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        瑞舒伐他汀對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究▲

        2012-03-07 10:29:00黃維佳覃家錦郭建極
        微創(chuàng)醫(yī)學(xué) 2012年3期
        關(guān)鍵詞:藥組瑞舒伐平滑肌

        黃維佳 覃家錦 何 巍 戴 霞 馮 旭 郭建極 冼 磊

        (1廣西柳州市人民醫(yī)院心胸外科,柳州市 545001;2廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心胸外科,南寧市 530021)

        近年來(lái),他汀類(lèi)降脂藥物的“非調(diào)脂作用”引起了學(xué)者們的關(guān)注[1],其中他汀類(lèi)藥物拮抗及逆轉(zhuǎn)肺動(dòng)脈高壓的作用是目前研究的熱點(diǎn)。瑞舒伐他汀是新近合成的新一代羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑,其對(duì)于肺動(dòng)脈高壓的作用報(bào)道尚少,更未見(jiàn)到其對(duì)于左向右分流肺動(dòng)脈高壓影響的研究。本文通過(guò)左向右分流肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,觀察瑞舒伐他汀干預(yù)后模型大鼠肺組織中肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的變化及bcl-2蛋白表達(dá)的情況,初步探討瑞舒伐他汀對(duì)左向右分流肺動(dòng)脈高壓的影響及其可能機(jī)制,為今后臨床使用瑞舒伐他汀治療先心病繼發(fā)的肺動(dòng)脈高壓提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料 SD大鼠(廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),瑞舒伐他汀鈣片(英國(guó)阿斯利康制藥有限公司),多通道生理記錄儀(RM-6000,日本),雙目顯微鏡(Olympus,日本),電泳儀(Bio-Rad公司,美國(guó)),Q550CW計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)(Leica公司,德國(guó))。

        1.2 實(shí)驗(yàn)分組 隨機(jī)將36只SD大鼠分為3組(每組12只)。①分流給藥組:于分流手術(shù)第2天開(kāi)始予瑞舒伐他汀(10 mg/kg)灌胃,每天1次,連續(xù)給藥11周;②分流組:于分流手術(shù)第二天開(kāi)始予等體積0.9%生理鹽水灌胃,每天1次,連續(xù)給藥11周;③對(duì)照組:常規(guī)開(kāi)腹但不做分流,手術(shù)后第二天開(kāi)始予等體積0.9%生理鹽水灌胃,每天1次,連續(xù)給藥11周。

        1.3 建模方法 對(duì)大鼠行腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉(40 mg/kg)進(jìn)行麻醉,手術(shù)切口選取腹部正中切口,鈍性游離后腹膜,暴露腹主動(dòng)脈及下腔靜脈,在腹主動(dòng)脈的左腎動(dòng)脈開(kāi)口下方及髂總動(dòng)脈上方,分別用小動(dòng)脈夾夾閉,于腹主動(dòng)脈左側(cè)壁用尖刀片挑開(kāi)1 mm切口,用20 G套管針以45度角穿透腹主動(dòng)脈壁進(jìn)入鄰近的下腔靜脈內(nèi),原則上不能刺破下腔靜脈對(duì)側(cè)管壁,反復(fù)穿刺后拔出針頭,用7-0滑線縫合腹主動(dòng)脈壁的切口,移走小動(dòng)脈夾,此時(shí)可觀察到大鼠下腔靜脈變粗,出現(xiàn)微弱搏動(dòng),或顏色由暗變紅,均提示分流已形成。

        1.4 平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)及右心室肥厚指數(shù)(RVI)測(cè)定

        經(jīng)腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉麻醉,游離右頸外靜脈,將聚乙烯導(dǎo)管經(jīng)右頸外靜脈插入大鼠肺動(dòng)脈,導(dǎo)管另一端接壓力換能器及多通道生理記錄儀,記錄mPAP。于大鼠心臟大血管根部切斷,取出心臟后分離右室游離壁(RV)、室間隔(S)及左室壁(LV)并分別稱(chēng)重,通過(guò)公式RVI=[RV/(LV+ S)]計(jì)算右心室肥厚指數(shù)。

