吳明釵，晏永波，黃鵬，林潔，蘇泉，董邦鈴，王敏

（1.溫州醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院 藥學部，浙江 溫州 325200；2. 溫州醫(yī)學院，浙江 溫州 325035）

鹽酸羥甲唑啉（oxymetazoline hydrochloride）為α-腎上腺素受體激動劑， 眼表局部用藥可治療過敏性等非感染性結膜炎，起效迅速，療效滿意，無明顯不良反應[1]。但市場上的鹽酸羥甲唑啉滴眼劑是溶液劑，滴入眼內以后，由于眼瞼的眨動和淚液的分泌，數(shù)分鐘內可被稀釋至原來濃度的0.1%，需要增加給藥次數(shù)來維持藥效。眼用凝膠劑是以親水性聚合物為載體，有較好的生物相容性，為半固體狀態(tài)，可延長藥物的作用時間，減少用藥次數(shù)，但給藥劑量不易控制[2]。眼用即型凝膠（in situ forming eye gel）是一種新型滴眼劑，具有獨特的溶液——凝膠相變性質，兼有使用方便，分劑量準確，與用藥部位特別是黏膜組織親和力強，滯留時間長，生物利用率高等優(yōu)點[3]。為滿足臨床需要，本研究以泊洛沙姆407（F127）為主要凝膠載體材料，適用于靜脈注射給藥濃度的泊洛沙姆188（F68）0.6%為促滲劑，制備新型鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠，并通過高效液相色譜（HPLC）法測定鹽酸羥甲唑啉的含量。

1 材料和方法

1.1 儀器 HPLC儀，包括125泵、166紫外檢測器、Karat色譜工作站（美國Beckman公司）；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；電子天平（AB104-S梅特勒-托利多）、恒溫磁力攪拌器（2B-3A，上海理達儀器廠）、pH計（PHSJ-4型，上海雷磁）。

1.2 試藥 鹽酸羥甲唑啉原料藥及對照品（常州亞邦制藥有限公司）；羥苯乙酯（廣州漢普醫(yī)藥有限公司，）；F127（Sigma）；F68（Sigma）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 眼用即型凝膠的制備 采用冷溶法制備凝膠溶液[4]。①分別配置19%、20%、21%、22%、23%、24%的F127溶液各100 mL為a液，分別加入濃度為0.6% F68后為b液，制備空白凝膠溶液，即a液和b液。②參照臨床鹽酸羥甲唑啉滴眼液的處方， 準確稱取相同量的鹽酸羥甲唑啉25 mg、羥苯乙酯30 mg、氯化鈉800 mg分別溶于a液和b液中，形成含藥凝膠溶液。③將含藥溶液a液和b液置于冰箱中冷藏片刻，攪拌2 min，然后將其放入4 ℃的冰箱中保存24 h以上，直至得到澄清、無團塊、分散均勻的溶液。

1.4 膠凝溫度的測定 采用“攪拌子法”測定膠凝溫度[5]。取待測溶液20 mL置于玻璃西林瓶中，加入攪拌子。西林瓶的橡膠塞中間打孔并插入精度為0.1 ℃的溫度計，溫度計的水銀球完全沒入待測溶液中。將西林瓶置于低溫水浴中，開啟電磁攪拌，設定攪拌子轉速為200 r/min，保持水浴持續(xù)緩慢升溫，升溫速度約為1～2 ℃/min。記錄磁力攪拌子完全停止轉動時的溫度，即為該待測液的膠凝溫度。每個樣品平行測定3次，結果取其平均值。

1.5 鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠的含量測定

1.5.1 色譜條件：依據(jù)文獻[6]，鹽酸羥甲唑啉和羥苯乙酯的最大吸收波長分別為281 nm和258 nm，實驗以羥甲唑啉的最大吸收波長281 nm為檢測波長。雖然在281 nm處羥苯乙酯有強吸收，其吸收峰高于羥甲唑啉，但不干擾羥甲唑啉的測定。色譜柱Hypersil ODS2（4.6 mm×250.0 mm，5μm）；流動相醋酸-醋酸銨緩沖液（0.75%醋酸銨，0.36%三乙胺，醋酸調pH至5.3）:乙腈=60:40；流速1 mL·min-1；檢測波長281 nm；柱溫30 ℃；進樣量20 μL[7]。

1.5.2 溶液的制備：①對照品溶液的制備：稱取鹽酸羥甲唑啉對照品50 mg，置于10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為貯備液。吸取儲備液1.0 mL置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液（500 mg·L-1）。②供試品溶液的制備：吸取相變溫度最低的鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠溶液1.0 mL，置于25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。③陰性對照溶液的制備：按處方量稱取除鹽酸羥甲唑啉外的其他輔料，按“供試品溶液”項下方法處理即得。

1.5.3 系統(tǒng)適應性實驗：分別取對照品溶液，供試品溶液和空白對照溶液，按“1.5.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖。

1.5.4 標準曲線的繪制：精密吸取上述對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，分別置于10 mL容量瓶得50、100、200、300、400、500 mg·L-1的溶液，依次按“1.5.1”項下色譜條件進行測定，以峰面積（A）對濃度（C）作線性回歸。

1.5.5 精密度試驗：精密吸取上述對照品溶液置10 mL容量瓶中，分別配制成300 mg·L-1的對照品溶液，各連續(xù)進樣3次，測得鹽酸羥甲唑啉的濃度，進行日內（0、1、2、4、6、8 h）考察；連續(xù)測定3 d，計算日間RSD。

