莫鳳明,伍德榮,何玉強

(河池市人民醫(yī)院,廣西 河池547000)

全自動電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應用價值

莫鳳明,伍德榮,何玉強

(河池市人民醫(yī)院,廣西 河池547000)

目的探討全自動電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應用價值。方法對2080份疑似地貧患者標本應用法國公司HYDRASYS全自動電泳分析系統(tǒng)進行血紅蛋白電泳，檢測血紅蛋白(Hb)各組成分的含量，同時采用HbF堿變性試驗對同一標本進行HbF含量測定，比較兩種方法的檢測結(jié)果。結(jié)果在送檢2080例中篩出α地中海貧血表型陽性316例，陽性率15.2%；β地中海貧血表型陽性616例，陽性率29.6%。其它血紅蛋白病6例，陽性率0.3%，經(jīng)基因分析確診α地中海貧血291例，準確度92.3%，β地中海貧血591例，準確度95.9%。結(jié)論全自動血紅蛋白電泳分析系統(tǒng)電泳區(qū)帶清晰,掃描定量準確,可以定量檢測HbA,HbF,HbA2的含量，將地中海貧血進行初步分類為α地中海貧血或β地中海貧血，準確度高，有效地篩查出高?；颊?，為進一步進行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎。

全自動電泳分析系統(tǒng)；血紅蛋白電泳；地中海貧血；篩查

地中海貧血廣泛分布在我國南方地區(qū)，是廣東、廣西及海南等地發(fā)病率最高、被世界衛(wèi)生組織列為危害人類健康的6種常見病之一[1]，目前地貧尚無確切有效的治療方法，重型α地貧多為死胎且孕婦易并發(fā)妊娠高血壓綜合征，重型β地中海貧血則需要終身依賴輸血，中間型α、β地中海貧血患者多無勞動能力或勞動能力低下[2]。因此要廣泛開展地貧篩查，特別是孕婦，提高預防意識，以便減少地貧兒的出生。為探討全自動電泳分析系統(tǒng)在地中海貧血篩查中的應用價值，現(xiàn)將測定分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料 2010年6月至2011年5月來就診的疑似地貧患者 (紅細胞脆性<70%，MCV<80fL或家庭中有地貧攜帶者)共2080例，其中包括新生兒患者92例。

1.2 儀器與試劑 儀器為法國Sebia公司HYDRASYS全自動蛋白電泳系統(tǒng)及掃描儀，試劑用該公司生產(chǎn)的配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 血紅蛋白電泳分析 抽取疑似患者靜脈血約2ml,真空采血管肝素鈉抗凝，制備血紅蛋白液，嚴格按照儀器和試劑盒說明書進行點樣、電泳、染色、脫色、烘干，再通過自動掃描儀系統(tǒng)掃描分析HB各組分含量，打印出圖譜。

1.3.2 參考區(qū)間 正常參考值成人2.0%≤HbA2≤3.5%并且不出現(xiàn)異常血紅蛋白帶。 如HbA2≤2.0%，或出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbH、HbBart’s)判斷為α地中海貧血表型陽性；如HbA2>3.5%或出現(xiàn)異常血紅蛋白帶(HbF>2.0%)判斷為β地中海貧血表型陽性。

1.3.3 堿變性試驗測定HbF含量 同時對每一分標本進行堿變性試驗。

1.3.4 對于電泳分析表型陽性者重抽血進行地貧基因分析診斷。

2 結(jié)果

2.1 血紅蛋白電泳法2080例中，檢出HbA2<2.0%212例,檢出HbA2>3.5%420例，出現(xiàn)HbH帶44例，檢出HbBart’s帶60例，同時出現(xiàn)HbH帶和HbBart’s帶 36 例，檢出 HbF>2.0%196 例，HbG2例，HbE4例。按參考區(qū)間標準可判斷出：α地中海貧血表型陽性316例，陽性率為15.2%(316/2080)，β地中海貧血表型陽性616例，陽性率29.6%(616/2080)，見表 1。

