張書國

（貴州省遵義縣蝦子鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務中心，遵義 563125）

人工授精已成為養(yǎng)牛業(yè)的現(xiàn)代化繁殖技術(shù)，對提高養(yǎng)牛業(yè)的遺傳繁殖速度和生產(chǎn)效率起到了重大推進作用?？商岣邇?yōu)良公牛的配種效率，擴大母牛配種頭數(shù)，加速母牛育種工作進程和繁殖改良速度，減少種公牛飼養(yǎng)頭數(shù)，減低飼養(yǎng)管理費用，有利于擴大公牛配種地區(qū)范圍和提高母牛配種受胎率，筆者在實踐操作過程中采用以下措施，熟練掌握發(fā)情鑒定、飼養(yǎng)管理、適時輸精、輸配操作技術(shù)等，結(jié)合實際情況，現(xiàn)將牛冷凍精液人工授精技術(shù)要點總結(jié)如下，僅供參考。

1 牛冷凍精液輸精站建設

1.1 人工授精操作室

1.1.1 精液處理室 面積可為8～10 m2，要求屋頂、墻壁、地面平整。室內(nèi)放置有液氮罐貯存冷凍精液，并進行冷凍精液的解凍及精液品質(zhì)檢查。

1.1.2 直檢、輸精室 面積為30～40 m2。室內(nèi)安置有1～2個6柱欄，用于對母牛直腸檢查進行發(fā)情鑒定、妊娠診斷和不孕癥的防治，同時亦用于母牛輸精。要求室內(nèi)光線充足，地面平整，便于清除糞便。

1.2 母牛系留場（棚）

根據(jù)配種范圍內(nèi)的適繁母牛數(shù)來確定一定面積的場地，用于栓系來站檢查和配種的母牛。一般距種公牛栓系場應保持20 m以上距離，或用墻壁圈舍隔開。

2 器械和藥物的準備

2.1 藥液的配制

75%酒精及75%酒精棉球；1／3 000新潔爾滅溶液，生理鹽水棉球。

2.2 解凍液配制

2.2.1 2.9%檸檬酸鈉溶液。

2.2.2 葡-檸溶液：葡萄糖3.0 g、檸檬酸鈉1.4 g、蒸餾水加至100 m1。

2.2.3 復方蔗-檸溶液：蔗糖1.15 g、檸檬酸鈉1.7 g、磷酸二氫鉀0.325 g、碳酸氫鈉0.09 g、氨苯磺胺0.3 g、蒸餾水加至100 m1。

2.3 器械

30 L液氮貯存罐1個；3 L液氮貯存罐1個；30 L液氮運輸罐1個；生物顯微鏡及顯微鏡保溫箱；恒溫水浴箱；各式牛用輸精器；手提式高壓滅菌器。

2.4 器械的洗滌

人工授精用的器械在每次使用以后，均需用洗滌劑洗刷干凈，特別是注射器、輸精器內(nèi)的殘留精液均應徹底洗滌干凈，并需保持潔凈、干燥，存放于清潔的櫥柜內(nèi)。

2.5 器械消毒和沖洗

2.5.1 玻璃棒、金屬鑷子、搪瓷方盤需用75%酒精棉球消毒。

2.5.2 解凍用小試管、解凍液、注射器、生理鹽水棉球、毛巾、紗布需用高壓蒸汽消毒。要求消毒溫度達到115℃維持30 min。

2.5.3 顆粒及安瓿型冷凍精液輸精器需經(jīng)高壓蒸汽消毒。當連續(xù)為數(shù)頭母牛輸精時，每輸精1頭母牛后，輸精器可用75%酒精棉球由前向后擦拭消毒，待干燥后，再用生理鹽水棉球擦拭后，可再用于另一頭母牛輸精。

2.5.4 細管型冷凍精液輸精器的前段接頭需以高壓蒸汽消毒，接桿部分可以75%酒精棉球消毒，待干燥后再用生理鹽水棉球擦拭，每次用于輸精，只需更換輸精器接頭即可。

2.5.5 凡是接觸精液的器械如解凍小試管、顆粒及安瓿型冷凍精液輸精器，貯存精液容器等均需經(jīng)徹底消毒，并再經(jīng)滅菌的解凍液沖洗2次，以保持精子的適宜環(huán)境。

3 精液品質(zhì)檢查

3.1 精子活率評定

3.1.1 顆粒型冷凍精液應先取2.9%檸檬酸鈉溶液1～1.5 m1，加溫到38±2℃，投入顆粒冷凍精液一粒，輕輕搖蕩，當溶化尚余1/2～1/3時，脫離加溫使其在外界溫度下溶化，用壓片法立即在150～600倍顯微鏡下檢查。