1.5.6 回收率試驗：精密稱取鹽酸羥甲唑啉，按處方比例配制成高、中、低3種不同濃度，按照“1.5.1”項下的色譜條件下進樣，每一濃度平行測定3次，計算回收率。

1.5.7 樣品含量測定：根據(jù)最優(yōu)處方比例制備鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠3批次，精密量取樣品6 mL，置于10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，以“1.5.1”項色譜條件進樣，測定峰面積，計算含量。

2 結果

2.1 鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠溫度的影響 鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠溶液受熱能形成膏狀的凝膠，單純F127溶液組的膠凝溫度與F127與F68混合組的膠凝溫度均隨F127含量的增加而降低。從圖1中可以得出，只有含19% F127溶液組的膠凝溫度高于體表溫度，含20% F127溶液組的膠凝溫度接近體表溫度，其他質量分數(shù)大于20%的F127溶液組的膠凝溫度都低于體表溫度，均能在眼內膠凝?？紤]到臨床的實際需要，在室溫下應為自由流動的液體，而生理條件下（包括體溫環(huán)境等）又能轉變?yōu)榘牍虘B(tài)凝膠，即鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠在室溫時是溶液，滴入眼內能形成膠狀，緩慢釋放，而含21% F127與0.6% F68溶液組的膠凝溫度為（27.6±0.39）℃正好符合這一要求，因此本實驗選擇21%F127與F68溶液組為最優(yōu)鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠的處方，并通過HPLC法進行含量檢測。

圖1 不同質量分數(shù)F127對膠凝溫度的影響

2.2 含量測定

2.2.1 方法的專屬性：據(jù)文獻[8]報道，選擇多種流動相進行預試驗，結果確定0.75%醋酸銨+0.36%三乙胺（醋酸調pH至5.3）-乙腈（60:40）作為流動相。在此條件下，樣品主要成分保留時間適當，峰形對稱，各組分之間無干擾。由圖2可知，輔料對鹽酸羥甲唑啉眼的測定無干擾，方法專屬性好。

2.2.2 線性關系考察：以峰面積A為縱坐標，以對照品濃度C（mg·L-1）為橫坐標，繪制標準曲線，得標準曲線方程為依次按“3.1”項下色譜條件進行測定，以峰面積（A）對濃度（C）作線性回歸，A=7.38×103C-5.18×103，r=0.9999。結果表明，鹽酸羥甲唑啉在線性范圍為50～500 mg·L-1濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

圖2 鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠的HPLC圖

2.2.3 精密度試驗：日內（0、1、2、4、6、8 h）考察，RSD為0.62%。連續(xù)3日，每日測定3次，日間RSD為1.3%。結果表明，對照品溶液的日內、日間RSD均小于2%，符合方法學要求。

2.2.4 回收率試驗：在“1.6.1”項色譜條件下進樣，每一濃度平行測定3次，計算回收率，測定結果見表1，結果表明，回收率均在98%～102%，符合方法學要求。

表1 回收率測定結果（n=3）

2.2.5 樣品含量測定：3批樣品的含量測定結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠是一種新型制劑，本研究應用F127和F68制備了具有適宜相變溫度的眼用即型凝膠，溫變范圍短，更加接近于眼內溫度，熱可逆性更好，可在室溫下變?yōu)槿芤?，且具有觸變性，易于使用，可提高鹽酸羥甲唑啉眼用即型凝膠的眼內生物利用度，降低因頻繁使用鹽酸羥甲唑啉的不良反應。F127溶液膠凝溫度具有強烈的濃度依賴性，當F127低于某一濃度時不能形成凝膠；濃度過高時，其膠凝溫度又低于室溫，需冷藏后使用，這就給患者造成用藥不便。F68是一種安全性較高的表面活性劑，具有極強的促黏膜吸收作用[9]，本研究選用0.6%的F68在發(fā)揮調節(jié)膠凝溫度的同時，可以有效促進藥物進入眼部組織。同時本研究建立的藥物含量測定方法，操作簡便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的含量測定。

[1] Xuan B, Chiou GCY. Efficacy of oxymetazoline eye drops in non-infectious conjunctivitis,the most common cause of acute red eyes[J].J Ocul Phamacol Ther,1997,13(4):363-367.

[2] 李素霞,曹德英,王剛.眼用即型凝膠的研究進展[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2008,28(3): 228-229.

[3] 姜芳寧, 劉效栓, 劉光斌.甲磺酸帕珠沙星眼用即型凝膠的制備及質量控制[J].中國實用醫(yī)藥, 2010, 5(11):14-15.

[4] Tirnaksiz F, Robinson JR. Rheological, mucoadhesive and release properties of pluronic F-127 gel and pluronic F-127/polycarbophil mixed gel systems [J]. Pharmazie,2005,60(7):518-523.

[5] Choi HG,Jung JH,Ryu JM,et al. Development of in situgelling and mucoadhesive acetaminophen liquid suppository[J]. Int J Pharm,1998,165(1):33-34.

[6] 吳明釵. 復方羥甲唑啉鼻用凝膠的制備及質量控制[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2007,27(8):1163-1164.

[7] 黃愛芳,林崇良,蔡進章,等. 高效液相色譜法測定酸模各部位大黃素含量[J].溫州醫(yī)學院學報,2012, 42(1): 60-62.

[8 楊藝紅. 高效液相色譜法測定鹽酸羥甲唑啉霧劑的含量[J].海峽藥學,2009,21(9):31-33．

[9] Zhao YZ, Li X, Lu CT, et al. Experiment on the feasibility of using modified gelatin nanoparticles as insulin pulmonary administration system for diabetes therapy[J]. Acta Diabetol,2011,Nov 29.[Epub ahead of print]