林重輝 鄭文玲 楊 軍 邱文冰 黎永勝

（汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，廣東 汕頭 515000）

烏司他?。║linastatin）是一種存在于人尿中的胰蛋白酶抑制劑。現(xiàn)越來越廣泛地運用于臨床，大量的研究表明提示烏司他丁具有腦保護作用，同時新近的研究也表明大劑量的烏司他丁對機體組織能起到更好的保護作用。故我們通過以下實驗探索不同劑量烏司他丁對大鼠缺血性腦水腫腦組織的治療作用。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

選擇Wistar大鼠45只，性別不限，體質(zhì)量200～250g，將實驗動物隨機分為3組：對照組、治療1組、治療2組、每組15只。

1.2 試劑和藥物

烏司他丁，由廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司提供AQP4試劑盒，由武漢博士德生物工程有限公司提供

1.2 方法

1.2.1 實驗方法

參照Longa等的方法[1]，對照組、治療1組、治療2組均采用線栓法建立大腦中動脈阻塞（ MCA0）模型，手術方法從略。

1.2.2 分組及給藥法

烏司他丁治療組大鼠分別于術后即刻、術后8h、16h腹腔注射烏司他丁1次，劑量分別為治療1組1.0萬U/kg，治療2組4.0萬U/kg；對照組在相同時間點給予等量生理鹽水腹腔注射，三組均于術后24h處死。

1.2.3 指標觀察及方法

1.2.3.1 腦組織水孔蛋白-4（AQP4）免疫組化檢測

分別取各組實驗動物缺血腦組織后外部分作冠狀位冰凍切片（15um），采用S-P法，選用一抗（AQP4抗體），并根據(jù)試劑盒上的步驟進行操作，免疫組化AQP-4陽性細胞胞膜呈棕黃色。

1.3 統(tǒng)計學分析

在400倍光鏡下各時相點各取免疫組化切片5片，在同一光強度下隨機選擇不重疊的5個視野，細胞膜呈棕色為AQP-4免疫組化陽性，統(tǒng)計AQP-4表達陽性細胞數(shù)。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 AQP4表達水平變化

AQP4主要在細胞膜中表達。治療1組與對照組比較，24h后AQP4表達水平減輕（P＜0.05），治療2組與對照組相比，24h后AQP4表達水平減輕較明顯（P＜0.01）。

表1

3 討 論

缺血性腦血管病率是嚴重危害人類健康的主要疾病之一，其急性期病理變化主要表現(xiàn)為腦水腫，其嚴重程度和持續(xù)時間的長短對腦缺血的預后有著直接的影響。所以，使用有效藥物減輕缺血性水腫成為腦缺血急性期治療的關鍵。研究顯示在缺血性腦水腫的過程中，水孔蛋白-4（AQP4）與腦水腫關系密切[2-4]，當使用相關藥物能使水孔蛋白的表達減低時，即能有效的減輕腦水腫的程度。烏司他丁是一種廣譜蛋白酶抑制劑具有抗炎性介質(zhì)作用和多臟器功能保護作用[5]。近年來一些研究實驗顯示烏司他丁具有良好的腦保護作用[6,7]，同時新近的臨床多學科研究也表明烏司他丁的治療效用與用藥劑量呈正比關系，即較大劑量的烏司他丁能起到更好的作用[8,9]，因不同劑量的烏司他丁在腦保護中起到的不同作用的研究及有關烏司他丁對缺血性腦水腫腦組織水孔蛋白-4（AQP4）的影響的研究目前仍未見報道。故我們通過建立腦缺血動物模型后，使用不同劑量的烏司他丁后，對腦組織進行實驗室重要免疫組化指標水孔蛋白-4（AQP4）分析檢測，探討烏司他丁在預防及治療缺血性腦水腫方面的療效。

我們實驗顯示：與對照組比較，使用烏司他丁的治療1組能使缺血腦組織的水孔蛋白-4（AQP4）表達下降（P＜0.05），且隨著使用烏司他丁劑量的增加，即：治療2組可使血腦組織的水孔蛋白-4（AQP4）表達相對對照組明顯減少（P＜0.01）。我們的實驗結(jié)果提示：烏司他丁能通過下調(diào)水孔蛋白的表達起到保護腦組織的作用，并且在大劑量的作用下能起到更好的效果。故我們認為在常規(guī)治療腦梗塞的基礎上，使用烏司他丁可以對腦梗塞后的腦水腫起到有效的輔助治療作用，從而有利病情的好轉(zhuǎn)和康復。但臨床運用的有效性還待進一步臨床實驗證實。

[1]Longa EZ,Weinstein PR,Carison S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[2]Taniguchi M,Yamashita T,Kumura E, et al.Induction of aquaporin-4 water channel mRNA after focal cerebral ischemia in rat[J].Brain Res Mol Brain Res,2000,78(1/2):131-137.

[3]Kiening KL,van Landeghem FK,Schreiber S,et al.Stover JF.Decreased hemispheric Aquaporin-4 is linked to evolving brain edema following controlled cortical impact injury in rats[J].Neurosci Lett,2002,324(2):105-108.

[4]Manley GT,Fujimura M,Ma T,et al.Aquaporin-4 deletion in mice reduces brain edema after acute water intoxication and ischemic stroke[J].Nat Med,2000,6(2):159-163.

[5]邵明義,張良清,鄧烈華,等.烏司他丁對全身炎癥反應綜合征的治療作用[J].中國危重病急救醫(yī)學,2005,17(4):228-230.

[6]章國軍,杜杭根,殷利春,等.烏司他丁在重型顱腦損傷應用中血漿內(nèi)皮素水平的變化[J].浙江中醫(yī)學院學報,2004,38(2):68-70.

[7]張華芳,唐勇,姜保芹,等.烏司他丁對鼠缺血性腦水腫的防治作用[J].濰坊醫(yī)學院學報,2003,25(1):29-31.

[8]孫傳玉,邵偉,畢嚴賓.不同劑量烏司他丁的心肌保護作用觀察[J].山東醫(yī)藥,2005,49(45):71-72.

[9]蔡業(yè)平,付春來,張圣岸,等.大劑量烏司他丁治療重癥肺炎的療效觀察[J].醫(yī)學臨床研究,2007,24(8):1370-1371.