任躍明

（國(guó)家藥典委員會(huì)，北京100061）

國(guó)內(nèi)外生物技術(shù)類制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)差異淺析

任躍明

（國(guó)家藥典委員會(huì)，北京100061）

隨著我國(guó)對(duì)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高工作的日益重視，生物技術(shù)類制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)日臻完善，與國(guó)外先進(jìn)水平的差距正在逐步縮小。本文分析比較了現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》與《歐洲藥典》中生物技術(shù)類制品標(biāo)準(zhǔn)的主要差異，探討了我國(guó)生物技術(shù)類制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展方向。

生物技術(shù)類制品；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；藥典

生物技術(shù)制品一般是應(yīng)用基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程等生物技術(shù)獲得微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料，制備用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷的藥物。狹義的定義是指以重組DNA技術(shù)獲得的生物技術(shù)類制品，即通過(guò)基因改造而成，將目的基因通過(guò)質(zhì)粒或病毒載體導(dǎo)入適宜的微生物或細(xì)胞系，從而使DNA表達(dá)并翻譯成相應(yīng)蛋白，再通過(guò)提取和純化獲得目的基因產(chǎn)物[1]。

生物技術(shù)類制品包括細(xì)胞因子、重組蛋白質(zhì)藥物、抗體、疫苗和寡核苷酸藥物等，主要用于防治腫瘤、心血管疾病、傳染病、哮喘、糖尿病、遺傳病、心腦血管病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疑難病癥，在臨床上已經(jīng)開始廣泛應(yīng)用，為制藥工業(yè)帶來(lái)了革命性的變化。生物技術(shù)類制品由于是人類天然存在的蛋白質(zhì)或多肽，量微而活性強(qiáng)，用量極少就會(huì)產(chǎn)生顯著的效應(yīng)，相對(duì)來(lái)說(shuō)副作用較小、毒性較低、安全性較高。

自1986年實(shí)施“863”計(jì)劃以來(lái)，生物技術(shù)類制品的研究、開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化獲得了飛速發(fā)展?！皣?guó)家藥品安全‘十二五’規(guī)劃”提出了“大幅提高藥品標(biāo)準(zhǔn)和藥品質(zhì)量，進(jìn)一步完善藥品監(jiān)管體系，進(jìn)一步規(guī)范藥品研制、生產(chǎn)、流通秩序和使用行為，使藥品安全保障能力整體接近國(guó)際先進(jìn)水平，藥品安全水平和人民群眾用藥安全滿意度顯著提升”[2]的總體目標(biāo)。為完成此項(xiàng)任務(wù)，尚需要付出相當(dāng)大的努力，任務(wù)艱巨。盡管我國(guó)有部分品種的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)已明顯縮小了與歐美藥典的差距，有些甚至已經(jīng)優(yōu)于國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，但在療效和安全性密切相關(guān)的相關(guān)物質(zhì)分析、雜質(zhì)控制、分子結(jié)構(gòu)確認(rèn)、生物學(xué)活性檢測(cè)方法、制藥工藝及制劑技術(shù)等諸多方面，與國(guó)際先進(jìn)水平尚有差距。

1 中外藥典標(biāo)準(zhǔn)的解讀

《中國(guó)藥典》是國(guó)家藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控的技術(shù)法典?！稓W洲藥典》由歐洲共同體藥物評(píng)審委員會(huì)（EMEA）負(fù)責(zé)組織編制，是目前國(guó)際上具有悠久歷史和權(quán)威性的一部藥典。

《歐洲藥典》7.0版收載了重組人粒細(xì)胞刺激因子（rhG-CSF，非格司亭）、重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子（GM-CSF，莫拉司亭）、促紅細(xì)胞生成素（EPO）、胰島素、促生長(zhǎng)激素、阿替普酶、干擾素 β1α（IFNβ1α）、干擾素 α2（IFNα2）、干擾素 γ1b（IFNγ1b）和鏈激酶（SK）等生物技術(shù)類制品[1]?！吨袊?guó)藥典》（2010年版）三部收載的生物技術(shù)類制品包括：EPO、IFN α1b、IFN α2a、IFN α2b、IFN γ、白細(xì)胞介素-2、G-CSF、GM-CSF、牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（BFGF）、人表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、SK 等[3]；生長(zhǎng)激素，胰島素、阿替普酶等品種由《中國(guó)藥典（2010年版）二部》收載[4]。

