陳月華 鄧小虎 于明明 鄭瑞強(qiáng)

江蘇省蘇北人民醫(yī)院，江蘇省揚(yáng)州市 225001

降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體物質(zhì)，近年來被廣泛應(yīng)用于鑒別細(xì)菌感染和非細(xì)菌感染。在正常人群中，血漿PCT＜0.1ng／ml，當(dāng)全身細(xì)菌感染時(shí)，血漿PCT可明顯升高，大于1ng／ml，甚至大于10ng／ml，而隨著感染的控制PCT值可相應(yīng)下降［1～3］。由于PCT基礎(chǔ)值較低，PCT測(cè)定值的輕微變化可能對(duì)臨床診斷產(chǎn)生重大的影響，因此，測(cè)定PCT時(shí)應(yīng)將各種影響因素控制在最小。有關(guān)實(shí)驗(yàn)室血樣保存條件，如血樣類型、保存時(shí)間及溫度、血樣密封狀態(tài)對(duì)PCT值影響的研究較少，對(duì)此，筆者比較了上述實(shí)驗(yàn)室條件對(duì)PCT檢測(cè)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 血樣來源 所有血樣均來源于2011年1－3月我院ICU病房明確診斷膿毒血癥的患者，膿毒血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《2004年拯救嚴(yán)重膿毒血癥和感染性休克治療指南》［4］，所有血樣均經(jīng)深靜脈導(dǎo)管采集，共采集10位患者的血樣。

1.2 標(biāo)本的留取保存 按無菌原則空腹抽取無肝素管靜脈血20ml，分2管保存：血清管和全血管，每管10ml，其中血清管待血塊自然凝固收縮后，于常溫3 000r／min離心5min，留取血清，再分2管分別于4℃、25℃保存0h、2h、4h、8h、12h、24h時(shí)檢測(cè)PCT；全血管標(biāo)本分2管，分別于4℃、25℃以全血保存0h、2h、4h、8h、12h、24h，檢測(cè)前提取血清并即刻檢測(cè)PCT。0h檢測(cè)的血清樣本隨機(jī)分為密封管、非密封管保存于25℃，保存2h、4h、8h、12h、24h分別檢測(cè)PCT。

1.3 儀器與試劑 PCT采用高敏免疫化學(xué)發(fā)光法，所有儀器為深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司的邁格魯2000（MAGLUMI2000）免疫發(fā)光測(cè)定儀，試劑盒由同一公司提供，按說明書操作，所有試劑均在保質(zhì)期內(nèi)使用，儀器執(zhí)行質(zhì)控并在控，正常PCT＜0.5ng／ml。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以0h檢測(cè)的PCT值為基線值（100%），取基線值的百分?jǐn)?shù)，并計(jì)算百分?jǐn)?shù)的均數(shù)及其標(biāo)準(zhǔn)差（±s），組間比較采用兩獨(dú)立樣本的非參數(shù)U檢驗(yàn)，多組間比較采用多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 密封組與非密封組不同保存時(shí)間PCT變化（血清、25℃）（見圖1）同一時(shí)間密封組與非密封組間PCT值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），兩組保存4h后PCT值均較基線值下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 密封組與非密封組PCT隨保存時(shí)間的變化圖

2.2 4℃時(shí)血清、全血標(biāo)本不同保存時(shí)間PCT的變化（見圖2）。

圖2 4℃血清、全血標(biāo)本PCT隨保存時(shí)間的變化圖

血清在4℃保存2h、4h、8h時(shí)，其PCT值較基線值分別升高了11.2%、3.9%、1.4%，保存12h、24h時(shí)，PCT值較基線值分別下降了1.8%、4.3%，且4℃血清保存2h時(shí)較基線PCT值顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其他時(shí)間PCT值與基線值間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；全血4℃保存2h、4h、8h、12h、24h時(shí)，其PCT值較基線值分別下降了3.5%、9.6%、12.2%、13.1%、15.3%，保存4h后PCT值較基線值下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；4℃保存2h后，兩組間PCT值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 25℃時(shí)血清、全血標(biāo)本不同保存時(shí)間PCT的變化（見圖3）。