表1 2080例地中海貧血血紅蛋白電泳分析結(jié)果

2.2 HbF堿變性試驗結(jié)果 2080份標本中有203例HbF>2.0%。

2.3 全自動電泳法測HbF量和HbF堿變性試驗對照結(jié)果 全自動電泳法有196例HbF>2.0%，HbF堿變性試驗有203例HbF>2.0%，符合率達96.6%。 電泳中HbA2區(qū)帶清晰集中，如HbF增高大于2.0%時可在HbA2后出現(xiàn)HbF帶，如HbF小于2.0%時在HbA2后不出現(xiàn)HbF帶，無法定量。取10例代表性結(jié)果進行比較，見表2?？梢奌bF掃描與堿變性試驗結(jié)果基本相符。

2.4 地貧基因分析結(jié)果 α地中海貧血表型陽性316例和β地中海貧血表型陽性616例重新抽血進行地貧基因分析診斷，檢出地貧者888例，其中α-地中海貧血291例，包括標準型157例、靜止型72例、中間型(HbH 病)44例，HbBart’s胎兒水腫綜合征 2 例，HbBart’s+HbG 2 例，HbBart’s+HbE 4例；β地中海貧血591例，αβ復合型地中海貧血6例。

2.5 紅蛋白電泳法和地貧基因分析法比較 以基因分析法為標準，血紅蛋白電泳法檢測α地中海貧血準確度為92.3%，β地中海貧血準確度為95.9%。

表2 10例 全自動血紅蛋白電泳與HbF堿變性試驗結(jié)果比較

3 討論

血紅蛋白是人體紅細胞的主要蛋白質(zhì)，由血紅素和珠蛋白組成。珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)異常和某些肽鏈合成不足常導致血紅蛋白疾病，前者稱異常血紅蛋白病，后者為地中海貧血。地中海貧血分為α地中海貧血和β地中海貧血,在α地中海貧血中，Bart’s水腫胎兒會早產(chǎn)夭折，標準型和靜止型患兒在出生3～6個月后HbBart’s區(qū)帶會消失，實際上在出生半年后用電泳法只有檢測出HbH病。HbH病表現(xiàn)為血紅蛋白電泳中出現(xiàn)HbH區(qū)帶或HbH和HbBart’s區(qū)帶，有些合并有HbCS區(qū)帶。β地中海貧主要表現(xiàn)為HbF、HbA2含量增高[3]。因血紅蛋白疾病可以沒有任何臨床癥狀，所以主要依賴于實驗室檢查來診斷。血紅蛋白的分離和鑒定方法很多，國內(nèi)外普遍采用平均紅細胞參數(shù)(MCV、MCH、MCHC)、紅細胞脆性等方法進行地貧篩查，但其敏感性和特異性較低，而且部分地貧患者(特別是α地中海貧血標準型)MCV和紅細胞脆性可以正常，易漏診和誤診，漏診率達13.23%[4]。目前，聚合酶鏈反應(PCR)等分子生物學技術(shù)主要用于明確診斷α、β地中海貧血，是地中海貧血檢測的金標準，但是分子生物學技術(shù)實驗條件要求高，方法煩瑣，而且檢查費用較高，所以不能被廣泛應用，特別是基層醫(yī)療單位無法開展。全自動電泳法其方法簡便，電泳瓊脂糖膠片易保存，區(qū)帶顏色不容易脫，區(qū)帶清晰，能夠定量檢測出HbA、HbF、HbA2含量，將地中海貧血進行初步分類，同時還可以篩查出各種異常血紅蛋白，如HbH、HbE、HbG等，可見血紅蛋白電泳法是研究和分析異常血紅蛋白的有效方法，是診斷血紅蛋白分子病不可缺少的手段[5]。本研究分析2080例疑似地中海貧血者的血紅蛋白電泳結(jié)果，以基因分析法為診斷地中海貧血的金標準，全自動電泳分析統(tǒng)系篩查的α地中海貧血診斷準確性為92.3%，而篩查β地中海貧血準確度為95.9%，與文獻報道基本相同[6]。這些結(jié)果表明，血紅蛋白電泳法篩查地貧準確度高，能有效地篩查出高?；颊撸貏e是HbH病和β地中海貧效果最理想，HbH病與基因方法完全符合，β地中海貧準確度達95.9%。同時本次研究還檢出HbG 2例檢出HbE 4例，所以紅蛋白電泳法還可以篩查出異常血紅蛋白病。

