高嵐，馮宇飛，董立財(cái)，呂邵娃，王艷宏，李永吉

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

雙黃連粉針是由金銀花、黃芩、連翹提取物組成的無菌凍干粉末制劑，具有顯著的抗菌、抗病毒、消炎及調(diào)節(jié)免疫的作用，是醫(yī)院臨床常用的抗菌、抗病毒產(chǎn)品。近年來，隨著雙黃連粉針臨床應(yīng)用的普遍擴(kuò)大，其社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益不容置疑，然而雙黃連凍干粉針不良反應(yīng)病例報(bào)道卻逐年增多，對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)量控制尤顯必要。本文就其近幾年化學(xué)成分、藥理作用、藥動(dòng)學(xué)、含量測(cè)定及指紋圖譜等方面進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步研究提供科學(xué)可靠的依據(jù)。

1 化學(xué)成分

雙黃連粉針成分多樣，目前常以綠原酸、黃芩苷、連翹苷、咖啡酸、黃芩素等作為質(zhì)控指標(biāo)。雙黃連粉針中綠原酸、咖啡酸、熊果酸、齊墩果酸、對(duì)羥基苯乙酸、黃芩苷、蘆丁、黃芩素、漢黃芩素、大黃酚、大黃素甲醚、連翹苷、胡蘿卜苷、木犀草苷、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素、異虎耳草素、異落葉松脂素、連翹醇、連翹環(huán)己醇、半乳糖醇、β－谷甾醇和葡萄糖等24種單體成分已見報(bào)道［1－4］。

2 藥理作用

2．1 抗菌作用

雙黃連粉針體外對(duì)多種革蘭氏陽性菌和陰性菌均有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)金葡菌、甲型鏈球菌、鉤端螺旋體、表皮葡萄球菌、β－溶血性鏈球菌、肺炎克雷伯菌、霍亂弧菌、布氏桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌、宋內(nèi)志賀菌、弗氏檸檬酸桿菌等均有殺滅作用，尤其是對(duì)金葡菌、表皮葡萄球菌和變形桿菌的抑制作用較強(qiáng)。其主要成分黃芩苷的抗菌譜較廣，對(duì)金葡菌、綠膿桿菌及霍亂弧菌的作用較明顯，對(duì)白色念株菌和表皮癬菌也有抑制作用［5］。

2．2 抗病毒作用

雙黃連粉針亦是一個(gè)較廣譜的抗病毒制劑。李凡［6］等采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法、染料攝入法檢測(cè)到雙黃連粉針對(duì)流感病毒、呼吸道合胞病毒、Ⅲ型腺病毒、Ⅰ、Ⅱ型單純皰疹病毒、B3、B4、A16型柯薩奇病毒、71型腸道病毒具有明顯抑制作用;對(duì)Ⅲ型脊髓灰質(zhì)炎病毒、6型?？刹《?、麻疹病毒、水泡性口炎病毒有一定的抑制作用，并能顯著抑制肺炎、心肌炎、胰腺炎等疾病的發(fā)生。

2．3 抗炎作用

雙黃連粉針能夠顯著抑制炎癥介質(zhì)導(dǎo)致的腫脹，增加單核－巨噬細(xì)胞吞噬作用。其中黃芩可抑制組胺的釋放和花生四烯酸的代謝，減弱細(xì)動(dòng)脈的擴(kuò)張和細(xì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的收縮，從而降低血管通透性，減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，減輕炎癥早期反應(yīng)。對(duì)注射細(xì)菌內(nèi)毒素引起的發(fā)熱反應(yīng)也有明顯的解熱作用，并且呈量效對(duì)應(yīng)關(guān)系［7］。

