馬文龍 趙海峰 陜西中醫(yī)學院2009級研究生（咸陽 712046）

四物湯最早出自唐代林藺道人《仙授理傷續(xù)斷秘方》［1］，此后四物湯載于《太平惠民和劑局方》，由當歸、熟地黃、芍藥、川芎組成，為補血、活血、調(diào)經(jīng)之良方。芍藥苷是白芍藥材水溶性提取物中的主要單體活性成分，具有擴張血管、抗血栓形成、抗血小板聚集和逆轉(zhuǎn)低血壓等作用，其在心血管疾病方面有良好的療效［2，3］。本實驗采用HPLC測定四物湯不同煎煮條件下芍藥苷的含量，研究不同煎煮條件下芍藥苷的溶出率，進而研究四物湯的最佳煎煮條件，為臨床科學煎煮中藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

高高效液相色譜儀：DIONEX（戴安）P680HPLC PUMP、UV D170U紫外檢測器、CHROMELEON（變色龍）軟件（美國戴安分析儀器有限公司）；芍藥苷對照品（110736－200933）。甲醇、乙腈為色譜純，液相用水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 四物湯中芍藥苷測定方法的建立

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取芍藥苷5.05mg，置25mL量瓶中，加50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.202mg／mL的對照品溶液，即得。

2.1.2 白芍原藥材供試液制備：精密稱取白芍中粉0.1068g，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超聲處理（功率240W，頻率45kHz）30分鐘，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，0.45um微孔濾膜過濾，即得［4］，測得白芍中每g藥材含芍藥苷12.1325mg。

2.1.3 樣品及溶液的制備：按處方量熟地、當歸、白芍、川芎各12、9、9、6g，精密稱取5份，各加8倍量水300ml，煎煮，濾液過濾，置250mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取煎液4 mL，精密加入甲醇6mL，放置2h，超聲處理20min，取出，放冷，用60%甲醇補足重量，離心，取上清液，0.45um微孔濾膜過濾，備用。

2.2 四物湯中芍藥苷含量測定方法的建立

2.2.1 測定方法確定 高效液相色譜法測定四物湯中芍藥苷含量，色譜條件：Kromasil C18色譜柱5μm 150mm×4.6mm.（天津特納科學儀器有限公司），流動相：乙腈：0.1%磷酸溶液（18：82），測定波長230納米，流速：1ml／min，進樣量10ul。

2.2.2 方法學考察

線性關(guān)系的考察：精密吸取對照品溶液1、3、5、10、20μl，按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，進樣量（mg）為橫坐標，從標準曲線圖可見芍藥苷進樣量在0.202～4.040ug之間峰面積與進樣量呈良好線性關(guān)系，計算得回歸方程：Y＝16961X－0.285（R2＝0.9999）。

精密度試驗：取供試品溶液連續(xù)進樣6次，每次10μL，測定芍藥苷峰面積積分值，RSD為0.16%，表明具有良好的精密度。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24h進樣測定 ，供試液中芍藥苷的RSD為0.70%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率測定：分別精密吸取已知濃度供試品溶液5份各5ml，分別精密加入含芍藥苷的對照品溶液分別為1ml，然后定容至10ml，測得平均回收率99.40及RSD1.13%。

2.3 不同煎煮條件下芍藥苷溶出率考察

2.3.1 不同煎煮時間芍藥苷溶出量考察 分別稱取處方量四物湯5份，按2.1.3項下方法各煎煮20／30／40／50／60分鐘，制樣，測定結(jié)果為表1

表1 不同煎煮時間四物湯中芍藥苷溶出率

2.3.2 煎煮次數(shù)的考察 稱取處方量四物湯，按2.1.3項下60min煎煮一次，制樣，藥渣加水200ml，煎煮30min，水開記時，過濾，濾液合并，并定溶于250ml量瓶，制樣，測得結(jié)果為

表2 不同煎煮次數(shù)四物湯中芍藥苷溶出率

2.3.3 是否浸泡考察 稱取處方量四物湯，浸泡30min，按2.3.2項下，制樣，測定結(jié)果為

表3 煎煮前是否浸泡四物湯中芍藥苷溶出率

3 討 論 3.1 從以上檢測結(jié)果看，四物湯中芍藥苷的溶出率隨著煎煮時間的延長而增高，煎煮兩次時，第二次煎煮的溶出為第一次的50%左右，第二次煎煮對溶出率有很大的提高，煎煮前浸泡對芍藥苷溶出率能有5%左右的提高。

3.2 從實驗中可看出隨時間的延長，芍藥苷溶出率增長逐漸變慢，但煎出的煎液變得比較濃稠，浸膏含量增加較大。

3.3 根據(jù)芍藥苷和浸膏煎出情況來看，四物湯應該煎煮2次，第一次在30－60分鐘，第二次可煎30min為好。

［1］彭懷人.中醫(yī)方劑大詞典［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：413.

［2］居一春，李 祥.桃紅四物湯化學成分研究進展［N］.醫(yī)藥導報，2008；27（5）：576－577.

［3］吳春福.芍藥及其化學成分的藥理研究概況［J］.中藥通報 ，1985，10（6）：43－46.

［4］國家藥典委員會.中國藥典，第一部.［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：89.