fascin蛋白在在40例正?？谇火つ?biāo)本中均呈陰性表達(圖1);在60例口腔鱗狀細胞癌標(biāo)本共41例呈現(xiàn)陽性表達(圖2)，陽性率為68.33%，陽性率顯著高于對照組(P＜0.01)。見表1。

圖1 正常組織中Fascin蛋白表達(SP×400)

圖2 口腔磷狀細胞癌中Fascin蛋白表達(SP×400)

3 討論

表1 2組Fascin陽性率比較 例

2.2 Fascin表示與臨床指標(biāo)的關(guān)系 Fascin蛋白的表達與鱗癌的組織學(xué)分級具有相關(guān)性，鱗癌的分化越低，F(xiàn)ascin蛋白的陽性表達率越高(P＜0.05)，而患者性別、年齡間表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2、3。

表2 Fascin蛋白表達與磷癌組織學(xué)分級比較 例

表3 Fascin表達與性別和年齡的關(guān)系 例

Fascin蛋白又稱為聚束蛋白，是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，是由Bryan等［1］在海膽的卵母細胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)并提取出來。Fascin蛋白的mRNA全長為2 767 bp，分子質(zhì)量為55×103，由全編碼序列區(qū)1 482 bp、6個ployA信號肽、3’端非翻譯區(qū)1 174 bp堿基和5’端非翻譯區(qū)111 bp堿基共同組成，可以編碼493個氨基酸，其蛋白質(zhì)編碼的產(chǎn)物為一種細胞骨架蛋白。Fascin家族包括3種蛋白，本研究指的是Fascin-1蛋白，其主要在間葉組織和神經(jīng)系統(tǒng)有廣泛表達，它是從HeLa細胞中純化而來的，在人類的基因中有兩個定位，其中一個定位于染色體的7q22，該位點可以被激活;另一個定位于15q12，該位點缺乏部分內(nèi)含子序列，因此該位點不能被激活。

Fascin蛋白結(jié)構(gòu)中中的磷酸化位點與蛋白激酶之間存在著復(fù)雜反應(yīng)，在調(diào)節(jié)fascin蛋白的結(jié)合活性，膜表面?zhèn)巫愫臀⒓男纬煞矫婢哂兄匾淖饔茫?］。Fascin蛋白的增加可引起腫瘤細胞膜表面突起增多，增殖旺盛，改變細胞間及與細胞外基質(zhì)的黏附能力，增強腫瘤細胞的運動能力，即增強腫瘤組織的局部侵襲轉(zhuǎn)移能力。

目前Fascin蛋白與口腔鱗狀細胞癌的研究并不多見，以往研究發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在許多上皮來源的惡性腫瘤組織(如侵襲性膀胱上皮癌、乳腺癌和非小細胞肺癌等)及腫瘤細胞系(如宮頸癌細胞、胃癌細胞、結(jié)直腸癌細胞等)中均呈高表達［3］，這與本試驗的研究結(jié)果是一致的，本試驗中在40例正?？谇火つ?biāo)本中均呈陰性表達;在60例口腔鱗狀細胞癌標(biāo)本共41例呈現(xiàn)陽性表達，陽性率為68.33%，陽性率顯著高于對照組(P＜0.01)，國內(nèi)學(xué)者王宇、王德明等也試驗證實口腔鱗狀細胞癌的Fascin蛋白表達顯著高于正常黏膜組織［5，6］。

腫瘤細胞侵襲鄰近組織必須具有突破基底層同時成為單個轉(zhuǎn)移細胞的能力，因此細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)黏附特性的改變顯著影響了腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移行為［7］。Fascin蛋白作為一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，其異常表達可增加細胞膜突起、改變細胞與細胞外基質(zhì)的黏附以及通過細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等途徑使細胞的運動能力增加8～17倍，提高了細胞的運動性和移動性，使細胞產(chǎn)生了惡性行為，促進腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移。王宇［5］試驗證實fascin蛋白的表達與口腔鱗狀細胞癌的分期、分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且高表達組復(fù)發(fā)率和生存時間顯著高于低或無表達組。Chen等［8］研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin蛋白與口腔鱗狀細胞癌遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)，但Fascin蛋白高表達與低表達組遠處轉(zhuǎn)移率差異無顯著性。遺憾的是由于部分資料不完整的緣故本試驗中并未對Fascin蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系進行研究。本試驗結(jié)果表明口腔鱗狀細胞癌的組織學(xué)分級越低，F(xiàn)ascin蛋白的陽性表達越高，高分化鱗癌中Fascin蛋白的陽性率48.39%，中分化中85.71%，低分化中100%。顯示Fascin蛋白的表達口腔鱗狀細胞癌分級相關(guān)，這在一定程度上也說明了Fascin蛋白與腫瘤的分化增殖、遷移及侵襲密切相關(guān)。同時有研究表明在細胞的遷移過程中，通過抗體來抑制fascin蛋白與F-肌動蛋白的結(jié)合，可以完全或部分的阻止細胞的擴散和遷移［9］。這些結(jié)果提示，經(jīng)過更進一步的研究Fascin蛋白有望成為判斷口腔鱗狀細胞癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一，并有望成為臨床基因治療的主要靶點，干預(yù)并阻斷原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移，對判定預(yù)后、輔助治療的選擇、提高口腔鱗狀細胞癌的療效具有重要的意義。

1 Bryan J，Kane RE.Separation and interaction of themajor components of sea urchin actin gel.J Mol Biol，1978，125:207-224.

2 Chol PJ.Fascin immunore activity for preoperatively predicting lymph node metastases in peripheral adenocarcinoma of the lung 3cm or less in diameter.Eur J Cardiothorac Surg，2006，30:538-542.

3 Chen SF，Yang SF，Li JW，et al.Expression of Fascin in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas has prognostic significance:a tissue microarray study of 129 cases.Histopathology，2007，51:173-183.

4 Adams JC，Clelland JD，Collett G，et al.Cell-matrix adhesions differentially regulate fascin phosphorylation.Mol Biol Cell，1999，10:4177-4190.

5 王宇.Fascin和ki67在口腔鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義.中國癌癥雜志，2009，19:257-260.

6 王德明.Fascin口腔鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義.口腔頜面外科雜志，2008，18:11-14.

7 GuoW，Giancotti FG.Integrin signalling during tumour progression.Nat Rev Mol Cell Biol，2004，5:816-826.

8 Chen SF，Yang SF，Li JW，et al.Expression of Fascin in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas has prognostic significance:a tissue microarray study of 129 cas.Histopathology，2007，51:173-183.

9 Anilkumar N，ParsonsM，Monk R，et al.Interaction of fascin and protein kinaseC alpha:A novel intersection in cell adhesion and motility.EMBO J，2003，22:5390-5402.