        1.5 HE染色 4%多聚甲醛固定大鼠肺組織,常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色。應(yīng)用Olympus雙目顯微鏡觀察,每只大鼠隨機(jī)選取一張切片,每張切片中隨機(jī)選擇肺小動(dòng)脈15條,通過(guò)Q550CW計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行血管形態(tài)計(jì)量,測(cè)量平均血管總面積(TA)、血管腔面積(IA)、管壁厚度(WT)、血管外徑(ED),通過(guò)公式WT%=(2×WT/ED)× 100%及WA%=(TA-IA)/TA×100%計(jì)算出管壁厚度占外徑的百分比(WT%)、管壁面積占血管總面積的百分比(WA%),以反映肺血管重構(gòu)的程度。

        1.6 大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 采用細(xì)胞凋亡原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)對(duì)切片進(jìn)行染色,按凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。計(jì)算隨機(jī)10個(gè)高倍視野(×400)中凋亡陽(yáng)性肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞數(shù)與其平滑肌細(xì)胞總數(shù)的比值(凋亡指數(shù)apoptotic index),求其平均值。

        1.7 大鼠肺組織中bcl-2蛋白的Western blot檢測(cè) 100 mg大鼠肺組織提取總蛋白,考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白定量,蛋白樣品與上樣緩沖液混合后于100℃下煮沸5 min。將樣品放在10%的SDS-聚丙烯凝膠中進(jìn)行電泳,后轉(zhuǎn)印至PVDF膜上。用5%脫脂牛奶封閉1 h后,分別加入 bcl-2抗體(1∶800)及β-actin抗體(1∶10 000),并常溫下過(guò)夜。洗膜3次后加入二抗并作用1 h,按ECL說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行顯色,將膠片圖像輸入Q550CW計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)強(qiáng)度測(cè)定,以目的蛋白與β-actin的IOD值之比表示目的蛋白表達(dá)的相對(duì)水平。

        1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以mean士SD表示,兩組間比較采用成組t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,以P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 大鼠平均肺動(dòng)脈壓力及右心室肥厚指數(shù)的變化 分流給藥組大鼠平均肺動(dòng)脈壓要明顯低于分流組,分別為(22.8±3.7)mmHg、(31.2±5.5)mmHg;同時(shí),分流給藥組大鼠右心室肥厚指數(shù)也明顯低于分流組,分別為(38.5±6.4)%、(49.2±6.8)%。上述兩組間指標(biāo)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

        2.2 HE染色顯示肺小動(dòng)脈形態(tài)的變化 經(jīng)過(guò)11周的干預(yù),分流組、分流給藥組大鼠肺小動(dòng)脈管壁厚度占血管外徑百分比(WT%)分別為(35.3±4.1)%、(20.7±3.2)%,肺小動(dòng)脈管壁面積占血管總面積百分比(WA%)分別為(51.2±3.3)%、(31.6±3.9)%,分流給藥組大鼠肺小動(dòng)脈壁增厚、血管壁平滑肌細(xì)胞肥大增生、管壁面積增加、管腔狹窄等情況較分流組輕,肺血管重構(gòu)有明顯改善,上述兩組間指標(biāo)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 各組大鼠mPAP、RVI、WT%及WA%的變化

        2.3 大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的變化 光鏡下(×400)觀察TUNEL染色切片,凋亡的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞核被染成棕黃色。見(jiàn)圖1。對(duì)照組、分流給藥組、分流組大鼠肺組織中TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞百分比(AI)分別是17.21±1.23、9.98±1.36、5.38±1.09,其中分流給藥組大鼠AI值要大于分流組,表明分流給藥組大鼠肺動(dòng)脈平滑肌凋亡的細(xì)胞較分流組多,各組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        2.4 大鼠肺組織中bcl-2蛋白表達(dá) 對(duì)照組、分流給藥組、分流組大鼠肺組織中 bcl-2蛋白的表達(dá)水平依次是1.19±0.12、1.52±0.47、2.27±0.56。可以看出,經(jīng)過(guò)瑞舒伐他汀干預(yù)能降低bcl-2蛋白的表達(dá)水平,各組間的變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

