王 萍 肖 筠 魏紅璐

重慶市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(400062)

·技術(shù)與方法·

微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法在新生兒溶血病診斷中的比較研究

王 萍 肖 筠 魏紅璐

重慶市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(400062)

目的:探討微柱凝膠技術(shù)對新生兒溶血病(HDN)的診斷價值。方法:選取128例疑似HDN的新生兒，分別用微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT)、間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)和放散試驗(yàn)并對比結(jié)果。結(jié)果:在128例中104例診斷為HDN患兒，微柱凝膠法的陽性檢出率為92.31%，傳統(tǒng)試管法為80.77%，微柱凝膠法的敏感性高于傳統(tǒng)試管法(χ2=5.92，P＜0.05);在微柱凝膠法3項(xiàng)試驗(yàn)中，以放散試驗(yàn)的陽性率最高，DAT陽性率最低。結(jié)論:對于輔助診斷HDN，微柱凝膠法比傳統(tǒng)試管法更具優(yōu)勢。

微柱凝膠法 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 間接抗人球蛋白試點(diǎn) 放散試驗(yàn)

新生兒溶血病(HDN)是紅細(xì)胞破壞性貧血的一種，檢測新生兒血清中是否含有紅細(xì)胞抗體意義重要。傳統(tǒng)檢測方法是進(jìn)行試管抗人球蛋白試驗(yàn)(TCT)，但操作比較復(fù)雜，結(jié)果容易有偏差。據(jù)報道，微柱凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)(MGCT)更有優(yōu)勢［1］。本科室從2009年5月 ～2011年8月，采用MGCT對128例疑似為HDN新生兒進(jìn)行檢測，并與TCT進(jìn)行對比，探討MGCT的臨床價值。

1 資料和方法

1.1 一般資料

新生兒128例均為足月產(chǎn)，年齡4.7±2.5d，其中男性74例，女性54例。均行TCT和MGCT檢測紅細(xì)胞抗體。

1.2 檢測方法

1.2.1 TCT 直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT):用生理鹽水洗滌新生兒紅細(xì)胞3次，配成5%紅細(xì)胞鹽水懸液。取上述懸液1滴，移至另外一支試管，再加入1滴抗人球蛋白血清，搖勻，離心1min，觀察結(jié)果，以凝集者為陽性。間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT):在3支試管中分別加入2滴新生兒血清，再分別加入5%A、B、O型紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，致敏后若發(fā)生凝集，則存在相應(yīng)抗體。不致敏則用鹽水洗滌3次，加入抗IgG的抗人球蛋白血清1滴，離心，觀察結(jié)果，以凝集者為陽性。放散試驗(yàn):用洗滌3次的新生兒紅細(xì)胞與2份抗A和抗B分型血清充分混合，離心去除上清液，再洗滌3～4次，加入1/2容積的生理鹽水，置56℃水浴中使抗體充分放散。再次離心后取放散液用2%A型和B型試劑紅細(xì)胞鑒定抗體。

1.2.2 MGCT DAT:取新生兒3次洗滌后配制的3% ～5%的紅細(xì)胞懸濁液10μl，加入到1孔的抗IgG卡上，再用MGCT專用水平離心機(jī)離心10min，觀察結(jié)果。IAT:在8孔抗IgG卡的前3孔分別加入40μl新生兒血清，再依次加入3% ～5%的 A、B、O試劑紅細(xì)胞懸液。放散試驗(yàn):和TCT相同，先配置出放散液，在8孔抗IgG卡的后3孔分別加入放散液40μl，再依次加入3% ～5%的 A、B、O試劑紅細(xì)胞懸液，用MGCT專用水平離心機(jī)離心5min，然后觀察結(jié)果。

1.2.3 HDN診斷標(biāo)準(zhǔn)臨床診斷:母嬰血型配伍不合;曾有死胎或有分娩原因不明的黃疸、貧血、水腫兒史;新生兒有不同程度的黃疸、貧血、肝脾腫大，出生后2d內(nèi)有黃疸，2～4d達(dá)高峰，血清膽紅素＞205μmol/L。實(shí)驗(yàn)室診斷:新生兒 DAT、IAT、放散試驗(yàn)3項(xiàng)中至少有1項(xiàng)陽性。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 MGCT與TCT敏感度比較

128例疑似HDN新生兒，最后經(jīng)臨床綜合分析確診 104例。在 104例中，MGCT陽性率為92.31%，TCT陽性率為80.77%，MGCT的敏感度高于 TCT(χ2=5.92，P＜0.05)。

2.2 MGCT中3種方法陽性率比較

在MGCT 3種方法中，DAT、IAT、放散試驗(yàn)陽性率分別為 24.22%，53.91%，59.38%。IAT、放散試驗(yàn)陽性率均高于 DAT(χ2=23.70，P＜ 0.05;χ2=32.52，P＜0.05)。