3.1.2 檢查精子活率用的顯微鏡載物臺應保持35℃～38℃溫度。

3.1.3 在顯微鏡視野下，呈直線前進運動的精子數(shù)占全部精子數(shù)的百分率來評定精子活率。100%的精子呈直線前進運動者評為1.0；90%的精子呈直線前進運動者評為0.9，以此類推。

3.2 精子活率標準

每頭份冷凍精液的直線前進運動精子數(shù)必須達到以下標準：細管型1 000萬個以上／支；顆粒型1 200萬個以上／粒；安瓿型1 500萬個以上／安瓿。

3.3 精子頂體完整率評定

采用姬姆薩染色法作顯微鏡觀察或用干攏相差顯微鏡觀察。每個樣品應觀察精子總數(shù)500個。解凍后精子頂體完整率不得低于40%。

4 冷凍精液的包袋、標記和運輸。

4.1 冷凍精液的包裝

細管型冷凍精液應封閉嚴密；顆粒型冷凍精液必須以無菌容器包裝；安瓿型冷凍精液應封閉嚴密，耐受冷凍。

4.2 冷凍精液的標記

4.2.1 細管、安瓿的外壁和顆粒冷凍精液容器上應標記或栓系有標記牌。注明站名、公牛號、精液制凍日期、批號以及該批冷凍精液的精子活率。

4.2.2 不同品種公牛的冷凍精液可用不同顏色包裝加以區(qū)別。

4.3 冷凍精液運輸

4.3.1 移動液氮貯存罐時，應提握罐柄、輕拿輕放、防止沖撞。

4.3.2 液氮貯存罐及液氮運輸罐裝車運輸時，應在罐底加防震軟墊。罐體應加外套裝入木箱，牢固地加以栓系，防止傾倒。

4.3.3 運輸冷凍精液應有專人押送，辦理好交接手續(xù)卡片。途中應隨時注意檢查并及時補充冷源。

5 冷凍精液貯存

5.1 液氯貯存

在液氮貯存罐內(nèi)貯存的冷凍精液，必須切實地浸沒于液氮中。

5.2 提筒貯存

取放貯存冷凍精液的提筒，只允許上提到液氮罐的罐頸段之下，嚴禁提出罐外，在罐內(nèi)脫離液氮的時間不得超過10s。

5.3 轉(zhuǎn)移

在向另一液氮貯存罐內(nèi)轉(zhuǎn)移冷凍精液時，精液提筒不得脫離液氮5s。

5.4 取放冷凍精液

取放冷凍精液之后，應及時蓋上罐塞，以減少液氮消耗及防止異物落人罐內(nèi)。

5.5 預防精液混雜

嚴防不同畜種、品種、個體公畜的冷凍精液混雜，難以辨識。

5.6 定期清理洗刷

對長期用作貯存冷凍精液的液氮罐應定期清理和洗刷。

6 冷凍精液的解凍

6.1 細管、安瓿型冷凍精液

可用38士2℃溫水直接浸泡解凍。

6.2 顆粒型冷凍精液

應逐粒分別用38±2℃的1～1.5 ml的解凍液解凍。不得將2粒以上的顆粒冷凍精液投入到一份解凍液中解凍。

6.3 解凍

解凍后的精液溫度不得超過外界環(huán)境溫度，一般應控制在10℃以下。

6.4 使用

細管型冷凍精液應在1 h內(nèi)用于輸精；安瓿、顆粒型冷凍精液應在2 h內(nèi)用于輸精。

6.5 運輸

解凍后精液需作運輸時，應置于4℃～5℃溫度下不得超過3 h。

7 輸精

7.1 健康檢查

母牛需經(jīng)發(fā)情鑒定及健康檢查后才能給予輸精。

7.2 輸精準備

母牛在輸精前，外陰部應經(jīng)清洗，以1／3 000新潔爾滅溶液或酒精棉球擦拭消毒，待干燥后，再用生理鹽水棉球擦拭。

7.3 劑量

發(fā)情母牛每次輸入1頭份解凍后冷凍精液。

7.4 精子質(zhì)量要求

輸精用精子活率應達0.3以上，輸入的直線前進運動精子數(shù)，細管型冷凍精液為1 000萬個以上；顆粒型冷凍精液為1 200萬個以上；安瓿型冷凍精液為1 500個以上。

7.5 精子輸入方法

采用直腸把握輸精法將精液注入到子宮頸內(nèi)口或子宮體部位。

7.6 記錄

輸精母牛須作好記錄。各項記錄必須按時，準確，并定期進行統(tǒng)計分析。