        圖1 各組大鼠光鏡下TUNEL染色切片

        3 討論

        先天性心臟病繼發(fā)的肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,目前尚未完全明確,如果不進(jìn)行積極干預(yù),絕大多數(shù)病例將發(fā)展為艾森曼格綜合征,最終導(dǎo)致右心衰竭而死亡。目前可選擇的治療方法不多,如吸氧、抗凝劑、血管擴(kuò)張劑等治療效果有限,病程晚期只能考慮肺移植或心肺聯(lián)合移植。近年來(lái),新型血管擴(kuò)張劑如血管緊張素受體拮抗劑纈沙坦、磷酸二酯酶5(PDE5)和抑制劑西地那非以及內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦相繼問(wèn)世,給肺動(dòng)脈高壓的藥物治療帶來(lái)希望[2]。但國(guó)外隨機(jī)前瞻性研究發(fā)現(xiàn),這些藥物雖然可以不同程度降低肺動(dòng)脈壓力、緩解患者癥狀,但不能明顯改善肺動(dòng)脈高壓病人的生存率,不能逆轉(zhuǎn)病變的進(jìn)程,而且存在明顯副作用,使患者對(duì)這些藥物的依從性較差,因此迫切需要尋找新的替代藥物。

        他汀類(lèi)藥物屬于 3-羥基、3-甲基戊二酰輔酶 A (HMG-CoA)還原酶抑制劑,目前臨床上廣泛應(yīng)用于降低膽固醇的治療。最近大量的研究發(fā)現(xiàn),他汀類(lèi)藥物除了抗脂質(zhì)生成作用外,還有許多非調(diào)脂藥理作用,當(dāng)中預(yù)防和逆轉(zhuǎn)肺動(dòng)脈高壓是目前學(xué)者們的研究熱點(diǎn)。研究表明,他汀類(lèi)藥物能有效治療肺動(dòng)脈高壓,可能與其誘導(dǎo)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞或血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、抑制靶細(xì)胞增殖有關(guān)。Knapp等[3]研究發(fā)現(xiàn),脂溶性他汀藥物可誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞凋亡,這種效應(yīng)能被HMG-CoA還原產(chǎn)物羥甲戊酸所阻斷。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)他汀類(lèi)藥物通過(guò)促進(jìn)凋亡相關(guān)蛋白R(shí)ac1 GG化,增強(qiáng)Rac1的表達(dá),能明顯促進(jìn)肺靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[4]。Toshihikl等[5]研究發(fā)現(xiàn),與非脂溶性他汀類(lèi)藥物不同,脂溶性他汀類(lèi)藥物可以下調(diào)bcl-2基因表達(dá),使Rho激酶異戊化,從而參與血管平滑肌細(xì)胞凋亡。此外,研究發(fā)現(xiàn)抑制rho-激酶、CDK4和CDK2激酶活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞周期也可能是他汀類(lèi)藥物抗增殖和促凋亡的機(jī)制[6,7]。