《歐洲藥典》與《中國(guó)藥典》的編制體例有所不同。針對(duì)生物技術(shù)類制品，《歐洲藥典》制定了“重組技術(shù)制品總論”，闡述了生物技術(shù)類制品的定義、特性，并對(duì)生產(chǎn)工藝、過(guò)程控制提出了明確要求，是建立品種標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)和技術(shù)依托。在品種各論中，對(duì)產(chǎn)品的原液或原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定了具體要求。《中國(guó)藥典》則在“凡例”和“通則”中，對(duì)各類產(chǎn)品的共性技術(shù)要求進(jìn)行統(tǒng)一規(guī)定，在產(chǎn)品各論中，分別從原液、中間品到成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢定進(jìn)行了具體規(guī)定。結(jié)合我國(guó)生物技術(shù)類制品現(xiàn)狀及研發(fā)趨勢(shì)，有必要參照《歐洲藥典》，制定“生物技術(shù)類制品總論”，并收載于 2015年版《中國(guó)藥典》。

2 生物技術(shù)類制品質(zhì)量控制的主要因素

就生物技術(shù)類制品的質(zhì)量控制而言，生物學(xué)活性測(cè)定、理化特性分析和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究建立是十分重要的因素。

2.1 生物學(xué)活性測(cè)定

目前，生物技術(shù)類制品的生物學(xué)活性測(cè)定基本采用細(xì)胞增殖法。比較兩部藥典，最主要的差別在于檢測(cè)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，例如：可信限的設(shè)置?！吨袊?guó)藥典》對(duì)此方面的規(guī)定尚不完善。生物檢定是以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，在一定條件下比較供試品和標(biāo)準(zhǔn)品所產(chǎn)生的特定反應(yīng)，通過(guò)等反應(yīng)劑量間比例的運(yùn)算或限制劑量引起的生物反應(yīng)程度，從而測(cè)定供試品的效價(jià)、生物活性或雜質(zhì)引起的毒性[4]。由此可見(jiàn)，統(tǒng)計(jì)方法在生物學(xué)活性測(cè)定中的重要意義?！吨袊?guó)藥典》（2015年版）三部擬收錄“生物檢定統(tǒng)計(jì)法”，進(jìn)一步完善制品生物檢定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.2 理化特性分析

《歐洲藥典》對(duì)制品的理化特性分析得比較清晰明確，每個(gè)制品均標(biāo)注了蛋白質(zhì)一級(jí)序列、二硫鍵的具體位置以及化學(xué)結(jié)構(gòu)式。蛋白質(zhì)的理化特性分析一般包括含量測(cè)定、純度分析、鑒別分析等項(xiàng)目。

2.2.1 含量測(cè)定 《中國(guó)藥典》附錄中規(guī)定的總蛋白檢測(cè)的方法多采用Low ry法，以人或牛白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品。人或牛白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為非同質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，其氨基酸組成、化學(xué)結(jié)構(gòu)均與供試品不同，測(cè)量中引入了系統(tǒng)誤差，無(wú)法與同類進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行比對(duì)分析，不利于制品質(zhì)量與國(guó)際接軌?！稓W洲藥典》一般采用紫外分光光度法和高效液相色譜法（HPLC），并采用同質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行蛋白質(zhì)含量測(cè)定。

