周美英，周紅波

(上饒市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 上饒334000)

HBV-LP檢測(cè)對(duì)慢性乙型肝炎病毒復(fù)制的診斷意義

周美英，周紅波

(上饒市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 上饒334000)

乙型肝炎病毒大蛋白；HBV-DNA；HBeAg

我國(guó)的乙型肝炎病毒(HBV)攜帶率為7.18%，在14億人口中有近9300萬(wàn)為HBV攜帶者，現(xiàn)今抗病毒治療以HBeAg陰轉(zhuǎn)和抑制HBV-DNA復(fù)制為主要趨勢(shì)，而HBeAg陰轉(zhuǎn)的病人中仍然存在著病毒的復(fù)制[1]。由HbsAg、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白3種蛋白成分組成的乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)，具有反式激活病毒復(fù)制功能，并能顯著增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的病毒復(fù)制和基因表達(dá)。研究結(jié)果表明，具有復(fù)雜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的前S區(qū)抗原是乙型肝炎病毒大蛋白的特征，應(yīng)用結(jié)構(gòu)生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)，篩選出針對(duì)乙型肝炎病毒大蛋白構(gòu)象型前S抗原的單克隆抗體，在微孔條上預(yù)包被此單克隆抗體，配以酶標(biāo)記抗體(HBsAb-HRP)及TMB顯色劑等其它試劑，采用雙抗體夾心法原理定性檢測(cè)人血清中乙型肝炎病毒大蛋白[2]。

我們聯(lián)合檢測(cè)HBV-LP、HBeAg和HBV-DNA中發(fā)現(xiàn)三者間陽(yáng)性表達(dá)率存在著相關(guān)性，現(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,從而探討HBV-LP抗原在乙肝病毒檢測(cè)中的臨床價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 236例標(biāo)本均為上饒市二院門診及住院的抗病毒治療慢性乙肝患者，其中男193例，女43例，年齡19～57歲，平均45歲，診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)與中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制訂《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》。清晨空腹靜脈抽血5ml，待血液自然凝固后2500r/min離心15min分離血清。

1.2 試劑與方法 (1)HBeAg血清標(biāo)志物采用ELISA酶聯(lián)免疫法，試劑由山東3V生物限公司提供;(2)HBV-LP血清標(biāo)志物采用ELISA酶聯(lián)免疫法，試劑由北京貝爾生物工程有限公司提供;(3)HBV-DNA采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定，試劑由廣州達(dá)安基因技術(shù)有限公司提供，HBVDNA定量>1000 copies/ml判斷為HBV DNA陽(yáng)性。均嚴(yán)格按試劑說明書操作。

1.3 主要儀器 深圳雷杜醫(yī)學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的RT-2010型多功能全自動(dòng)酶標(biāo)儀。RT-2010型全自動(dòng)洗板機(jī)。美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)中國(guó)公司ABI－7300熒光定量PCR檢測(cè)儀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 236例慢性乙型肝炎患者HBeAg、HBV-DNA、HBV-LP陽(yáng)性率比較 236例標(biāo)本中:HBeAg陽(yáng)性98例，陽(yáng)性率為41.5%；HBV-DNA陽(yáng)性177例，陽(yáng)性率75.0%；HBV-LP陽(yáng)性204例，陽(yáng)性率為86.4%，三者之間陽(yáng)性率比較有顯著性差異 (χ2＝108.88，P<0.05)，HBV-LP＞ HBV-DNA＞ HBeAg，見表1。

2.2 177例HBV-DNA陽(yáng)性患者中HBV-LP陽(yáng)性率為92.1%，HBeAg陽(yáng)性率為55.4%兩者比較有顯著 性差異 (χ2=58.07,P＜0.05)，HBV-LP 陽(yáng)性率＞HBeAg陽(yáng)性率，見表2。

表1 236例慢性乙型肝炎患者HBeAg、HBV-DNA、HBV-LP陽(yáng)性率比較

表2 177例HBV-DNA陽(yáng)性患者中HBV-LP與HBeAg陽(yáng)性率比較

2.3 236 例標(biāo)本中 HBeAg不同模式 HBV-LP、HBV-DNA陽(yáng)性率的比較 在98例HBeAg陽(yáng)性標(biāo)本中HBV-DNA陽(yáng)性94例，陽(yáng)性率95.9%；HBVLP陽(yáng)性92例，陽(yáng)性率94.8%兩者比較無(wú)顯著性差異(χ2=2.11,P＞0.05)；在 138 例 HBeAg 陰性標(biāo)本中HBV-DNA陽(yáng)性83例，陽(yáng)性率59.7%，HBV-LP陽(yáng)性112例，陽(yáng)性率80.5%，兩者比較有顯著性差異(χ2=14.99，P＜0.05)，HBV-LP 陽(yáng)性率＞HBV-DNA 陽(yáng)性率，見表3。

