賈靜 孟令華

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其主要死亡原因是術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，臨床尚無可靠的方法做到早期監(jiān)測(cè)。因此探討乳腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)是乳腺癌基因研究和臨床研究的重要課題。本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)乳腺癌組織中特異基因(BCSG1)、增殖細(xì)胞核抗原(Ki67)的表達(dá)，結(jié)合臨床病理因素分析它們之間的相關(guān)性，對(duì)指導(dǎo)乳腺癌的治療和預(yù)后的判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 收集本院2008年10月至2010年8月住院的62例女性乳腺癌患者的病理組織。組織標(biāo)本以10%甲醛溶液固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制備4 μm厚連續(xù)切片3張，貼附于用多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤片2 h，室溫保存，以備檢測(cè) BCSG1、Ki67。

1.2 試劑 羊抗人BCSG1單克隆抗體(sc-10699)購自美國SANTA CRUZ公司，Ki67單克隆抗體(zm-0166)購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化法 石蠟切片常規(guī)脫蠟;高壓煮沸2 min進(jìn)行抗原熱修復(fù)處理;蒸餾水洗后經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)沖洗，加入一抗BCSG1、Ki67，4℃過夜孵育;PBS緩沖液沖洗3次，2 min/次，加入二抗孵育1 h;PBS緩沖液沖洗，加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。蒸餾水洗后蘇木素復(fù)染，自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，封片。

1.4 結(jié)果判定 BCSG1評(píng)定參考Mohsin等［1］報(bào)道的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行改良，主要為細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性細(xì)胞，少數(shù)病例可見胞核著色，采用陽性細(xì)胞比例評(píng)定結(jié)果，陽性細(xì)胞＜25%為陰性(－);25% ～50%為弱陽性(+);51% ～75%為中陽性(++);＞75%為強(qiáng)陽性(+++);－～+為低表達(dá)，++～+++為高表達(dá)。Ki67評(píng)定參考許良中等［2］標(biāo)準(zhǔn)，以陽性細(xì)胞為核著色，采用陽性細(xì)胞比例評(píng)定結(jié)果，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性(－);10% ～25%為弱陽性(+);26% ～50%為中陽性(++);＞50%為強(qiáng)陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料的相關(guān)性分析使用spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的表達(dá) 62例乳腺癌組織中，BCSG1、Ki67 的陽性表達(dá)率分別為:69.35%(43/62)和61.29%(38/62)。見表 1。

表1 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的表達(dá) n=62，例

2.2 BCSG1、Ki67表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 BCSG1、Ki67的表達(dá)在乳腺癌淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、臨床不同分期間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而與年齡、腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05)。見表2。

表2 BCSG1、Ki67表達(dá)與乳腺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系例(%)

2.3 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的共同表達(dá)及相互關(guān)系BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的共同表達(dá)陽性率為30.65%(19/62)，且二者陽性表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.309，P＜0.05)。見表3。

表3 BCSG1、Ki67二者表達(dá)的相關(guān)關(guān)系 例

2.4 BCSG1、Ki67在乳腺癌組織中的共同表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 BCSG1、Ki67乳腺癌組織共表達(dá)陽性在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否，臨床分期間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表4。

表4 BCSG1、Ki67的共同表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系例(%)

3 討論

BCSG1是1997年Ji等［3］利用直接差異cDNA序列分析克隆出的SNCs(neural protein synuclein)家族的新成員，該基因在浸潤性乳腺癌中高度表達(dá)，而在正常乳腺組織及良性病變中幾乎不表達(dá)。因此BCSG1是一種特異的在乳腺癌中有選擇性表達(dá)的原癌基因，其定位于人類染色體10q23，DNA分子量約5 kb，含5個(gè)外顯子，轉(zhuǎn)錄得1 kb mRNA，編碼一條含127個(gè)氨基酸的蛋白［4］。吳克瑾等［5］報(bào)道，BCSG1的表達(dá)與乳腺癌分期密切相關(guān)，與患者年齡、月經(jīng)、腫瘤部位以及雌、孕激素受體、核增殖抗原、c-erbB-2的表達(dá)等均無相關(guān)性，認(rèn)為BCSG1可能是與腫瘤惡性進(jìn)展有關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，是判斷乳腺癌預(yù)后的新指標(biāo)［6］。我們利用免疫組化分析62例乳腺癌組織中BCSG1的表達(dá)狀況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:乳腺癌組織中BCSG1陽性表達(dá)率高達(dá)69.35%，且乳腺癌組織中BCSG1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(P＜0.05)。本研究與吳克瑾等［5］利用 RT-PCR的方法檢測(cè)結(jié)果及王鑫等［7］利用免疫組化方法檢測(cè)結(jié)果基本一致。因此，我們認(rèn)為BCSG1是乳腺癌發(fā)生過程中的中晚期事件，對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，有助于對(duì)乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的評(píng)估。

增殖細(xì)胞核抗原(Ki67)是1983年由劉剛等［8］發(fā)現(xiàn)的，是一種增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，僅在增殖細(xì)胞核中表達(dá)，被認(rèn)為是較理想的檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，可用以指導(dǎo)乳腺癌的治療。國外一些報(bào)道［9］也認(rèn)為Ki67的表達(dá)對(duì)乳腺癌預(yù)后判斷有重要意義。趙鷹等［10］在乳腺癌中Ki67、Her-2和nm23的表達(dá)及臨床意義的研究中得出Ki67基因在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組中的表達(dá)率為57.89%，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中的表達(dá)率則高達(dá)78.79%，認(rèn)為其表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。朱學(xué)強(qiáng)等［11］在乳腺癌組織中VEGF、c-erbB-2、P53及Ki67的表達(dá)與臨床意義研究中也發(fā)現(xiàn)Ki67基因表達(dá)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。而樸正日等［12］研究發(fā)現(xiàn)Ki67在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)為78.0%，其表達(dá)與乳腺癌腫瘤大小和臨床分期有顯著相關(guān)性，與患者的年齡、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)Ki67在乳腺癌中的表達(dá)與年齡、腫瘤大小均無關(guān)(P＞0.05)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)(P＜0.05)，與高睿心［13］報(bào)道近似，說明Ki67在乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中扮演著重要角色，可作為評(píng)價(jià)乳腺癌發(fā)生發(fā)展的生物指標(biāo)。

本研究中，BCSG1、Ki67在乳腺癌中的陽性表達(dá)率分別為69.35%、61.29%，二者共同陽性表達(dá)率為 30.65%，共同陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期呈相關(guān)性(P＜0.05)，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BCSG1及Ki67在乳腺癌中的陽性表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)，說明二者的共同表達(dá)與腫瘤預(yù)后不良相關(guān)，可協(xié)助乳腺癌的預(yù)后判斷。

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