王 瑩 胡鵬超 宋 輝 李明梅 湯夢(mèng)婕 楊 芳 魏 蕾

武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，武漢430071；1病理學(xué)與病理生理學(xué)系；2生理學(xué)系；3武漢大學(xué)中南醫(yī)院腫瘤科，武漢430071

目的：青蒿素是從中藥青篙中提取的有過氧基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯藥物，是一種高效、速效的抗瘧中草藥物，并在腫瘤輔助治療中具有免疫調(diào)節(jié)功能。本實(shí)驗(yàn)著重觀察青蒿素對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖及對(duì)細(xì)胞骨架蛋白F-actin的影響，并探討其機(jī)制。方法：用RPMI-1640培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞：（1）按照約每孔1×104個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，培養(yǎng)基中加入不同濃度的青蒿素（0.1μg／ml、1μg／ml、10μg／ml、20μg／ml、40μg／ml、80μg／ml、100μg／ml、1 000μg／ml）和0.1%的二甲基亞砜（DMSO）作為對(duì)照，48h后加入10μl的噻唑藍(lán)（MTT）（5mg／ml），孵育4h后加入100μl DMSO，在570nm酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光值。（2）將 MDA-MB-231細(xì)胞種在內(nèi)置有玻片的24孔板內(nèi)，加入不同濃度的青蒿素（1μg／ml、10μg／ml、50μg／ml）以及用0.1%的DMSO作為溶劑對(duì)照組，待細(xì)胞處理3h后，采用4%多聚甲醛固定10min，0.1%Triton X-100室溫孵育15min，山羊血清室溫孵育2h，避光條件下加入F-actin特異性染料phalloidin對(duì)F-actin進(jìn)行著色，孵育40min后再用1μg／ml DAPI染色1min，0.01MPBS漂洗，在激光共聚焦顯微鏡下觀察。結(jié)果：（1）MTT結(jié)果顯示各種濃度青蒿素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞作用48h后，對(duì)該細(xì)胞的增殖沒有顯示出抑制或促進(jìn)作用（P＞0.05）；（2）激光共聚焦顯微鏡觀察顯示，對(duì)照組細(xì)胞的F-actin主要環(huán)繞于細(xì)胞周邊，形成周邊肌動(dòng)蛋白絲帶，在細(xì)胞與細(xì)胞接觸部位呈束狀相互連接；而10μg／ml青蒿素作用的MDA-MB-231細(xì)胞可見細(xì)胞骨架F-actin出現(xiàn)重排，表現(xiàn)為外周致密帶邊緣毛糙不規(guī)整，出現(xiàn)環(huán)點(diǎn)狀斷裂，細(xì)胞中央有彌散actin，周邊肌動(dòng)蛋白絲帶模糊變細(xì)，在細(xì)胞皮質(zhì)區(qū)的F-actin纖維致密斑減少，細(xì)胞骨架明顯受到干擾。結(jié)論：青蒿素對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖作用沒有明顯影響，但是能夠抑制F-actin的聚集，破壞細(xì)胞骨架。提示青蒿素可能通過影響乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的F-actin的聚集，影響腫瘤細(xì)胞的遷移能力。