表3 236例乙型肝炎患者HBeAg不同模式中HBV-DNA HBV-LP陽(yáng)性率比較

3 討論

乙肝病毒大蛋白的定性檢測(cè)作為乙型肝炎病毒e抗原指標(biāo)的補(bǔ)充，用于乙型肝炎病毒感染的輔助診斷，HBV-LP陽(yáng)性表明患者血液內(nèi)仍存在HBV Dane顆粒和管狀顆粒，HBV-LP與HBV的侵入、組裝和復(fù)制有著重要聯(lián)系，能反映患者機(jī)體內(nèi)HBV的復(fù)制情況。HBV-LP是HBV Dane顆粒和亞病毒顆粒的主要包膜成分，與HBV的復(fù)制程度密切相關(guān)，在感染早期，它與細(xì)胞受體結(jié)合并介導(dǎo)病毒的細(xì)胞內(nèi)侵入；在感染晚期，是病毒組裝和分泌的關(guān)鍵；即使在HBV-DNA低水平時(shí)，HBVLP仍能在血清中存在，因此檢測(cè)HBV-LP對(duì)臨床上判定HBV復(fù)制具有一定的意義[3]。

本次研究顯示在236例慢性乙型肝炎中HBeAg陽(yáng)性率為41.5%，HBV-DNA陽(yáng)性率75.0%，HBV-LP陽(yáng)性率為86.4%，三者之間陽(yáng)性率比較有顯著性差異 (P<0.05)，HBV-LP的陽(yáng)性率高于HBV-DNA和HBeAg。這可以解釋部分患者經(jīng)過抗病毒治療后HBeAg轉(zhuǎn)陰HBV-DNA復(fù)制受抑制的情況下并不能抑制已經(jīng)形成的病毒表達(dá)蛋白，富含在蛋白的亞病毒顆粒在一段時(shí)間內(nèi)仍然存在，如果這時(shí)停止抗病毒治療即出現(xiàn)HBV-DNA的反彈。

在177例HBV-DNA陽(yáng)性的慢性乙肝患者中，HBV-LP陽(yáng)性率為 92.1%，HBeAg陽(yáng)性率為55.4%，兩者陽(yáng)性率比較有顯著性差異(P<0.05)，這可以解釋部分慢性乙型肝炎患者在長(zhǎng)期的治療及機(jī)體免疫力的作用下HBV基因前C區(qū)或CP區(qū)發(fā)生變異導(dǎo)致HBeAg陰性，HBV仍在繼續(xù)復(fù)制。

在97例HBeAg陽(yáng)性的慢性乙肝患者中HBV-LP陽(yáng)性率為 94.8%，HBV-DNA陽(yáng)性率為95.9%，兩者比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，這可以解釋在病毒復(fù)制活躍時(shí)，三者均能很好地反映病毒的復(fù)制情況。這與說明書中的靈敏性相符：HBVLP在HBeAg陽(yáng)性患者中，HBV-LP與HBV-DNA陽(yáng)性符合率為97.18%接近。

在139例HBeAg陰性的慢性乙肝患者中HBV-LP陽(yáng)性率為 80.5%，HBV-DNA陽(yáng)性率為59.7%，兩者有顯著性差異(P<0.05)，這可以解釋部分慢性乙肝患者HBeAg與HBV-DNA均陰性，即臨床上的慢性活動(dòng)性“小三陽(yáng)”肝炎患者，亦稱這為難治型“小三陽(yáng)”體內(nèi)病毒仍在復(fù)制。

在使用抗核苷類藥物治療慢性乙型肝炎時(shí)血清HBV-DNA拷貝數(shù)的下降是評(píng)估其療效的主要指標(biāo)，但臨床應(yīng)用表明，血液中HBV-DNA拷貝數(shù)下降和轉(zhuǎn)陰并不能作為乙肝抗病毒效果監(jiān)測(cè)和停藥終點(diǎn)的判定指標(biāo)，抗病毒治療后相當(dāng)比例患者病情反彈，而乙肝病毒大蛋白由于其特殊的PreS結(jié)構(gòu)與病毒復(fù)制相關(guān)，因此研究人員認(rèn)為治療效果監(jiān)測(cè)上單獨(dú)采用HBV-DNA指標(biāo)是不夠的，應(yīng)該增加對(duì)乙肝病毒復(fù)制具有反式激活作用、對(duì)肝細(xì)胞具有直接毒性的乙肝病毒大蛋白的檢測(cè)[4]。HBV-LP陽(yáng)性率大于HBV-DNA陽(yáng)性率，顯示部分慢性乙肝患者肝內(nèi)病毒繼續(xù)復(fù)制和或抗病毒治療不徹底，故HBV-LP的檢測(cè)可為慢性乙肝患者確立抗病毒治療停藥時(shí)間提供參考，在預(yù)防肝硬化、肝癌等方面也有一定的意義[5]。HBV-LP的檢測(cè)方法方便快捷，檢測(cè)條件易于控制，值得在臨床實(shí)驗(yàn)室推廣使用。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)與中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制訂.中國(guó)慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)。

[2]彭建明，李金明.病毒樣顆粒在免疫測(cè)定中的研究中進(jìn)展[M].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志.2005,28(2):214-216.

[3]毛遠(yuǎn)麗，李伯安，馬洪濱，等.乙肝患者外膜蛋白血清學(xué)檢測(cè)對(duì)于判定HBV-DNA復(fù)制的意義 [J].中華檢驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2006,20(3):276-278.

[4]游選旺,黃 健,唐畢畢.乙型肝炎病毒大蛋白臨床檢測(cè)意義初探[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009，27(2):275-276.

[5]游選旺.乙肝病毒大蛋白用于抗病毒治療效果監(jiān)測(cè)的臨床意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(2):165-166.

R512.6+2,R446.62

B

1674-1129(2012)05-0512-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.042