梅小寒

湖北省丹江口市第一醫(yī)院，湖北 丹江口 442700

為加強實驗室生物安全，防止實驗室交叉感染，本文試對HIV抗體初篩實驗室的生物安全的若干問題進行初步探討。

1 實驗室要求

實驗室主要配置：酶標(biāo)儀、洗板機、洗眼裝置，離心機生物安全柜。其中，生物安全柜應(yīng)放置在沒有氣流明顯流動的地方，避免生物安全柜在工作時受外界氣流影響正常的內(nèi)部層流。

2 實驗室生物安全管理

實驗室危害評估對新建成或已建HIV抗體檢測實驗室必須作一次實驗活動危害評估。評估內(nèi)容應(yīng)根據(jù)各實驗室現(xiàn)狀、條件、人員，以及具體實驗活動等諸多因素綜合考慮。

2.2 健全實驗室管理制度體系完善各類生物安全管理制度。應(yīng)包括樣本的處置與包藏管理、儀器的安全使用、消毒隔離措施、應(yīng)急事故處理、實驗廢棄物處理、人員健康定期醫(yī)學(xué)監(jiān)護制度、職業(yè)暴露處理等。

2.3 個人防護實驗室工作人員所采用的個人防護裝備均應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準的要求。使用前應(yīng)仔細檢查，不使用標(biāo)志不清或破損的防護用品。同時應(yīng)根據(jù)本實驗活動的特點，選擇適當(dāng)?shù)膫€人防護用品，并正確使用。一次性的用品不可反復(fù)使用。

3 樣本采集

3.1 HIV抗體檢測只要采集血液樣本。樣本采集的工作人員應(yīng)掌握相關(guān)專業(yè)知識和操作技能。能夠有效地防止病原微生物擴散和感染。

3.2 在樣本采集過程中工作人員必須清楚意識到待檢樣本的潛在感染性。操作時必須戴手套 (如果采集已知的HIV感染者或患者的樣本時，應(yīng)戴雙層手套)，提倡使用真空采血器，若使用普通的注射器，采血后不得使用手摘取針頭。不得給注射器重新“戴帽”，避免刺傷手。針筒內(nèi)的血要小心緩慢地沿管壁注入試管內(nèi)，防止血液外濺。

3.3 使用后的真空采血器或普通注射器及止血棉球都含有待檢樣本的血液。必須立即放入含有消毒液的容器內(nèi)，按有關(guān)要求消毒一定期限后，作為醫(yī)療廢棄物處理，或放置于生物廢棄袋中，在密封的情況下送去作高壓滅菌處理。

4 樣品轉(zhuǎn)移

實驗室間的遠程運輸需利用車、船、飛機等交通工具運輸?shù)臉颖?、?yīng)采用世界衛(wèi)生組織 (WHO)提出的三級包裝系統(tǒng)。

5 樣本接受、開啟

實驗室接受樣本應(yīng)在生物安全柜內(nèi)開啟包裝件，并檢查盛裝樣本的試管有無破損或滲出的情況。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將存留的樣本移出，對被污染的試管、試管架和盛器均需作嚴格消毒。

6 樣本分離

6.1 離心機分離血清樣本在離心前最好在實驗室自然放置1～2h。在離心時，最好使用帶有密封離心桶 (安全杯)或者密封轉(zhuǎn)頭的離心機分離血清。離心后，應(yīng)在生物安全柜里開啟試管。在生物安全柜內(nèi)分離血清，操作時盡量避免產(chǎn)生氣溶膠，工作人員的手臂動作幅度不能太大。以免影響安全柜內(nèi)的空氣層流，如果是無蓋的試管，應(yīng)在離心完畢后，靜止30min后，再開啟離心機蓋。如發(fā)生試管破損，要對離心機進行嚴格消毒。

6.2 血清分離器械的處理操作完畢后，所有的吸管、Tip吸頭、含血細胞的試管等廢棄物應(yīng)置于規(guī)定的已含適當(dāng)消毒液容器內(nèi)，小心移出生物安全柜，高壓后焚燒。如使用濾紙片作為載體收集的樣本，在實驗室內(nèi)使用緩沖液浸泡、離心收集樣本的操作，亦參照上述要求處理。要求工作人員將所有實驗操作移至生物安全柜中進行，安全柜內(nèi)工作臺面由左到右分別為相對清潔和污染區(qū)域。

7 樣本檢測

7.1 手工操作加樣、混勻用移液器將分離好的血清在生物安全柜內(nèi)加樣至酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)或其他試劑反應(yīng)孔中，小心混勻，盡可能避免氣溶膠的產(chǎn)生。封蓋后，用托盤平移至溫箱孵育;洗滌、溢出洗板機使用前應(yīng)檢查洗液針孔是否阻塞，如發(fā)現(xiàn)阻塞應(yīng)盡快疏通，在洗滌過程中要注意洗滌液不能溢出;每次洗滌完畢，用蒸餾水洗滌幾次，以免洗滌液中的成分產(chǎn)生結(jié)晶阻塞針孔，造成實驗室環(huán)境污染。

7.2 自動化酶標(biāo)儀檢測 該儀器操作中存在有加樣探針及洗滌的廢液均應(yīng)根據(jù)每次廢液的量加入足夠的消毒劑，作用規(guī)定時間后處理。

8 剩余樣本處理

如需保藏的血清或血漿樣本，應(yīng)設(shè)有專用冰箱，登記造冊入檔專人保管。若專庫保藏的，必須按國家高致病性樣本管理要求保藏。不需保藏的所有標(biāo)本，按實驗室廢棄物處置。

9 廢棄物處置

9.1 從實驗室出來的所有廢棄物。包括不需要的樣本 (血細胞、血清)、反應(yīng)板試劑陰陽性對照、ELISA標(biāo)記物、試劑包裝盒等，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專用的密封防漏容器或生物廢物袋中。經(jīng)高壓無害處理后，密封容器或扎緊廢物袋口。按環(huán)衛(wèi)部門要求處置。有專人按特定程序和方法進行清潔和消毒，污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前均應(yīng)進行嚴格消毒。

9.2 記錄廢棄物的處理應(yīng)做好記錄。

9.3 消毒效果檢測可使用化學(xué)、生物指示帶 (劑)法。每次高壓滅菌需要的化學(xué)指示帶，每月用生物指示劑來檢測滅菌效果。

10 人員準入制度

實驗室必須建立嚴格的人員準入制度，嚴禁非本職工作人員進人實驗區(qū)域。

HIV抗體初篩實驗室的生物安全作為體系管理，在實驗室的管理工作中具備著極其重要的意義。在每次實驗活動中，把可能對人員和環(huán)境發(fā)生的危害控制到最低。這些管理活動使原來一些不規(guī)范的操作受到約束和干預(yù)，但是，為了長治久安和每位工作人員的生命安全，，每個工作人員必須要樹立科學(xué)、嚴謹?shù)膽B(tài)度來搞好實驗室生物安全管理工作。