鄒淑君，李妍，孫躍臣，許樹(shù)軍，郭迎喜，李彥冰

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2．大慶市衛(wèi)生局，黑龍江 大慶 163311)

萬(wàn)壽菊(Tagetes erecta L)，俗稱金菊、黃菊、金雞菊、臭芙蓉、金盞花，菊科萬(wàn)壽菊屬，一年生草本植物［1］。其花入藥，具有清熱解毒、化痰止咳的功效，曾用作鎮(zhèn)靜、抑菌、解痙劑。用于治療腮腺炎、氣管炎、乳腺炎、百日咳、高血壓、眼結(jié)膜炎、產(chǎn)后子宮脫出、癰、瘡、疔、癤等癥［2］。本品為民間草藥，始載于《植物名實(shí)圖考》。民間用其治療慢性支氣管炎，效果很好?！端幉琛贰ⅰ吨腥A百草良方》等資料都記載本品有化痰鎮(zhèn)咳的功效，其水煎液經(jīng)聚酰胺柱分離后，其中90%乙醇洗脫部位鎮(zhèn)咳效果顯著［3］。本文在此基礎(chǔ)上繼續(xù)應(yīng)用現(xiàn)代中藥藥理實(shí)驗(yàn)研究方法對(duì)其祛痰作用進(jìn)行研究，篩選萬(wàn)壽菊花祛痰的有效部位，以期為萬(wàn)壽菊在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 藥物與試劑

萬(wàn)壽菊花(來(lái)源于黑龍江省哈爾濱市，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)李彥冰教授鑒定為Tagetes erecta L);氯化銨(沈陽(yáng)市惠中理化用品廠，批號(hào)20080706，使用時(shí)配成0．1g/ml);生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號(hào)111108D2);苯酚紅(天津傲然精細(xì)化工研究所，批號(hào)20050228);其它試劑均為分析純。

1．2 動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠，雌、雄各半，體質(zhì)量18～22g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1．3 儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);電子天平(METTLER AE240瑞士);UV－1601PC紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)。

2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果

2．1 萬(wàn)壽菊提取物的聚酰胺柱分離

稱取干燥萬(wàn)壽菊花藥材2 000g，加10倍蒸餾水浸泡2h，煎煮3次，每次1．5h，過(guò)濾;殘?jiān)盟芙?，不?/p>

基金項(xiàng)目:黑龍江省中醫(yī)藥管理局科研項(xiàng)目(ZHY10－Z06)

作者簡(jiǎn)介:鄒淑君(1974－)，女，副教授，主要從事藥物合成與分離研究。

通訊作者:李彥冰(1955－)，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥新藥研究工作。

收稿日期:2012－06－11

修回日期:2012－07－12

部分用90%乙醇溶解，拌適量硅藻土，混合均勻，水浴蒸干，均勻?yàn)⒃诰埘０分戏?，分別以水、30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇和無(wú)水乙醇洗脫，得水部位345.5g，30% 乙醇部位 26．3g，50% 乙醇部位 14．0g，75%乙醇部位7．3g，無(wú)水乙醇部位0．878 0g。將得到的各部位加水溶解，配制成每毫升相當(dāng)于2g生藥量的溶液備用。

2．2 萬(wàn)壽菊祛痰有效部位的篩選

取成年健康小鼠，隨機(jī)分組，每組10只。分為陰性對(duì)照組(蒸餾水)、陽(yáng)性對(duì)照組(氯化銨0．1g/ml)，水洗脫組、30%醇洗脫組、50%醇洗脫組、75%醇洗脫組、無(wú)水乙醇洗脫組，分別按順序灌胃給藥，給藥容量為10ml/kg，連續(xù)灌胃7天，末次給藥前14h禁食不禁水。末次給藥30min后，每只小鼠腹腔注射5%酚紅溶液0．5ml，30min后處死，仰位固定，解剖分離出自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入離心試管中，用5%碳酸氫鈉溶液2ml浸泡，并不斷振搖10min。于高速離心機(jī)上以3 000r/min的轉(zhuǎn)速離心分離10min，取上清液于紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)吸光度值(A)，通過(guò)酚紅濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品溶液酚紅含量(μg/ml)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 萬(wàn)壽菊花各洗脫部位對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響(±s)

表1 萬(wàn)壽菊花各洗脫部位對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響(±s)

各洗脫部位對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響結(jié)果用SPSS18．0統(tǒng)計(jì)軟件作單因素方差分析，兩兩比較用LSD法。結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

組別 n 劑量(g/kg)酚紅排泌量(μg/ml)空白 10 —3．042 ±0．174氯化銨 10 1．0 4．572 ±1．094水洗 10 20(相當(dāng)于生藥量) 3．672 ±0．423 30%醇洗液 10 20(相當(dāng)于生藥量) 4．039 ±0．681 50%醇洗液 10 20(相當(dāng)于生藥量) 4．950 ±1．812 75%醇洗液 10 20(相當(dāng)于生藥量) 3．278 ±0．857無(wú)水乙醇洗液 10 20(相當(dāng)于生藥量)2．958 ±0．790

表2 萬(wàn)壽菊花各洗脫部位對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的方差分析結(jié)果

表3 萬(wàn)壽菊花各洗脫部位對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量?jī)蓛杀容^結(jié)果

2．3 結(jié)果

從表1和表2可知，萬(wàn)壽菊花各洗脫部位和氯化銨組對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量有顯著影響(P＜0．01)。從表3兩兩比較LSD檢驗(yàn)分析可知，50%乙醇洗脫部位組、氯化銨組與空白組比較均有顯著差異，50%乙醇部位組與氯化銨組比較無(wú)顯著差異。

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，50%乙醇洗脫部位組與氯化銨組對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量有顯著影響，且二者作用相當(dāng)，因此50%乙醇洗脫部位組為萬(wàn)壽菊花水提物的祛痰有效部位。

3 定性鑒別

對(duì)50%乙醇洗脫部位分別作試管試驗(yàn)和圓形濾紙層析試驗(yàn)，初步判斷50%乙醇洗脫部位含有黃酮類化合物、蒽醌及其苷類、酚類及鞣質(zhì);不含皂苷、香豆素類、生物堿類等。

4 討論

民間用萬(wàn)壽菊花治療慢性支氣管炎，效果很好。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，萬(wàn)壽菊花水提取物經(jīng)聚酰胺分離后，50%乙醇洗脫組能明顯增加小鼠腹腔注射酚紅后引起的小鼠氣管酚紅排泌量，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異，表明50%乙醇洗脫組是萬(wàn)壽菊花水提取物祛痰作用的有效部位［4］。通過(guò)做試劑鑒別反應(yīng)，提示其中可能含有黃酮類、蒽醌及其苷類、酚類及鞣質(zhì)，這為以后進(jìn)一步對(duì)萬(wàn)壽菊花祛痰作用的物質(zhì)研究奠定了基礎(chǔ)。

［1］《全國(guó)中草藥匯編》編寫組．全國(guó)中草藥匯編(下冊(cè))［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1986:22．

［2］崔玲．中華百草良方·上卷［M］．天津:天津古籍出版社，2007:40．

［3］鄒淑君，賈昌平，田寶成，等．萬(wàn)壽菊花鎮(zhèn)咳作用有效部位的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(1):40 －42．

［4］鄒淑君，賈昌平，田寶成，等．萬(wàn)壽菊花鎮(zhèn)咳作用有效部位的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2010，38(1):40 －42．