陳 宇 (第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院骨科，上海 200003)

血漿白細胞介素1β基因多態(tài)性與原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性

陳 宇 (第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院骨科，上海 200003)

目的 探討血漿中白介素(IL)-1β基因啟動子－511C/T位點多態(tài)性在原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎(PKOA)患者中的分布情況及位點各基因型與PKOA的相關(guān)性。方法 納入102例正常對照者和82例PKOA患者，根據(jù)PKOA的嚴(yán)重程度，將病例組分為輕度組、中度組及重度組。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，檢測并記錄所有受試者IL-1β的血漿濃度，統(tǒng)計所有受試者血漿中IL-1β基因啟動子－551C/T位點的基因型。結(jié)果 對照組與病例組血漿IL-1β濃度為(7.48±1.67)、(23.53±8.96)ng/L，兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);PKOA輕度組、中度組、重度組的血漿IL-1β濃度依次為(16.36±7.05)、(24.07±8.16)、(30.19±8.42)ng/L，三者兩兩比較后，其差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義。對照組和病例組基因型TT的分布頻率為49例(48.04%)、59例(71.95%)，CT的分布頻率為50例(49.02%)、13例(15.85%)，CC的分布頻率為3例(2.94%)、10例(12.20%)，分別進行比較后，對照組和病例組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在 IL-1β( －551 C/T)為 CC、CT、TT基因型時，血漿 IL-1β 濃度分別為(46.297±50.492)、(68.717±51.917)、(80.788±40.322)ng/L，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 隨著疾病的進展，PKOA患者血漿IL-1β濃度也依次增加;IL-1β基因－551C/T的單核苷酸多態(tài)性基因型TT可能為PKOA的易感基因型之一。PKOA患者基因型與血漿IL-1β濃度相關(guān)，TT基因型患者血漿中IL-1β濃度最高，CT次之，CC最低。

原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎;白介素1β;基因多態(tài)性

原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎(PKOA)的致病機制仍不清楚，細胞因子被公認(rèn)為在PKOA的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，其中，致炎因子白介素1β(IL-1β)處于核心地位〔1〕。一些學(xué)者曾對 PKOA患者的膝關(guān)節(jié)滑膜組織細胞和軟骨細胞進行體外培養(yǎng)，檢出較高水平的IL-1β〔2〕。目前，血漿IL-1β 基因 －551C/T的單核苷酸多態(tài)性(SNP)與PKOA之間相關(guān)性的研究少有報道，故探討IL-1β基因－551T/C的SNP與PKOA的相關(guān)性具有創(chuàng)新意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 正常對照組102例，其中男42例，女60例，平均年齡59.07歲;病例組82例，其中男35例，女47例，平均年齡61.10歲。病例組患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會(ARHP)1995年修訂的膝骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)我國第二軍醫(yī)大學(xué)1999年制定的膝骨關(guān)節(jié)炎臨床綜合“指數(shù)”分級法〔3〕將病例組患者分為輕度組28例，中度組26例及重度組28例。

1.2 方法 取所有受試者靜脈血2 ml，加入乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)抗凝管內(nèi)，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測IL-1β的血漿濃度。同時采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，以外周血白細胞基因組DNA為模板進行PCR擴增，并檢測所有受試者IL-1β基因啟動子－551C/T位點的基因型。運用瓊脂糖電泳技術(shù)檢測并回收PCR產(chǎn)物。將PCR產(chǎn)物進行限制性內(nèi)切酶AvaⅠ(NEB)酶切，對酶切產(chǎn)物再次進行瓊脂糖電泳。通過凝膠成像系統(tǒng)對電泳結(jié)果進行觀察:IL-1βPCR產(chǎn)物片段總長度為313 bp，用AvaⅠ酶切PCR產(chǎn)物片段，若得到98 bp和215 bp兩個條帶，則該基因型為C，若僅獲得313 bp條帶則為 T。如為 TT型，為313 bp條帶一條;如為CT型，為98 bp、215 bp和313 bp條帶各一條;如為CC型，則為98 bp和215 bp兩條條帶。見圖1。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料結(jié)果用±s表示，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用t檢驗和方差分析，非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗，計數(shù)資料結(jié)果用頻數(shù)和率描述，組間比較采用χ2檢驗，危險因素分析采用非條件Logistic回歸法，多個樣本率之間的比較采用χ2分割法。

