苗 靜

（長春市綠園區(qū)婦幼保健院，吉林 長春 130062）

目前臨床上對于乙型肝炎的檢測主要依據(jù)病毒感染肝細(xì)胞后產(chǎn)生的相應(yīng)的血清學(xué)指標(biāo)，主要指：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）-表面抗體（抗-HBs）；乙型肝炎e抗原（HBeAg）-e抗體（抗-HBe）；乙型肝炎核心抗原（HBcAg）-核心抗體（抗-HBc）。因血清中檢測不到游離的核心抗原，臨床上只檢測其他的五項(xiàng)指標(biāo)即通常所稱的乙型肝炎兩對半[1-4]。為了提高對乙型病毒性肝炎的預(yù)防、診斷、治療水平，提高檢測準(zhǔn)確性，本文對2009年12月至2011年12月來我院檢測的260例患者的結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年12月至2011年12月期間我院收集的260例乙型肝炎兩對半患者的血清樣本，其中男170例，女90例；年齡為23～65歲，平均為44歲。

1.2 檢測方法

病毒血清標(biāo)志物的檢測按說明書關(guān)于操作步驟及陰陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)的要求嚴(yán)格進(jìn)行。

1.2.1 材料

標(biāo)本：患者空腹，檢測當(dāng)日清晨采肘靜脈血3～5mL，分離出血清待檢。試劑盒：英科新創(chuàng)乙型肝炎兩對半檢測試劑盒，各試劑盒的反應(yīng)板上已經(jīng)包被好相應(yīng)的抗原或抗體。其他：微量移液器，吸頭，37℃恒溫箱，洗滌液，吸水紙，離心機(jī)等。

1.2.2 檢測步驟

乙型肝炎兩對半檢測采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）的方法。步驟如下：①離心得到患者血清標(biāo)本。②取出微量反應(yīng)板，依次作好標(biāo)記HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc標(biāo)記，各三孔。③第一排中，依次向各孔加入100μL待檢血清標(biāo)本。④第二排中，依次加入1滴陽性對照血清。⑤第三排中，依次加入1滴陰性對照血清。⑥向各孔分別加入相應(yīng)的酶結(jié)合物1滴，振蕩搖勻，置37℃恒溫箱恒溫30min。⑦取出后用洗滌液洗板5次，每次沖洗后拍干。⑧加入底物A、B各1滴，置37℃恒溫箱恒溫15min。⑨取出后加終止液1滴。根據(jù)顏色判定結(jié)果。

1.3 檢測結(jié)果評定

大三陽指檢測結(jié)果HBsAg、HBeAg、抗HBc均為陽性。小三陽指檢測結(jié)果HBsAg、抗HBe、抗HBc為陽性。一五陽指檢測結(jié)果中HBsAg、抗HBc為陽性。二五陽指檢測結(jié)果中抗HBs、抗HBc陽性。單五陽指檢測結(jié)果抗HBc呈陽性。

2 結(jié) 果

260例乙型肝炎患者中大三陽者90例，占34.6%；小三陽40例，占15.4%。一五陽者57例，占21.9%；二五陽者44例，16.9%；單五陽者29例，占11.2%。

3 小 結(jié)

3.1 HBV病毒感染發(fā)病機(jī)制

HBV病毒本身并不能引起疾病，它肝造成細(xì)胞損傷的主要致病機(jī)制與是病毒引起機(jī)體自身免疫系統(tǒng)的免疫清除反應(yīng)。病毒經(jīng)血液侵入肝細(xì)胞，引起肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生某些變化，激發(fā)自身免疫系統(tǒng)對變化的肝細(xì)胞產(chǎn)生免疫清除反應(yīng)，甚至造成過度清除，進(jìn)而引起肝細(xì)胞損傷。更有甚者，在某些嚴(yán)重病例中，甚至將未被病毒侵犯的肝細(xì)胞一同清除。

3.2 乙型肝炎兩對半指標(biāo)意義

對相關(guān)概念的理解是對檢測結(jié)果進(jìn)行客觀評價(jià)的基礎(chǔ)，各指標(biāo)有不同的臨床指示意義。乙型肝炎兩對半包括HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc 5個檢測指標(biāo)，不同指標(biāo)在臨床上有不同的意義。①HBsAg是由蛋白質(zhì)組成的HBV病毒顆粒的外殼部分，反應(yīng)體檢者體內(nèi)有無HBV病毒，陽性多見于急性乙型肝炎潛伏期、慢性遷延性、慢性活動性肝炎、肝硬化者體內(nèi)。②抗HBs人感染HBV以后。對HBsAg產(chǎn)生的一種免疫反應(yīng)保護(hù)性抗體，它可在一定程度上中和HBsAg。抗HBs陽性說明體檢者以曾有過HBV病毒感染史，機(jī)體抵抗力較強(qiáng)，產(chǎn)生了免疫；也可見于注射了乙型肝炎疫苗抗HBs免疫球蛋白者。它說明體檢者體內(nèi)有一定保護(hù)性，可以抵抗HBV病毒入侵。③HBeAg是HBV病毒核心中的一種可溶性蛋白質(zhì)，可經(jīng)被感染的肝細(xì)胞入血，游離存在于血液中。HBeAg增高表示體檢者體內(nèi)存在病毒復(fù)制，常見于乙型肝炎早期或活動期，表明有較強(qiáng)傳染性。如果HBeAg持續(xù)陽性超過10周，患者則極有進(jìn)展為慢性持續(xù)性感染的可能，通常肝組織也會有較嚴(yán)重的損害。④抗HBe是體檢者體內(nèi)病毒復(fù)制受抑的指征。⑤抗HBc是體檢者有無感染過病毒的指征，通常作為乙型肝炎急性感染窗口期或既往感染遺跡而存在。另據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，抗HBc于健康人中也約有超過25%的可能測到。

