徐雄利，田 力，林永麗，劉玉明，巴劍波

聚維酮碘泡騰片為1-乙烯-2-吡咯烷酮與碘的絡(luò)合物制成的一種速溶型制劑，80%～90%結(jié)合碘可解聚成游離碘，抗菌譜廣，殺菌力強，對多種革蘭陽性菌、革蘭陰性菌等有較強的抑殺作用。在制劑的微生物限度檢查中，常規(guī)的方法［1］因不能完全排除供試液的抑菌作用，使所加入的陽性控制菌受到抑制而不能生長。根據(jù)其抑菌作用的強弱對供試品選擇適宜的處理方法制備供試液是必要的［2］，本試驗采用0.1 mol/L硫代硫酸鈉中和法和淀粉吸附法排除其抑菌作用，收到了較好的效果。

1 材料與方法

1.1 實驗菌種

金黃色葡萄球菌(CMCC 26003)、銅綠假單胞菌(CMCC 10104)均購自中國普通微生物保藏中心。

1.2 培養(yǎng)基和試劑

膽鹽乳糖增菌液 、營養(yǎng)肉湯增菌液、甘露醇高鹽瓊脂、十六烷三甲基溴化胺瓊脂培養(yǎng)基，均由中國醫(yī)藥(集團)上海化學(xué)試劑公司提供;聚維酮碘泡騰片(自制);pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.1 mol/L硫代硫酸鈉，均按藥典要求配制;市售食用淀粉(經(jīng)105℃，4 h干熱滅菌)。

1.3 方法

1.3.1 菌液制備 取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的新鮮斜面培養(yǎng)物，接種到5 ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，(35±1)℃培養(yǎng)20 h后，以10倍稀釋成50～100 cfu/ml的菌液備用。

1.3.2 供試液制備 取含聚維酮碘1.0 g的泡騰片1片，溶于100 ml pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中備用。

1.3.3 硫代硫酸鈉中和法［3］參照碘含量測定的方法，每100 ml供試液中加入過量的0.1 mol/L硫代硫酸鈉7.5 ml，攪拌均勻至溶液呈無色。2瓶營養(yǎng)肉湯(100 ml/瓶)及2瓶膽鹽乳糖增菌液(100 ml/瓶)中分別加入經(jīng)中和后的供試液10 ml，其中1瓶營養(yǎng)肉湯中加入50～100 cfu金黃色葡萄球菌，1瓶膽鹽乳糖增菌液中加入50～100 cfu銅綠假單胞菌為控制菌陽性對照組;另外2瓶不加菌作為供試品檢驗組。取上述2組增菌液置(35±1)℃培養(yǎng)24～48 h后，分別在十六烷三甲基溴化胺和甘露醇高鹽瓊脂平板上劃線分離銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。

1.3.4 淀粉吸附法［4］取供試液100 ml，加入經(jīng)干熱滅菌的淀粉40 g，輕輕攪拌均勻，以1500 r/min(離心半徑為6.3 cm)離心3 min，分別取10 ml上清液均勻加入到2瓶膽鹽乳糖增菌液(100 ml/瓶)及2瓶營養(yǎng)肉湯增菌液(100 ml/瓶)中，其中1瓶膽鹽乳糖增菌液及營養(yǎng)肉湯增菌液中分別加入50～100 cfu銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌，作為控制菌陽性對照組。另外2瓶不加菌作為供試品檢驗組。取上述2組增菌液置(35±1)℃培養(yǎng)24～48 h后，分別在十六烷三甲基溴化胺和甘露醇高鹽瓊脂平板上劃線分離銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。

1.3.5 方法可行性驗證試驗［1］分別按上述2種操作方法除去供試液的抑菌活性后，取供試液10 ml及50～100 cfu試驗菌分別加入2組增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查。其中一組加入100 cfu金黃色葡萄球菌，另外一組加入100 cfu銅綠假單胞菌，檢查2種方法金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞的檢出情況;同時不加控制菌做按上述方法空白對照組。

2 結(jié)果

2.1 控制菌檢查結(jié)果

試驗結(jié)果表明，硫代硫酸鈉中和法和淀粉吸附法均能有效祛除聚維酮碘泡騰片供試液的抑菌作用，陽性對照組均能檢出相應(yīng)的控制菌。見表1。

2.2 方法可行性驗證試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，經(jīng)硫代硫酸鈉中和法及淀粉吸附法處理的供試液，試驗組控制菌檢出結(jié)果為陽性，空白對照組無菌生長。見表2。

表1 2種方法檢驗控制菌的結(jié)果

表2 2種方法可行性驗證試驗結(jié)果

3 討論

微生物污染監(jiān)控是藥品質(zhì)量和安全性的重要指標(biāo)［5］。當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時，應(yīng)進(jìn)行控制菌檢查方法的驗證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的控制菌檢查。

聚維酮碘抗菌譜廣，殺菌力強，是臨床上廣泛使用的消毒劑。對其進(jìn)行控制菌檢查時，必須先祛除聚維酮碘供試液的抑菌活性，才能建立有效的控制菌檢查方法。本試驗硫代硫酸鈉中和法是根據(jù)碘含量測定中每毫升0.1 mol/L硫代硫酸鈉滴定液消耗12.69 mg碘的原理。當(dāng)供試液與硫代硫酸鈉作用由紅棕色變無色時，供試液中的抑菌成分有效碘被完全中和。淀粉吸附法是根據(jù)碘與淀粉能夠形成藍(lán)色絡(luò)合物，當(dāng)供試液與淀粉作用由紅棕色變?yōu)樗{(lán)色時，進(jìn)行低速離心，使不溶性物質(zhì)沉降于管底，取上清液作檢查。方法可行性驗證實驗結(jié)果顯示，在供試液中加入100 cfu陽性菌，供試液經(jīng)上述2種方法作用后均能夠檢出陽性控制菌;2種方法均可排除供試品中的抑菌成分對控制菌的抑殺作用，說明2種方法均可行。其中淀粉吸附法，淀粉吸附碘的能力較強，但產(chǎn)生的不溶性沉淀物體積較大，吸取上清液時需小心操作。硫代硫酸鈉中和法中，加入硫代硫酸鈉不僅可以完全排除抑菌成分，而且操作更簡便易行。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京:醫(yī)藥科技出版社，2010:107-116.

［2］吳曉敏，王燕燕.8種醫(yī)院制劑微生物限度檢查方法驗證［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(1):97-99.

［3］饒耀剛，朱玲，阿有梅，等.聚維酮碘泡騰片殺菌效果測定［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2003，38(2):264-266.

［4］王立華，楊誼，馬靖，等.含碘藥物控制菌檢查方法的探討［J］.中國藥事，2000，14(5):310-311.

［5］曹曉云，郭艷娟.藥品微生物限度檢查方法學(xué)驗證試驗及相關(guān)的技術(shù)問題［J］.天津藥學(xué)，2006，18(6):49-51.

(本文編輯:彭潤松)