圖1 IL-1β(－551 C/T)基因型分析

2 結(jié)果

對照組與病例組血漿IL-1β濃度為(7.48±1.67)ng/L，(23.53±8.96)ng/L，兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);PKOA輕度組、中度組、重度組的血漿 IL-1β濃度依次為(16.36±7.05)ng/L、(24.07 ±8.16)ng/L、(30.19 ±8.42)ng/L，三者兩兩比較后，其差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

對照組和病例組基因型TT的分布頻率為49例(48.04%)、59例(71.95%)，CT的分布頻率為 50例(49.02%)、13例(15.85%)，CC的分布頻率為3例(2.94%)、10例(12.20%)，分別進行比較后，對照組和病例組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

IL-1β( －551 C/T)為 CC、CT、TT 基因型時，血漿 IL-1β 水平分別為(46.297±50.492)ng/L，(68.717±51.917)ng/L，(80.788±40.322)ng/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎的主要病理改變是軟骨的破壞，造成軟骨破壞最主要的生物因子是IL-1。唐萬兵等〔4〕檢測了89例健康體檢者和43例早、中、晚期PKOA患者關(guān)節(jié)液中的IL-1β水平，結(jié)果表明PKOA患者早、中、晚期關(guān)節(jié)液中IL-1β水平顯著高于正常對照組。本次研究結(jié)果也表明，隨著疾病的進展，PKOA患者血漿IL-1β濃度也依次增加。

血漿IL-1β的濃度受IL-1β基因的轉(zhuǎn)錄及蛋白表達的影響。一些研究證實，IL-1β基因－551C/T的SNP能夠調(diào)節(jié)IL-1β基因的轉(zhuǎn)錄及蛋白表達，使體內(nèi)IL-1β水平發(fā)生改變，從而增加骨關(guān)節(jié)退行性變的易感性。Ye等〔5〕研究顯示，等位基因T、C基因型分別與腰椎間盤疾病有關(guān)。Meulenbelt等〔6〕發(fā)現(xiàn)大多數(shù)髖關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎患者的IL-1β(－551C/T)的基因型為TT或TC。本次研究同樣發(fā)現(xiàn)，在PKOA患者中，大多數(shù)患者基因型為TT，故 TT可能為 PKOA的易感基因型之一。此外，在PKOA患者中，－551C/T基因型與血漿IL-1β濃度相關(guān)，基因型為TT的患者血漿中IL-1β濃度最高，CT次之，CC最低。隨著疾病的進展，PKOA患者血漿IL-1β濃度也依次增加。

1 Blom AB，van der Kraan PM，van den BergWB.Cytokine targeting in osteoarthritis〔J〕.Curr Drug Targets，2007;8(2):283-92.

2 Pelletier JP，McCollum R，Cloutier JM，etal.Synthesis ofmetalloproteases and interleukin 6(IL-6)in human osteoarthritic synovialmembrane is an IL-1 mediated process〔J〕.JRheumatol Suppl，1995;43:109-14.

3 Haishan W，Xiaohua L.The clinicaland radiogicalassessmentof knee osteoarthritis〔J〕.Med JChin PLA，1999;24(6):466-7.

4 唐萬兵，唐從耀，陳 平，等.膝關(guān)節(jié)炎患者血清和關(guān)節(jié)液中IL-1水平的變化研究〔J〕.實用醫(yī)技雜志，2008;15(21):2785-6.

5 YeW，Ma R，Sa PQ，etal.Association of single nucleotide polymorphisms of IL-1β with lumbar disc disease〔J〕.Yi Chuan，2007;29(8):923-8.

6 Meulenbelt I，Seymour AB，Nieuwland M，et al.Association of the interleukin-1 gene cluster with radiographic signs of osteoarthritis of the hip〔J〕.Arthritis Rheum，2004;50(4):1179-86.

R684.3

A

1005-9202(2012)16-3425-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.031

陳 宇(1983-)，男，碩士，醫(yī)師，主要從事骨外科疾病的臨床診治工作。

〔2012-01-14收稿 2012-01-24修回〕

(編輯 袁左鳴)