2．4 增強(qiáng)免疫力作用

雙黃連粉針是一種多功能的免疫增強(qiáng)劑。有實(shí)驗(yàn)證明，雙黃連粉針能使補(bǔ)體總量、CMSC的水平增高，其強(qiáng)度以大劑量最顯著，接近正常水平。可促進(jìn)溶血素的形成，對(duì)ConA誘導(dǎo)的T細(xì)胞的增殖反應(yīng)有增強(qiáng)作用。張建華等對(duì)16例肺部感染及慢性支氣管炎患者應(yīng)用雙黃連，測(cè)IgM和CD4細(xì)胞水平，其值顯著升高，說明雙黃連粉針能夠增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，從而起到抗感染作用［8］。而黃芩苷對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞具有雙向調(diào)節(jié)作用，低劑量可顯著增加巨噬細(xì)胞吞噬中性紅和溶菌酶含量，高劑量則起抑制作用［9］。

2．5 其他作用

雙黃連粉針抗解脲支原體實(shí)驗(yàn)顯示，該藥有較強(qiáng)的抗解脲支原體活性。另有研究發(fā)現(xiàn)，雙黃連粉針可減少心律失常后動(dòng)物死亡數(shù)，并使大多數(shù)動(dòng)物心律失常后轉(zhuǎn)為竇性心律，對(duì)氯化鋇和氯化鈣致大鼠實(shí)驗(yàn)性心律失常有良好的對(duì)抗作用［10］。

3 藥動(dòng)學(xué)研究

目前，國(guó)內(nèi)也廣泛開展了雙黃連粉針的藥動(dòng)學(xué)研究。396mg/kg給予家兔耳緣靜脈給藥后［11］，黃芩苷在家兔體內(nèi)呈二室開放模型，中央室表觀分布容積占穩(wěn)態(tài)表觀分布容積的56.57%，可間接推知，黃芩苷在血流豐富的器官、組織(中央室)中分布較多，在周邊室分布較少。由 t1/2α=0.056h，t1/2β=0.37h 得知，黃芩苷進(jìn)入體內(nèi)后為快速分布、緩慢消除的過程。300mg/kg 靜脈給藥后［12］，黃芩苷 t1/2α為 6.7min，t1/2β為118.8min，同樣說明黃芩苷在家兔體內(nèi)快速分布、緩慢消除。大鼠尾靜脈分別注射給予綠原酸1mg/kg、雙黃連粉針［13］，綠原酸的藥動(dòng)學(xué)結(jié)果表明，藥動(dòng)學(xué)過程均符合二室開放模型，而粉針中的綠原酸與單用綠原酸在大鼠體內(nèi)的多個(gè)主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在顯著差異?？赏浦p黃連粉針中的其他成分可能影響綠原酸在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程。

4 質(zhì)量控制研究

4．1 高效液相色譜法

該法具有精密度高，方法靈敏、可靠等特點(diǎn)，并可同時(shí)測(cè)定多種指標(biāo)成分，是質(zhì)控中的首選方法。楊瑞芬等［14］同時(shí)測(cè)定了雙黃連中綠原酸和黃芩苷的含量，梯度洗脫的利用有利于提高兩種組分的分離度。黃義昆等［15］在此基礎(chǔ)上，以230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，可以減小兩個(gè)峰高的差別，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在流動(dòng)相中加入適量的酸可以抑制色譜峰的拖尾現(xiàn)象。對(duì)綠原酸、黃芩苷及連翹苷等三種成分的含量同時(shí)測(cè)定也有報(bào)道［16－18］。水彥芳等［19］成功將該方法運(yùn)用到雙黃連片劑、口服液和注射劑等制劑的成分分析之中。孫永慧等［20］建立了同時(shí)測(cè)定雙黃連粉針中綠原酸、咖啡酸、連翹酯苷A、連翹苷和黃芩苷5種成分含量的HPLC。方法簡(jiǎn)單易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可有效地用于雙黃連粉針的質(zhì)量控制。

