張五德 周業(yè)江 王志軍 段勛偉

1)河南汝州市第一人民醫(yī)院 汝州 467500 2)瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 瀘州 64600

Snail在胃癌中的表達及其臨床意義

張五德1)周業(yè)江2)王志軍1)段勛偉1)

1)河南汝州市第一人民醫(yī)院 汝州 467500 2)瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 瀘州 64600

目的研究Snail在胃癌的表達與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法采用免疫組化S－P法分別檢測Snail在胃癌及切緣組織中的表達。結(jié)果Snail高表達于胃癌組織的細胞核，在胃癌及切緣組織中的表達率分別為85.42%、27.08%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Snail高表達與胃癌分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)。結(jié)論胃癌中Snail高表達與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Snail可能是胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的生物學(xué)標(biāo)志之一。

胃癌;Snail;腫瘤轉(zhuǎn)移;E－cadherin

鋅轉(zhuǎn)錄因子Snail在果蠅中首次被發(fā)現(xiàn)，在食管癌、結(jié)腸癌、肝癌及乳腺癌等惡性腫瘤中高表達，研究證實與E－cadherin表達下調(diào)有關(guān)，但在胃癌中的表達及其意義尚不清楚。本文采用免疫組化S－P法檢測Snail在胃癌及其對應(yīng)切緣組織中的表達，探討其表達與胃癌臨床病理因素的關(guān)系，旨在分析其在腫瘤演進中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 48例胃癌標(biāo)本收集自瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2008—2009年住院經(jīng)手術(shù)的標(biāo)本，取胃癌及距腫瘤邊緣＞5cm切緣組織，均經(jīng)常規(guī)病理檢查證實為胃癌。其中，男28例，女20例;年齡35～78歲，平均56.2歲。按照WHO胃癌分類標(biāo)準(zhǔn)，高/中分化腺癌14例，低分化腺癌34例。所有患者術(shù)前均未接受放化療及生物學(xué)治療。根據(jù)浸潤深度分類，T1+T2期的29例，超過漿膜層T3+T4期的19例;有淋巴轉(zhuǎn)移18例，無淋巴轉(zhuǎn)移30例;TNM I期和Ⅱ期共27例，Ⅲ期和Ⅳ期共21例。兔抗人Snail多克隆抗體購自Ab－com公司，免疫組化SP試劑盒及DAB顯色劑購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.2 實驗步驟 所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋、4 μm連續(xù)切片，Snail的免疫組化染色行SP法。操作步驟嚴格按照試劑說明書進行。磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用x2檢驗。

1.4 結(jié)果判定 Snail蛋白陽性表達主要定位于細胞核內(nèi)，部分表達于細胞質(zhì)，并可見間質(zhì)細胞中有部分散在表達，呈棕黃色。在高倍鏡下選取10個高倍視野，按著色細胞占視野總細胞數(shù)的百分比分為四級:無著色，輕度;著色細胞數(shù)1%～30%;中度:31%～60%;重度:＞60%;無著色及輕度為陰性組，中、重度染色為陽性組［1］。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織及切緣組織中Snail的表達 Snail在胃癌中的表達顯著高于切緣組織，陽性率分別為85.4%和27.1%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 胃癌組織及切緣組織中Snail的表達

2.2 Snail蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 Snail蛋白在胃癌中高表達，與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)，而與年齡、性別及 TNM 臨床分期無關(guān)(P＞0.05)。Snail蛋白表達與年齡、性別無關(guān)(P＞0.05)。見表2。

表2 Snail蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

實驗結(jié)果表明，Snail在胃癌組織中高表達，陽性率為85.42%(41/48)，Snail在切緣組織中的陽性表達率為27.08%(15/48)，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Snail在胃癌中高表達，尤以差分化組、浸潤程度深及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為著，并與相應(yīng)對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。提示:Snail參與胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，是腫瘤的不良預(yù)后的指標(biāo)。

