李勝學(xué) 趙琴玲 嚴明 李含瑞 李愛平

膽紅素是血紅素代謝的產(chǎn)物，臨床上多用于黃疸的診斷和性質(zhì)鑒別，亦是重要的肝功能試驗指標(biāo)，準(zhǔn)確測定具有重要的意義。目前，我國臨床實驗室測定血清總膽紅素（total TB）的方法主要有3種：重氮法、膽紅素氧化酶法和化學(xué)氧化法（如釩酸鹽氧化法）[1]。酶法測定膽紅素具有準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好等優(yōu)勢，但由于試劑昂貴，僅為少數(shù)臨床實驗室所接受。重氮法和釩酸鹽氧化法是多數(shù)臨床實驗室首選的檢測方法。目前仍廣泛使用的方法是重氮法，而釩酸鹽氧化法因其穩(wěn)定性、精密度、準(zhǔn)確度均能滿足實驗室要求，且試劑簡單，能在全自動生化分析儀上面使用，被越來越多的實驗室所采用，在使用過程中，本實驗室發(fā)現(xiàn)重氮法膽紅素測定結(jié)果稍高于釩酸鹽氧化法測定結(jié)果，但兩者的系統(tǒng)誤差均屬臨床可接受水平[2]，與大量的文獻報道一致，但新生兒直接膽紅素兩種方法的測定結(jié)果差異較大。

1 資料與方法

1.1 試劑和儀器 重氮法和釩酸鹽氧化法測定結(jié)果的相關(guān)回歸方程為Y=1.092X+4.815，相關(guān)系數(shù)r為0.9958，T.bil試劑盒（批號：Z109218）、D.bil試劑盒（批號：Z109218）均為美國貝克曼公司提供的配套試劑；釩酸鹽氧化法T.bil試劑盒、D.bil試劑盒均為北京利德曼公司提供，總膽紅素試劑盒批號為111011J，直接膽紅素試劑批號為111011J。采用貝克曼DXC800型全自動生化分析儀。

1.2 方法 用兩種方法同時測定從患者臨床標(biāo)本中挑選出來的若干血清標(biāo)本，成人組隨機挑選不同濃度的膽紅素標(biāo)本進行測定，新生兒均使用兩種方法測定，然后對數(shù)據(jù)進行比較分析，部分實驗依據(jù)美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）EP9-A文件，對兩種方法進行比較。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采取配對t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度實驗 取兩份標(biāo)本，一份高值，一份為低值，分別用兩種方法對總膽紅素及直接膽紅素進行20次重復(fù)測定，計算其CV。重氮法：TBIL（高值）：X=235.6 μmol/L，CV=1.53%；TBIL（低值）：X=17.2 μmol/L，CV=1.98%；DBIL（高值）：X=168.1 μmol/L，CV=1.78%；DBIL（低值）：X=9.4 μmol/L，CV=2.23%；釩酸鹽氧化法：TBIL（高值）：X=232.7 μmol/L，CV=1.52%；TBIL（低值）：X=9.8 μmol/L，CV=1.79%；DBIL（高值）：X=102.8 μmol/L，CV=1.35%；DBIL（低值）：X=9.7 μmol/L，CV=1.77%。兩法精密度良好。

2.2 回收實驗 隨機抽取新鮮血清標(biāo)本0.9 ml，加入原裝進口標(biāo)準(zhǔn)品1 ml，及時上機測定T.bil和D.bilL。標(biāo)本濃度分別為：T.bil：22.5 μmol/L，D.bil：8.2 μmol/L。標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：T.bil：236 μmol/L、52 μmol/L，D.bil：153 μmol/L、28 μmol/L。重氮法回收率分別為T.bil：101.2%、101.8%，平均101.5%；DBIL：102.1%、100.9%，平均101.5%；釩酸鹽氧化法回收率分別為T.bil：98.9%、99.5%，平均99.3%；D.bil：98.4%、100.4%，平均99.4%。