4．2 薄層掃描法

薄層掃描法在雙黃連粉針的質(zhì)量控制研究中報(bào)道較少。劉杰等［21］采用同法測(cè)定雙黃連含片及其他雙黃連類制劑中連翹苷的含量，并進(jìn)行了方法學(xué)研究，加樣回收率達(dá)到96.94%。

4．3 分光光度法

分光光度法是一種快捷的定性分析方法。閻姝等［22］用紅外光譜法對(duì)雙黃連粉針的定性定量分析，初步指認(rèn)了粉針劑中各類成分的吸收峰，建立了基于中紅外光譜的黃芩苷與綠原酸含量校正模型。模型的R2值均在0．99以上，平均預(yù)測(cè)相對(duì)誤差也低于4%，具有良好的擬合及預(yù)測(cè)能力。

4．4 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法在雙黃連粉針的質(zhì)量控制研究中應(yīng)用尚不多見。鄭一寧等［23］用高效毛細(xì)管電泳－電導(dǎo)法測(cè)定雙黃連粉針中黃芩苷的含量，線性范圍為10～720mg/L，檢出限為2.5mg/L，平均回收率為100%。劉玠［24］等用HPCE法測(cè)定雙黃連粉針中黃芩苷的質(zhì)量濃度，檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm，黃芩苷質(zhì)量濃度在0.1～0.5mg/mL的范圍峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4．5 指紋圖譜研究

雙黃連粉針指紋圖譜(Fingerprint)技術(shù)在其產(chǎn)品定性及穩(wěn)定性等方面研究中日趨重要。馬百平［25］等建立了雙黃連粉針?biāo)幉腍PLC指紋圖譜的檢測(cè)方法，并用于制劑質(zhì)量的分析。其采用YMC－Pack ODS－A C18色譜柱(4.6mm ×250mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇－0.0125mol/L醋酸銨－醋酸水溶液線性梯度洗脫檢測(cè)器為PDA－ELSD串聯(lián)使用。結(jié)果得到分離度較好的HPLC－PDA(254nm)和HPLC－ELSD兩種指紋圖譜，兩者具有良好的相關(guān)性和互補(bǔ)性。以黃芩苷為參照物，共識(shí)別了13個(gè)特征共有峰。注射用雙黃連制劑指紋圖譜也見報(bào)道［26］，采用 YMC－Pack ODS－A色譜柱(4.6mm ×150mm，5μm)，以 0．25%冰醋酸－甲醇(V/V)為流動(dòng)相梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm。結(jié)果顯示，19批注射用雙黃連(凍干)指紋圖譜具有較高的相似度。郭潔等［27］對(duì)雙黃連凍干粉特征色譜峰進(jìn)行歸屬研究，采用依利特Hypersil ODS2色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈－0.1%甲酸，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，分離得到21個(gè)色譜峰。由此可見，指紋圖譜具有專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，是一種綜合性可量化的鑒別手段，是符合中藥真實(shí)、穩(wěn)定和一致性要求的質(zhì)量控制模式之一。

5 結(jié)語

雙黃連粉針作為中藥注射劑的典型代表，具有化學(xué)成分復(fù)雜、藥理作用多樣、呈現(xiàn)不良反應(yīng)等新時(shí)期中藥注射劑的特點(diǎn)，目前限制其應(yīng)用與發(fā)展的原因主要在于缺乏統(tǒng)一有效的質(zhì)控手段，尋求全面且簡(jiǎn)便快速的質(zhì)量控制方法是頗受關(guān)注的研究方向。隨著各種生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，為降低過敏性反應(yīng)的發(fā)生，保證產(chǎn)品質(zhì)量，應(yīng)建立高效、快速、微量、準(zhǔn)確的活性成分質(zhì)控體系，促進(jìn)化學(xué)成分與藥敏反應(yīng)研究的有效結(jié)合，從而客觀、規(guī)范地建立國(guó)際上認(rèn)可的評(píng)價(jià)體系，是注射劑安全性迫切需要解決的問題之一。

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