近年的研究表明，Snail高表達于胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌等上皮細胞來源腫瘤，并與乳腺癌、胃癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。Snail在胃癌中高表達，而在切緣組織中低表達，提示Snail是參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展的因素。金麗等［2］在研究胃癌中Snail的表達發(fā)現(xiàn)，陽性表達率為89.6%，而正常胃組織為29.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，Snail表達與胃癌的臨床病理性質(zhì)有關(guān)，Snail表達水平與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床TNM分期有關(guān)。體外實驗［3］中將反義Snail轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌細胞HT－29，觀察到HT－29細胞偽足縮短、細胞變圓，呈現(xiàn)間質(zhì)細胞樣表型轉(zhuǎn)變的特征。表明Snail在一定程度上反映癌細胞的侵襲能力，是上皮性腫瘤進展過程中的一個重要調(diào)節(jié)因素。

研究發(fā)現(xiàn)，Snail蛋白高表達的同時，E－cadherin蛋白表達常下調(diào)或丟失。E－cadherin是維持正常上皮細胞特性的蛋白，其下調(diào)正是導(dǎo)致上皮細胞來源惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要因素。在對鱗狀細胞癌的研究發(fā)現(xiàn)，侵襲力強的E－cadherin陰性克隆細胞呈現(xiàn) Snail的高表達，而侵襲力弱的E－cadherin陽性克隆細胞幾乎檢測不到Snail的表達［4］。在腸型胃癌中，E－cadherin表達下調(diào)與SIP1有關(guān)，而在彌漫性胃癌中，E－cadherin表達下調(diào)與 Snail相關(guān)，與 SIP1無關(guān)。提示Snail在胃癌的演進中發(fā)揮促進作用，E－cadherin則扮演抑癌角色。

Snail除了能夠競爭性地與E－cadherin基因啟動子區(qū)的E－box結(jié)合，導(dǎo)致E－cadherin表達下調(diào)促進上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)外，還能與具有促進細胞生長、浸潤和遷移的促肝細胞再生磷酸酶－3(PRL－3)基因的啟動子結(jié)合［5］，而使其轉(zhuǎn)錄上調(diào)，從而發(fā)揮PRL－3促腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。因此，Snail不僅誘導(dǎo)EMT發(fā)生，上調(diào)轉(zhuǎn)移基因PRL－3，調(diào)節(jié)腫瘤細胞與細胞外間質(zhì)的黏附，促進血管生成及轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致腫瘤細胞的局部浸潤和遠處轉(zhuǎn)移。

總之，Snail在胃癌中高表達，通過EMT促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，與胃癌的不良預(yù)后有關(guān)，檢測其在腫瘤中的表達可以作為判斷腫瘤細胞生物學(xué)行為的指標(biāo)。

［1］Jang TJ，Jeon KH，Jung KH.Cyclooxygenase－2 expression is re－lated to the epithelial－to－mesenchymal transition in human colon cancers［J］.Yonsei Med J，2009，50(6):818－824.

［2］金麗，耿敬妹.Snail蛋白表達與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究［J］.腫瘤預(yù)防與治療，2008，21(1):22－24.

［3］Miyoshi A，Kitajima Y，Kido S，et a1.Snail accelerates cancer invasion by upregulating MMP expression and is associated with poor prognosis of hepatocellular carcinoma［J］.Br J Cancer，2005，92(2):252－258.

［4］Thiery JP.Epithelial－mesenchymal transitions in tumour pro－gresssion［J］.Nat Rev Cancer，2002，2(6):442－454.

［5］周軍，李建明，楊發(fā)達，等.人PRL－3基因啟動子的克隆及轉(zhuǎn)錄因子Snail結(jié)合位點的初步鑒定［J］.生物化學(xué)與生物物理進展，2008，35(2):187－194.

R735.2

A

1007－8991(2012)04－0026－02

(收稿 2012－02－01)