        瑞舒伐他汀是羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑家族中的新成員,屬于氨基嘧啶衍生物,分子結(jié)構(gòu)為單一對(duì)映異構(gòu)羥酸鈣鹽,二羥基庚烯酸是分子中的共性藥效基團(tuán)。另外,瑞舒伐他汀結(jié)構(gòu)中的甲基磺酰胺基團(tuán)使整個(gè)分子具備低親脂性[8],極易被肝細(xì)胞攝取,避免被肝細(xì)胞中細(xì)胞色素P450酶大量降解[9],以上藥理特點(diǎn)使瑞舒伐他汀比同類(lèi)藥物更具有優(yōu)勢(shì),比如對(duì)HMG-CoA還原酶更強(qiáng)大的抑制作用,更長(zhǎng)的藥物半衰期,更好的肝選擇性,更少的藥物交叉反應(yīng),患者有更好的藥物耐受性。目前由于瑞舒伐他汀剛上市不久,其對(duì)于肺動(dòng)脈高壓相關(guān)影響的報(bào)道少見(jiàn),更未見(jiàn)到他對(duì)于肺高血流性肺動(dòng)脈高壓相關(guān)作用的研究,也不清楚在肺高血流性肺動(dòng)脈高壓中瑞舒伐他汀的作用是否與相關(guān)靶細(xì)胞凋亡有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn),分流給藥組mPAP、WT%、WA%、RVHI值明顯低于分流組,說(shuō)明經(jīng)過(guò)瑞舒伐他汀干預(yù),肺高血流模型大鼠肺動(dòng)脈壓力和肺血管重構(gòu)能得到有效緩解,大鼠右室?guī)缀螛?gòu)型的改變也得到抑制。同時(shí),分流給藥組 bcl-2蛋白的表達(dá)明顯低于分流組,TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞百分比(AI值)明顯高于分流組,凋亡的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞數(shù)量明顯上升,說(shuō)明瑞舒伐他汀緩解肺血管重構(gòu)可能是通過(guò)某些信號(hào)途徑抑制了凋亡抑制基因的表達(dá),從而促進(jìn)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡。結(jié)合以往的研究結(jié)論,我們推測(cè):瑞舒伐他汀可能通過(guò)相關(guān)細(xì)胞信號(hào)途徑下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白如bcl-2的表達(dá),促進(jìn)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡,從而參與拮抗肺高血流性肺血管重構(gòu)的過(guò)程。

        總之,瑞舒伐他汀促進(jìn)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡是其拮抗肺高血流性肺血管重構(gòu)的重要機(jī)制之一。本文初步探討了瑞舒伐他汀治療肺動(dòng)脈高壓的可能機(jī)理,但其復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和調(diào)控機(jī)制需要基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡明,以及該藥物是否能真正用于臨床也需要大量臨床實(shí)驗(yàn)的深入開(kāi)展。

        圖2 各組大鼠bcl-2蛋白水平的變化

        [1] 邢西遷,甘 燁,吳尚潔.他汀類(lèi)藥物治療肺動(dòng)脈高壓作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].國(guó)際呼吸雜志,2007,27(10):794-797.

        [2] Rubin LJ.Diagnosis and management of pulmonary arterial hypertension:ACCP evidence-based clinical practice guidelines[J].Chest,2004,126(1):7-10.

        [3] Knapp AC,Huang J,Starling G,et al.Inhibitors of HMG-CoA reductase sensitize human smooth muscle cells to Fas-ligand and cytokineinduced cell death[J].Atherosclerosis,2000,152(1):217-227.

        [4] Shigeru K,Kumi S,Seiichiro K,et al.All hydrophobic HMG-coareductase inhibitors induce apoptotic death in rat pulmonary vein endothelial cells[J].Atherosclerosis,2003,70(2):237-243.

        [5] Toshihikl N,Laszlo TV.Simvastatin rescues rats from fatal pulmonary hypertension by inducing apoptosis of neointimal smooth muscle cells[J].Circulation,2003,108:1640-1645.

        [6] Danesh FR,Sadeghi MM,Amro N,et al.3-Hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase inhibitors prevent high glucose-induced proliferation of mesangial cells via modulation of Rho GTPase/P21 signaling pathway[J].Pro Nat Acad Sci USA,2002,99(12):8301-8305.

        [7] Laufs U,Liao JK.Direct vascular effects of HMG-CoA reductase inhibitors[J].Trends Cardiovasc Med,2000,10(4):143-148.

        [8] Gotto AM Jr,Grundy SM.Lowering LDL cholesterol:questions from recent meta-analyses and subset analyses of clinical trial data:issues from the interdisciplinary council on reducing the risk for coronary heart disease[J].Circulation,1999,99(8):E1-E7.

        [9] Mc Taggart F,Buckett L,Davidson R,et al.Preclinical and clinical pharmacology of rosuvastatin,a new 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme a reductase inhibitor[J].Am J Cardiol,2001,87(5A):28B-32B.

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