2.2.2 純度分析 純度分析即用限量標(biāo)準(zhǔn)控制制品中非藥效活性成分?！吨袊?guó)藥典》主要以十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳法、HPLC進(jìn)行控制。純度分析應(yīng)盡量依據(jù)蛋白質(zhì)不同的理化特性，選擇分析原理不同的檢測(cè)方法，二者相互補(bǔ)充。 G-CSF、GM-CSF、BFGF、EGF、SK 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用分別基于蛋白質(zhì)分子大小和疏水特性的SDS-PAGE電泳法、反相高效液相色譜法（RP-HPLC）進(jìn)行分析；其余質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均以SDS-PAGE電泳和分子篩這兩個(gè)基于一種分析原理的檢測(cè)方法對(duì)純度進(jìn)行控制?！吨袊?guó)藥典》對(duì)主藥蛋白的含量作出了限值要求。

《歐洲藥典》對(duì)于制品的純度分析較為詳細(xì)，針對(duì)不同的分子采用不同的分析方法和具體的判定標(biāo)準(zhǔn)。以IFNγ1b為例，純度分析包括了共價(jià)二聚體和低聚物、單體和多聚體、脫?；脱趸?、異質(zhì)二聚體、正亮氨酸及其他雜質(zhì)的限量要求；分別采用了分子排阻色譜法、離子交換色譜法、還原-非還原電泳法、高效液相氨基酸分析法。對(duì)于SDS-PAGE電泳等分辨率相對(duì)較低的方法，設(shè)立相應(yīng)控制帶以提高限量判定的準(zhǔn)確度?！稓W洲藥典》純度分析大致分為制品相關(guān)雜質(zhì)、工藝相關(guān)雜質(zhì)、相關(guān)物質(zhì)分析。

2.2.2.1 制品相關(guān)雜質(zhì) 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是在生產(chǎn)和/或貯存過(guò)程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。其分子量、生物學(xué)活性、有效性和安全性均不同于主藥蛋白[5]。

2.2.2.2 工藝相關(guān)雜質(zhì) 工藝相關(guān)雜質(zhì)是生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的，可能源自工程菌/工程細(xì)胞（殘余蛋白質(zhì)、殘余 DNA）、培養(yǎng)基（誘導(dǎo)劑、抗生素、培養(yǎng)基成分）或者下游工藝（試劑、層析過(guò)程產(chǎn)生的雜質(zhì)）[5]。同一制品的不同生產(chǎn)單位，由于其工藝、表達(dá)系統(tǒng)的差異，殘余宿主細(xì)胞的DNA、蛋白無(wú)論從結(jié)構(gòu)還是組成比例均會(huì)存在差異。因此，檢測(cè)方法在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇、抗原、抗體的制備方式均具有特異性。根據(jù)“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”理念，采用生產(chǎn)單位根據(jù)工藝自行制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和檢測(cè)用試劑對(duì)工藝相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行控制，更為真實(shí)客觀，對(duì)于工程控制也更有意義。

2.2.2.3 制品相關(guān)物質(zhì) 制品相關(guān)物質(zhì)是在生產(chǎn)或貯存過(guò)程中，產(chǎn)生的不同于主藥蛋白的分子，其具有的生物學(xué)活性，對(duì)于制品的安全性和有效性沒(méi)有影響。它們的特性與主藥蛋白相似，不被認(rèn)為是雜質(zhì)[5]。

2.2.3 鑒別分析 在理化鑒別方面，《中國(guó)藥典》與《歐洲藥典》的差距主要是在理化對(duì)照品方面?！吨袊?guó)藥典》收載的生物技術(shù)類制品標(biāo)準(zhǔn)尚未提供理化對(duì)照品。

以肽圖分析為例，肽圖分析是國(guó)內(nèi)外藥典用于評(píng)價(jià)產(chǎn)品一致性和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的技術(shù)手段?！稓W洲藥典》采用全面結(jié)構(gòu)鑒定和理化分析的對(duì)照品作為鑒別判定依據(jù)，在儀器分析總體要求的基礎(chǔ)上，《歐洲藥典》對(duì)色譜柱粒徑、長(zhǎng)度、柱溫，以及系統(tǒng)適用性中保留時(shí)間、分辨率等均有詳盡的描述，并采用非線性色譜梯度分離?！吨袊?guó)藥典（2010版）》也采用了酶切后 RP-HPLC的方式，但尚未提供完成全面結(jié)構(gòu)鑒定和理化分析的對(duì)照品，其次在方法要求細(xì)節(jié)與系統(tǒng)適用性方面也存在一定差距。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)品的建立