3 討論

在紅細(xì)胞表面已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有多種不同的抗原系統(tǒng)，其中有不少都能夠引發(fā)HDN，其中最常見的是ABO系統(tǒng)和Rh系統(tǒng)。母嬰ABO血型不合主要發(fā)生在血型為O型的母親［2］，因?yàn)镺型比A型和B型具有更高效價的抗A或抗B IgG抗體。臨床上常用DAT、IAT和放散試驗(yàn)對HDN進(jìn)行檢測。DAT陽性則表明紅細(xì)胞已經(jīng)受到不完全抗體致敏，IAT是檢測血清中抗體是否存在及其類型，而放散試驗(yàn)則是判定紅細(xì)胞上抗原的型別。傳統(tǒng)的TCT操作比較復(fù)雜，步驟較多，其結(jié)果容易受到操作過程中不良因素和人為主觀因素的影響，造成檢驗(yàn)結(jié)果偏差，不利于臨床參考和診斷。MGCT是一種新型血清檢驗(yàn)方法，其優(yōu)越性得到越來越多臨床工作者的認(rèn)可［3］。在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)的抗體相互結(jié)合，利用篩狀凝膠介質(zhì)的阻擋，經(jīng)過離心后，凝集的紅細(xì)胞因?yàn)轶w積較大，難以通過分子篩，便會懸浮在凝膠上層，而凝膠的底部則是體積小的未結(jié)合紅細(xì)胞。另外，抗人球蛋白和血型抗體事先已經(jīng)加入到凝膠中，不需要像TCT一樣另外加入，簡化了操作步驟，減少人為干擾和誤差，而且對結(jié)果的評估更為直觀，能夠形成統(tǒng)一的評定標(biāo)準(zhǔn)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，MGCT靈敏度高于TCT。據(jù)文獻(xiàn)報道，雖然MGCT靈敏度高，但是由于新生兒自身干擾比較小，假陽性率非常低。在本文24例非HDN新生兒中，MGCT有2例檢測為假陽性，可能與某些原因使新生兒的紅細(xì)胞致敏有關(guān)［4］。而TCT有4例假陽性，除了新生兒自身干擾外，操作步驟繁多，操作人員的技術(shù)水平也是造成假陽性的重要原因。TCT的一個重要操作步驟就是用鹽水洗滌紅細(xì)胞的次數(shù)較多，很可能會使結(jié)合較弱的抗原抗體分離，因而降低其敏感度。而MGCT則免除了紅細(xì)胞洗滌，避免了對結(jié)合抗原抗體的破壞，同時還能夠減少因紅細(xì)胞被殘余鹽水稀釋所產(chǎn)生的假陰性，提高敏感度［5］。為避免MGCT假陽性所致的錯誤判斷，一定要根據(jù)臨床癥狀等綜合判斷。

從本次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到，MGCT較傳統(tǒng)TCT能夠更快、更準(zhǔn)確地輔助診斷HDN，值得臨床應(yīng)用。

1 Dittmar K，Procter J，Cipolone K，et a1.Comparison of DATs using traditional tube agglutination to gel column and afinity column procedures［J］.Transfusion，2001，41(10):1258 －1262.

2 李雪，高宏敏.微柱凝膠法在新生兒溶血病診斷中的應(yīng)用［J］.臨床醫(yī)學(xué)，2011，31(1):93 －94.

3 彭心華，肖婕，胡鵬.微柱凝膠檢測技術(shù)在新生兒溶血病的應(yīng)用［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2010，31(35):6464 －6465.

4 劉晗，李彤彤，李浩瀧.傳統(tǒng)試管法與微柱凝膠技術(shù)檢測新生兒溶血病的比較［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2008，10(3):266 －267.

5 鄭艷玲，周小在.微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用［J］.臨床醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)，2008，5(17):1027 －1028.

Application of microcolumn gel technology in diagnosing hemolytic disease of the newborn

Wang Ping，Xiao Jun，Wei Honglu
Departmen of Clinical Laboratory，The Fifth People＇s Hospital of Chongqing，Chongqing400062

Objective:To explore the value of the microcolumn gel technology in diagnosing hemolytic disease of the newborn.Methods:The direct antiglobulin test(DAT)，indirect antiglobulin test(IAT)and elution test were conducted with the microcolumn gel technology and the traditional method in 128 newborns suspected hemolytic disease of the newborn.Results:In 104 newborns with clinical diagnosis of hemolytic disease of the newborn，the positive rates of the microcolumn gel technology and the traditional method were 92.31%and 80.77%(χ2=5.92，P＜0.05).As for three methods with the microcolumn gel technology，the positive rate of the elution test was the highest and that of DAT was the lowest.Conclusion:A microcolumn gel technology is better for assistant diagnosis of hemolytic disease of the newborn when compared with the traditional method.

Microcolumn gel technology;Direct antiglobulin test;Indirect antiglobulin test;Elution test

10.3969/j.issn.1004 －8189.2012.08

2012－03－13

2012－05－07

［責(zé)任編輯:張 璐］