問 明，任莉莉，馬振峰，張卓奇，崔乃鵬，陳保平

(河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北保定071000)

近年研究顯示，非受體型酪氨酸激酶Syk作為惡性腫瘤預(yù)后判斷的指標(biāo)受到越來越多的關(guān)注。直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤，研究探尋與其密切相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記物對臨床治療有重要意義。2009年6月，我們應(yīng)用免疫組化法檢測了Syk及NF-κB在直腸癌組織中的表達(dá)，旨在探討Syk在直腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的可能作用機(jī)制為臨床治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機(jī)選取我院2007～2008年手術(shù)切除的直腸癌病理標(biāo)本共50例(直腸癌組)，手術(shù)前均未經(jīng)任何治療，術(shù)前腸鏡活檢病理及術(shù)后病理均證實為原發(fā)性直腸癌?；颊咂骄挲g52.3歲(其中≥60歲32例，＜60歲18例)，男33例、女17例;腺癌36例，黏液腺癌9例，未分化癌5例;根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(UICC 2009年)Ⅰ及Ⅱ期18例(無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)，Ⅲ及Ⅳ期32例(有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移);根據(jù)細(xì)胞異型性及排列極性情況低度分化及未分化10例，中度分化31例，高度分化9例。另選癌旁正常組織10份(經(jīng)病理HE染色證實)作為對照組。

1.2 Syk及NF-κB表達(dá)檢測 取兩組標(biāo)本，經(jīng)甲醛液浸泡固定后常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片3張，HE染色1張，免疫組織化學(xué)染色2張，70℃烤箱烤片2 h，免疫組化染色步驟依照試劑盒說明書進(jìn)行(其中通用型免疫組化SP 試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)公司，兔抗人NF-κB單克隆抗體購自Santa Cruz公司，鼠抗人單克隆Syk抗體購自NeoMarkers公司)。染色結(jié)果判定:應(yīng)用光學(xué)顯微鏡于高倍視野(×400)下對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，計算陽性細(xì)胞百分比，以棕黃色顆粒定位明確、明顯染色者為陽性，弱染色或不染色者為陰性;陽性細(xì)胞＜10%為(－)、10%～25%為(+)、26%～50%為(++)、＞50%為(+++)，其中(－)及(+)判為陰性、(++)及(+++)判定為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。率的比較及相關(guān)性分析采用四格表法及χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Syk、NF-κB表達(dá)及其相關(guān)性 直腸癌組NF-κB陽性表達(dá)33例(66.0%)、Syk表達(dá)缺失(陰性) 20例(40.0%)，對照組NF-κB表達(dá)均為陰性、而Syk表達(dá)均呈陽性，組間比較P分別＜0.01及0.05; Syk與 NF-κB表達(dá)存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)，見表1。

表1 直腸癌組Syk、NF-κB表達(dá)(例)

2.2 Syk表達(dá)與直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Syk表達(dá)與直腸癌腫瘤細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，與年齡、性別無顯著相關(guān)(P＞0.05)，見表2。

表2 Syk表達(dá)與直腸癌患者臨床病理指標(biāo)的關(guān)系(例)

3 討論

Syk編碼基因為SYK，廣泛表達(dá)于造血細(xì)胞中，是磷酸化免疫受體活化基序首選招募的對象，與ZAP-70屬于同一酪氨酸激酶家族［1］。近期研究顯示，Syk與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，如正常乳腺組織及非侵襲性乳腺癌細(xì)胞株中均可檢測到Syk表達(dá)，而侵襲性乳腺癌細(xì)胞株Syk的表達(dá)降低甚至缺失;Syk具有抑制乳腺癌細(xì)胞增殖及促其凋亡的作用，Syk陰性乳腺癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染野生型Syk后接種裸鼠形成的腫瘤較未轉(zhuǎn)染者接種裸鼠形成的腫瘤直徑小，且出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移的風(fēng)險明顯降低［2，3］。研究發(fā)現(xiàn)，Syk與消化道腫瘤的發(fā)生存在密切關(guān)系［4～8］。甲基化是腫瘤抑制因子基因沉默的主要機(jī)制［9，10］，Yun等［11］研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織的SYK基因出現(xiàn)超甲基化，而癌旁正常乳腺組織的SYK基因不發(fā)生甲基化，推測Syk表達(dá)缺失發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，可能由SYK基因CpG島超甲基化所致SYK基因沉默引起。本研究顯示，直腸癌組Syk表達(dá)缺失者占40.0%，而對照組均為陽性表達(dá)，組間比較存在明顯差異;Syk表達(dá)與腫瘤侵襲性及腫瘤細(xì)胞分化程度關(guān)系密切。提示Syk表達(dá)缺失與直腸癌發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，Syk表達(dá)缺失的直腸癌具有更高的侵襲性和轉(zhuǎn)移傾向，Syk對直腸癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移有一定抑制作用。

NF-κB是重要的核轉(zhuǎn)錄因子，參與多種基因調(diào)控、機(jī)體免疫應(yīng)答和細(xì)胞死亡的信號傳導(dǎo)過程，已有研究證明其活化與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［12］。研究顯示，在乳腺癌細(xì)胞中Syk可通過抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-k)抑制NF-κB活化。NF-κB可調(diào)節(jié)尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)的激活、分泌，而uPA的激活、分泌與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。還有研究顯示，NF-κB(p65)移位活化后可與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C啟動子上的特定區(qū)域結(jié)合而上調(diào)VEGF-C表達(dá)，而VEGF-C被認(rèn)為是目前最強(qiáng)的促淋巴管新生的因子，其過表達(dá)可導(dǎo)致淋巴管過度增生。本研究顯示，直腸癌組NF-κB陽性表達(dá)33例(66.0%)，而對照組表達(dá)均為陰性，組間比較有顯著差異;NF-κB與Syk表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，Syk表達(dá)缺失病例中可見到NF-κB高表達(dá)。提示NF-κB活化與直腸癌存在密切關(guān)系;Syk可能通過調(diào)節(jié)NF-κB表達(dá)而影響細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)及淋巴管生成，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。其具體機(jī)制尚需擴(kuò)大樣本進(jìn)行深入研究。

總之，Syk可能通過抑制NF-κB的活化抑制直腸癌發(fā)生及進(jìn)展，有望作為新靶點用于直腸癌的治療。

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