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究和建立是藥品質(zhì)量控制的重要組成部分?！稓W洲藥典》收錄藥品標(biāo)準(zhǔn)的鑒別、理化特性分析、生物學(xué)活性測(cè)定中，絕大多數(shù)檢驗(yàn)方法均有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為技術(shù)依托。然而，目前我國(guó)在相關(guān)生物技術(shù)類制品的質(zhì)量控制中，僅可以提供生物學(xué)活性標(biāo)準(zhǔn)品，但在理化分析、含量測(cè)定方面的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)還有待加強(qiáng)，在體制和機(jī)制上確保實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)和文本標(biāo)準(zhǔn)同步發(fā)展與實(shí)施，完善標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)國(guó)家數(shù)據(jù)庫(kù)。

3 藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)比較

僅以 EPO、G-CSF原液（原料藥）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為例，對(duì)照分析中外藥典中相關(guān)檢定項(xiàng)目的技術(shù)要求?！稓W洲藥典》收載的生物技術(shù)類制品原液按原料藥管理，有批準(zhǔn)文號(hào)。而在我國(guó)，原液是禁止在市場(chǎng)流通的。詳見(jiàn)表1、2。

表1 EPO原液（原料藥）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比

表2 G-CSF原液（原料藥）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比

續(xù)表2

4 總結(jié)

《中國(guó)藥典（2010版》三部）是目前國(guó)際上收錄生物技術(shù)類制品標(biāo)準(zhǔn)最多的藥典，但多為劑型不同的同一活性成分，與國(guó)外藥典相比，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)細(xì)節(jié)方面還需要進(jìn)一步完善。藥品質(zhì)量與公眾切身利益緊密相關(guān)，直接關(guān)系到人民群眾的健康和社會(huì)的和諧穩(wěn)定。藥品標(biāo)準(zhǔn)是藥品質(zhì)量控制的重要手段與法定依據(jù)。藥品標(biāo)準(zhǔn)的制定涉及較多的技術(shù)領(lǐng)域和管理部門，需要堅(jiān)持系統(tǒng)考慮、整體規(guī)劃、分類要求、分步實(shí)施、有序推進(jìn)、均衡發(fā)展的工作方法，采取一系列行之有效的措施，在結(jié)合國(guó)情的前提下，盡可能與國(guó)際藥品標(biāo)準(zhǔn)接軌，進(jìn)一步全面提升藥品標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性、有效性與實(shí)用性。

[1]The European pharmacopoeia commission.European Pharmacopoeia7.0[M].Aubin：European Directorate for Quality Medicines，2010：696.

[2]國(guó)務(wù)院.國(guó)務(wù)院關(guān)于印發(fā)國(guó)家藥品安全“十二五”規(guī)劃的通知[S].國(guó)發(fā)〔2012〕5 號(hào)，2012-01-20.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)人民共和國(guó)藥典（2010年版）三部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)人民共和國(guó)藥典（2010年版）二部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社：附錄130.

[5]ICH.ICH Harmonised Tripartite Guideline—Specifications:Test Procedures And Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products Q6B [EB/OL]. [2012-04-10].http://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guidelines/Quality/Q6B/Step4/Q6B_Guideline.pdf.

Discussion on the Official Standards of Biotechnological Products in Chinese and European Pharmacopeias

Ren Yuem ing （Chinese Pharmacopoeia Commission， Beijing 100061，China）

With the increasing attention paid to the improvement of drug quality standards in China，the quality standards of biotechnological products have been enhanced and the gap between the official standards at home and abroad is being narrowed.The paper briefly described the main differences between the quality requirements of biotechnological products in the current Chinese and European Pharmacopeias，and the directional development of the improvement of drug quality standards was explored.

Biotechnological Products；Quality Standards；Pharmacopeia

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.09.012

任躍明，女，碩士，副主任藥師。研究方向：生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定。E-mail：gx3201066@yahoo.com.cn

2012-05-02）