魏寶柱 萬 靜

武漢大學(xué)中南醫(yī)院心血管內(nèi)科，武漢430071

目的：通過缺氧誘導(dǎo)與ox-LDL的相互作用，分析體外缺氧條件下實驗兔VSMC增殖、遷移相關(guān)基因的表達及生物學(xué)行為的改變；探討缺氧參與VSMC增殖、遷移，加重AS硬化程度的可能機制。方法：原代培養(yǎng)兔主動脈VSMC，傳至第3代進行實驗。用不同濃度的ox-LDL誘導(dǎo)細胞，并采用低氧環(huán)境（＜5%O2）進行實驗。采用real time PCR和Western Blotting檢測HIF1-α、VEGF及其受體、MMP9基因的表達變化；采用BrdU摻入法分析細胞增殖能力；細胞劃痕實驗檢測VSMC的隨機遷移能力。結(jié)果：（1）單純?nèi)毖酢⒉煌瑵舛萶x-LDL以及兩者共同作用，均可刺激Hif-1a、VEGF及其受體、MMP9基因的mRNA和蛋白質(zhì)表達升高（P＜0.05），而且在0～50μg／ml濃度范圍內(nèi)，ox-LDL的誘導(dǎo)作用呈濃度依耐性，缺氧與ox-LDL對于上述基因的誘導(dǎo)具有協(xié)同作用。（2）通過計算BrdU摻入率，單純?nèi)毖蹩梢灾苯哟碳SMC增殖；0～50μg／ml的ox-LDL呈劑量依耐性促進VSMC增殖；而且缺氧與較低濃度ox-LDL（＜50μg／mL）具有協(xié)同作用，其中5、10、20和40μg／ml的ox-LDL作用24h后，BrdU 摻入率依次為7.6%±2.2%、14.8%±4.6%、25.7%±3.1%、28.4%±2.8%，與對照組存在顯著差異（P＜0.05）；但是在高濃度ox-LDL（＞50g／ml）的作用下，由于細胞毒性作用，缺氧誘導(dǎo)的VSMC增殖受到抑制（P＜0.05）。（3）細胞劃痕實驗表明，單純?nèi)毖鯒l件下，細胞的遷移速度與對照組無顯著性差異（P＞0.05）；而較低濃度ox-LDL呈劑量依耐性促進VSMC遷移，其中25μg／ml ox-LDL作用24h后，實驗組和對照組VSMC的遷移距離分別為47.32±8.2μm和65.19±6.5μm，ox-LDL處理組VSMC遷移率明顯高于對照組（P＜0.05）。但缺氧對ox-LDL誘導(dǎo)遷移無明顯影響（P＞0.05）。結(jié)論：缺氧可以上調(diào)ox-LDL誘導(dǎo)的兔主動脈VSMC的HIF1-α、VEGF及其受體、MMP9基因的核酸及蛋白質(zhì)表達水平；缺氧和ox-LDL單獨或者聯(lián)用，均可促進VSMC增殖，但是缺氧對ox-LDL誘導(dǎo)的VSMC遷移無影響。推測AS斑塊局部缺氧誘導(dǎo)VSMC增殖而加重AS程度。