3.3 乙型肝炎兩對半檢測的質(zhì)量控制

質(zhì)量控制是乙型肝炎兩對半檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提和保證。

3.3.1 室間質(zhì)評。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心自1988年起在全國開展乙型肝炎血清標(biāo)志物檢驗(yàn)的質(zhì)量評價(jià)活動，并制定相應(yīng)的臨床檢驗(yàn)室間質(zhì)量評價(jià)方案（EQA）。我院每年都會按照規(guī)定進(jìn)行3次的室間質(zhì)量評價(jià)。

3.3.2 室內(nèi)質(zhì)控。雖然室間質(zhì)評在一定程度上可以提高定量檢測的水平，但每年3次的數(shù)量顯然不能滿足對全部結(jié)果準(zhǔn)確性的要求，對實(shí)驗(yàn)報(bào)告而言，室內(nèi)質(zhì)控就顯得更為重要，它對保證日常檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性意義更明顯。特別需注意實(shí)驗(yàn)室操作人員主觀意識、責(zé)任心程度能更真實(shí)反映其檢測水平。宏觀上具體做法包括：①工作環(huán)境：作為一種精密的光學(xué)儀器酶標(biāo)儀，對周圍工作環(huán)境的要求也十分嚴(yán)格。儀器放置環(huán)境的磁場、噪聲、陽光直射，工作臺面是否干燥、干凈、平整，操作空間是否足夠都會對儀器的使用產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，并對儀器的壽命產(chǎn)生影響。②操作注意事項(xiàng)：酶聯(lián)免疫試劑盒的使用必須按照說明進(jìn)行，用來讀取反應(yīng)結(jié)果的酶標(biāo)儀的使用也應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)范進(jìn)行。③準(zhǔn)確性：準(zhǔn)確性是指結(jié)果要真實(shí)可靠，檢測的準(zhǔn)確性要求進(jìn)行全面質(zhì)量控制包括對干擾因素、操作規(guī)范、科學(xué)方法的不斷提高。④精確性：精確性是指結(jié)果要可重復(fù)[5]。

此外，正確的檢測方法對于結(jié)果的準(zhǔn)確性十分重要。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作中需要注意的事項(xiàng)：①微孔板的質(zhì)量：試劑盒中包被好的微孔板的吸附強(qiáng)度、透光度、均一性，對檢驗(yàn)結(jié)果影響明顯。②加樣：加樣時(shí)要務(wù)必一個樣品只使用一個加樣頭，以防止引起交叉污染，同時(shí)要注意加樣頭的消毒、回收。酶標(biāo)抗體加樣過程中應(yīng)防止加樣頭與已加入樣本的微孔板壁接觸。③樣品：樣品送檢之前，要注意保存、處置。④酶標(biāo)抗體：要防止反復(fù)凍融酶標(biāo)抗體，一次用不完時(shí)應(yīng)及時(shí)放入冰箱恒溫4℃保存[6]。⑤洗滌：ELISA操作中最重要的環(huán)節(jié)是洗滌。洗“干凈”，是質(zhì)量保證的關(guān)鍵。有條件食物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能采用機(jī)器洗滌，這是必要，它對于減輕交叉污染，保持結(jié)果一致性有重要意義。⑥溫育：溫育要注意溫箱的溫度應(yīng)符合試劑盒的需求，應(yīng)保證微孔板各孔“漂浮”于37℃水面上均一受熱，切記微孔板不可架在試管架上，脫離水面；微孔板也不能疊放于溫箱內(nèi)。

我國是肝炎大國，乙型肝炎病毒攜帶者比例也較大，由于乙型肝炎是一種嚴(yán)重的傳染性疾病，因此臨床上加強(qiáng)對人群的乙型肝炎兩對半檢測可以起到有效預(yù)防、診治乙型肝炎的作用。本研究利用英科新創(chuàng)的試劑盒采用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測是目前臨床應(yīng)用廣的方法之一，它靈敏度、特異性均較高，加上操作簡便，已成為目前乙型肝炎臨床診斷和篩查的常用方法，檢測結(jié)果能更準(zhǔn)確反映出體檢者體內(nèi)真正的情況，以更好的服務(wù)于臨床。

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