圖3 25℃血清、全血標(biāo)本PCT隨保存時(shí)間的變化圖

血清在25℃保存2h、4h、8h、12h、24h時(shí)，其PCT值較基線值分別下降了4.2%、6.9%、9%、10.8%、12.8%，保存4h后PCT值較基線值下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；全血25℃保存2h、4h、8h、12h、24h時(shí)，其PCT值較基線值分別下降了7.7%、12.5%、13.7%、15.0%、16.8%，全血25℃保存2h后PCT值較基線值下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中，25℃保存4h時(shí)，兩組間PCT值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其他時(shí)間兩組間PCT值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

正常情況下，PCT由甲狀腺C細(xì)胞產(chǎn)生，在人體中水平極低（健康成人＜0.1ng／ml），PCT的半衰期為22～30h，在體內(nèi)外穩(wěn)定性很好［5，6］。有研究發(fā)現(xiàn)PCT檢測(cè)在體外不受動(dòng)靜脈血、冷凍和復(fù)溫的影響，血清與血漿之間PCT也無顯著差別［7］。本研究也發(fā)現(xiàn)保存血樣時(shí)密封與否對(duì)PCT影響不大。

Michael等學(xué)者的研究中發(fā)現(xiàn)降鈣素原的降解速度較緩慢，血漿室溫保存24h，PCT僅下降12.4%［7］，本研究也有相近的發(fā)現(xiàn)。本研究中，除4℃血清組外，4℃全血組、25℃血清組、25℃全血組PCT值在血樣保存2h內(nèi)下降最快，分別下降了基線值的3.5%、4.2%、7.7%。全血4℃、血清25℃保存4h后及全血25℃保存2h后PCT值較基線值下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，據(jù)此建議采血后最好在2h內(nèi)盡快檢測(cè)PCT。但保存4h之后，PCT值降低速度非常慢，此后20h三組PCT值每小時(shí)下降基線值的0.2%～0.3%。保存24h后，三組PCT值較基線值僅下降了15%左右，因此，PCT在體外是相對(duì)穩(wěn)定的。為提高PCT檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，建議采血后2h內(nèi)完成檢測(cè)，若實(shí)際工作中無法完成，建議制定規(guī)范的操作流程，確保從采血到檢測(cè)的時(shí)間間隔相對(duì)恒定，以保證PCT動(dòng)態(tài)檢測(cè)的穩(wěn)定性。

血清4℃保存2～8h，PCT值不降低反而升高，其機(jī)制尚不明確，分析其原因可能與以下幾點(diǎn)有關(guān)，（1）和降鈣素原與血清白蛋白的結(jié)合、解離有關(guān)。當(dāng)溫度降低時(shí)，降鈣素原與白蛋白的解離遠(yuǎn)超過降鈣素原的降解，因此PCT值不降低反而升高。（2）降鈣素原降解為小分子片段，這些小分子片段可能與化學(xué)發(fā)光試劑中的有效成分有更高的親和力，導(dǎo)致PCT值的假性升高［7］。目前尚無研究明確降鈣素原的蛋白結(jié)合度及解離率，而且膿毒血癥患者血清白蛋白濃度個(gè)體差異很大［8］，因此血清4℃時(shí)PCT檢測(cè)值可能波動(dòng)較大，本研究中4℃血清組PCT值均數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差較其他組明顯高，也支持上述推測(cè)，因此不推薦血清4℃保存。4℃全血保存2～8h并未出現(xiàn)PCT值較基線升高，分析可能與降鈣素原和（或）其降解產(chǎn)物被血細(xì)胞表面吸附有關(guān)。上述有關(guān)推測(cè)尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

比較四組PCT檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，血清25℃組、全血4℃組PCT值較另外兩組變化更平穩(wěn)，因此，血樣保存首選血清室溫下保存，若以全血保存則建議冷藏保存。

綜上所述，為提高PCT檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保證PCT動(dòng)態(tài)檢測(cè)的穩(wěn)定性，建議采血后2h內(nèi)盡快完成檢測(cè)，若無法完成，則建議制定規(guī)范的檢測(cè)流程，確保采血與檢測(cè)的時(shí)間間隔相對(duì)恒定，血樣標(biāo)本以血清室溫下保存最好，若全血標(biāo)本以冷藏保存為宜。

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