2.3 線性比較 用T.bil化學(xué)品配制成不同濃度梯度：0、200、400、600、800、1000 μmol/L。分別用重氮法和釩酸鹽氧化法進行測定，然后計算兩種方法的回歸方程。重氮法為：Y=1.053X-3.85，r=0.9998，TBIL在340 μmol/L內(nèi)線性良好；釩酸鹽氧化法：Y=1.2184X-35.82，r=0.9963，TBIL在650 μmol/L線性。重氮法線性范圍較釩酸鹽氧化法窄。

2.4 分組比較 選取筆者所在醫(yī)院住院患者根據(jù)年齡分新生兒組、兒童組、成人組，選取各種濃度的血清進行同步測定，各組血清總膽紅素重氮法和釩酸法測定結(jié)果差異不大，相關(guān)回歸方程為Y=1.092X+4.815，相關(guān)系數(shù)r為0.9958。新生兒的直接膽紅素測定差異較大，重氮法和釩酸法測定結(jié)果的相關(guān)回歸方程為Y=0.1372X+1.8，相關(guān)系數(shù)r為0.5831，成年人及大于30 d的兒童的直接膽紅素測定結(jié)果的相關(guān)回歸方程為Y=1.1368X-3.818，相關(guān)系數(shù)r為0.9997。見表1。

2.5 相關(guān)性比較 取隨機標(biāo)本40份，分別用重氮法和釩酸鹽氧化法對TBIL及DBIL進行測定，對兩種方法進行相關(guān)性比較。TBIL：Y=1.27X-0.78，r=0.996 8；DBIL：Y=1.42X-1.83，r=0.9968，兩法在TBIL及DBIL測定中相關(guān)系數(shù)均達到0.99以上，說明及兩法相關(guān)性良好。

2.6 干擾試驗 分別對重氮法和釩酸鹽氧化法進行溶血標(biāo)本及脂血標(biāo)本進行抗干擾試驗，試驗證明重氮法在Hb<5.5 g/L、TG<6.2 mmol/L時基本無干擾，釩酸鹽氧化法在Hb<3.5 g/L、TG<4.6 mmol/L時基本無干擾，當(dāng)甘油三酯濃度為8.0 mmol/L以下時用釩酸氧化法測定TBIL和DBIL均無顯著性干擾（P>0.05）。

3 討論

兩種方法均為檢測總膽紅素和直接膽紅素的常用方法，釩酸氧化法檢測直接膽紅素的線性范圍略窄于重氮法，但是它的精密度和準(zhǔn)確度略優(yōu)于重氮法，而且抗血紅蛋白和甘油三酯干擾的能力明顯強于重氮法[1]。新生兒標(biāo)本常伴有溶血，故對兩種方法做了相關(guān)干擾試驗。

兩種方法檢測結(jié)果有良好的相關(guān)性，均符合r≥0.975[2]，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），釩酸氧化法檢測直接膽紅素的線性范圍略窄于重氮法，但是它的精密度和準(zhǔn)確度略優(yōu)于重氮法，而且抗血紅蛋白和三酰甘油干擾的能力明顯強于重氮法。

在臨床工作中發(fā)現(xiàn)小于30 d的新生兒的直接膽紅素測定，兩法差異較大，造成差異較大的原因尚待研究，重氮法測定結(jié)果更可靠，臨床認為新生兒直接膽紅素>26 umol/L為病理性黃疸[3]，因為大量新生兒黃疸患者測定的直接膽紅素如果依據(jù)重氮法測定結(jié)果進行光療，都能治愈，如果依據(jù)釩酸鹽氧化法測定的結(jié)果，臨床會認為患者為病理性黃疸，即為肝細胞損傷引起的黃疸，治療方法將與生理性黃疸有巨大區(qū)別，必定耽誤患者的治療，所以重氮法測定的新生兒直接膽紅素更符合臨床。因此建議新生兒的直接膽紅素測定不可用釩酸鹽氧化法。

[1] 陳宗平.釩酸氧化法測定血清總膽紅素的方法學(xué)評價[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（11）：997-998.

[2] 楊昌國.精密度評價和方法比較中NCCL評價方案的應(yīng)用[J].臨床檢驗雜志，1997，17（1）：47-48.

[3] 王慕逖.兒科學(xué)[M].第5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：73.