劉鳳琴 廖博 劉麗萍 顏新星

甲胎蛋白(AFP)是一種血清糖蛋白，半壽期5天，電泳時(shí)位于白蛋白和α1球蛋白之間。當(dāng)患肝細(xì)胞癌、卵黃囊和胚胎樣腫瘤及部分肝外腫瘤時(shí)機(jī)體可重新合成，是目前比較有價(jià)值的診斷肝癌和生殖細(xì)胞腫瘤的重要指標(biāo)。收集臨床2010年1月至2012年5月收治的臨床甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)患者120例臨床檢測(cè)方法與臨床意義進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集的120例，其中男74例，女46例，年齡26～80歲，平均46歲。其中原發(fā)性肝癌80例，肝硬化22例，急性肝炎10例，慢性肝炎3例;所有病例均經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查、影像、肝穿活檢及手術(shù)病理等確診。

1.2 方法

1.2.1 試劑與標(biāo)本 用抗AFP單抗體包被，酶結(jié)合物溶于緩沖液中，含蛋白穩(wěn)定劑。2～8℃保存，有效期內(nèi)保持穩(wěn)定。顯色液A0.05M乙酸緩沖液，含0.02%過(guò)氧化氫，存于滴瓶中。顯色液B含色素基質(zhì)和穩(wěn)定劑，存于滴瓶中。2～8℃保存，有效期內(nèi)保持穩(wěn)定。標(biāo)本僅限于人血清，血漿或再鈣化的血漿。血清標(biāo)本必須由用標(biāo)準(zhǔn)靜脈穿刺技術(shù)采集的全血中分離得到。不立即使用的標(biāo)本應(yīng)冷藏于2℃ ～8℃。若貯存期超過(guò)3天，須冰凍保存(-20℃)［1］。若標(biāo)本需運(yùn)送，則按國(guó)家有關(guān)病原試劑運(yùn)輸?shù)囊?guī)定包裝。標(biāo)本中含有沉淀會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致。分析前需將標(biāo)本澄清。含有大量的脂血、溶血或濁度大的血清不能使用。

1.2.2 操作 采用ELISA雙抗體夾心法。自試劑盒中取出已包被抗AFP抗體的微孔反應(yīng)板條，平衡至室溫(18～25℃)，配制相關(guān)試劑。將待測(cè)血清用樣本稀釋液做1:10稀釋?zhuān)靠准?00μl。37℃l小時(shí)后洗滌5次。將AFP標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成 3、6、12、25、50、100 ng/ml，分別加至微孔中，每孔 100 μl。設(shè)置空白孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔。各孔加酶(HRP)標(biāo)記抗 AFP抗體100 μl(空白孔不加)，37℃ 1小時(shí)后洗5次?？馗煽變?nèi)液體后加入酶底物/色原溶液，每孔100 μl，37℃避光反應(yīng) 15 min，顯色。每孔加 2 mol/L H2SO450 μl終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在相應(yīng)波長(zhǎng)測(cè)吸光度。

2 結(jié)果

對(duì)AFP標(biāo)準(zhǔn)稀釋系列濃度為橫軸，吸光度為縱軸，建立標(biāo)準(zhǔn)劑量反應(yīng)曲線(xiàn);根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)劑量曲線(xiàn)采用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)得到待測(cè)標(biāo)本的AFP含量，或采用線(xiàn)性回歸得到待測(cè)標(biāo)本的AFP含量。原發(fā)性肝癌患者血清AFP陽(yáng)性率為75%～80%。其他惡性腫瘤，如胚胎細(xì)胞瘤、胃癌、膽道癌、胰癌和肺癌也可增高。

3 討論

AFP是胚胎發(fā)育早期的一種主要血清蛋白，成人由肝細(xì)胞產(chǎn)生，含量極微。AFP有很強(qiáng)的免疫抑制功能，肝細(xì)胞癌患者血清AFP升高，但有30%患者AFP在正常范圍內(nèi)。少數(shù)其他腫瘤患者AFP也可呈陽(yáng)性。檢查AFP的常用方法有反相間接血凝法、放射免疫法、火箭電泳法、ELISA法，ELISA法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，易于推廣。ELISA法采用ELISA雙抗體夾心法。用抗AFP抗體包被微孔板，分別將待測(cè)樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及陽(yáng)性、陰性對(duì)照加至包被孔中，反應(yīng)后加入酶結(jié)合物(HRP－抗AFP單克隆抗體)，使特異性地形成固相抗AFP抗體－AFP－酶標(biāo)抗AFP抗體復(fù)合物，再加入酶底物/色原呈色。呈色程度與測(cè)定范圍內(nèi)的樣本中AFP濃度成正比。樣本在離心前，須凝固充分。不要使用在室溫下放置超過(guò)8h的樣本。質(zhì)控物、定標(biāo)液分裝后，只能凍融一次，不能多次的溶解、冰凍、反復(fù)使用，不能儲(chǔ)存在冰箱的自動(dòng)除霜的冰格中，以免影響測(cè)試值。每次勿加入過(guò)多的比色杯，不要用手觸摸，易產(chǎn)生靜電，導(dǎo)致進(jìn)杯的入口和出口或軌道內(nèi)堵塞。放試劑時(shí)應(yīng)注意是否有氣泡，且混勻的時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)，執(zhí)行手工稀釋。

原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者血清中AFP明顯升高，血清AFP水平升高超過(guò)400ng/ml持續(xù)4周或200～400ng/ml持續(xù)5周以上，在排除其他因素后，綜合影像學(xué)檢查，高度提示為肝細(xì)胞性肝癌，AFP可用于肝癌高危人群的普查和隨訪(fǎng)，對(duì)于肝癌的診斷、鑒別與療效觀察有價(jià)值;但也有20% ～30%患者可無(wú)AFP升高，值得注意。病毒性肝炎、酒精性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化患者AFP可呈中、低水平或暫時(shí)性增高［2］。AFP升高主要是由于受損傷的肝細(xì)胞再生而幼稚化時(shí)，肝細(xì)胞便重新具有產(chǎn)生AFP的能力，隨著受損肝細(xì)胞的修復(fù)，AFP逐漸恢復(fù)正常。

［1］覃慧鈺.血清腫瘤標(biāo)志物在肝癌診斷中的應(yīng)用.中華肝臟病雜志，2005，13(5):379-380.

［2］趙恒，廖靜，劉瑜，等.甲胎蛋白與肝癌.臨床肝膽病雜志，2008，24(5):385-387.