血紅蛋白電泳法因支持物的不同而分為濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、毛細管電泳、高效液相色譜法等。濾紙電泳應用最早，但由于其區(qū)帶“拖尾”現(xiàn)象較重，吸附作用和電滲作用較強，而且電泳時間長、速度慢、分辨率較低，已經(jīng)很少使用。醋酸纖維素薄膜電泳中由于HbA、HbF等電點接近，通常不能分開，而且影響因素較多，要完成好的電泳圖譜仍有一定的難度。毛細管電泳法及高效液相色譜法是近年來發(fā)展的分離方法，還不能廣泛和深入應用。本研究使用的全自動瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)的瓊脂糖是由瓊脂分離純化而得，凝膠孔徑較大，對一般蛋白質(zhì)不起分子篩作用，最大優(yōu)點是幾乎不吸附蛋白質(zhì)，因此電泳斑點幾乎無“拖尾”現(xiàn)象，其區(qū)帶掃描分辨率高，區(qū)帶整齊，重復性好，這與相關(guān)報道一致[7]。同時對HbF的分辨率也大有提高，高于一般的醋酸纖維薄膜電泳，對測HbF含量的準確度高達96.6%，可以基本代替HbF堿變性實驗，使Hb分析更簡便、快捷[8]。在HbA2升高的病例中，其HbF堿變性實驗測定的HbF含量稍高于(2.0%

全自動瓊脂糖凝膠電泳分析統(tǒng)系操作簡便快速，電泳、染色、脫色、烘干在1h內(nèi)即可完成，對HbA2的分辨清晰，區(qū)帶集中。而且其從點樣后到打印出檢驗結(jié)果都是用計算機控制程序完成，代替了以往的手工操作，也避免了人工操作的某些技術(shù)及客觀條件的誤差。

綜上所述，應用全自動瓊脂糖凝膠電泳分析統(tǒng)系進行電泳分析，區(qū)帶清晰,掃描定量準確,可以定量檢測HbA,HbF,HbA2的含量，將地中海貧血進行初步分類為α地中海貧血或β地中海貧血，準確度高，有效地篩查出高?；颊?，為進一步進行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎。但是血紅蛋白電泳是一個介于篩查和確診的試驗，有些情況下還應結(jié)合其他篩查方法及臨床表現(xiàn)才能作出診斷，有條件的單位應開展基因診斷技術(shù)，以減少地貧漏檢的可能。

[1]梁華銘，黎金美.1826例育齡期婦女地中海貧血篩查結(jié)果分析[J].中國實用醫(yī)藥，2010，5(17)：52-53.

[2]李榮敏，羅建文，韋平宣，等.河池市孕婦產(chǎn)前地中海貧血篩查及基因診斷[J].廣西醫(yī)學，2009，31(11)：1603-1604.

[3]蒙天生,莫鴻健.全自動血紅蛋白電泳在診斷地中海貧血中的應用[J].實用醫(yī)學雜志，2009，25(10)：1694-1965.

[4]朱學海,魏代奎.地中海貧血的基因診斷分析[J].中國實用醫(yī)藥，2008，3(13)：126-127.

[5]黃 凌.917例血紅蛋白電泳檢查結(jié)果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2009,27(3):226-227.

[6]周秀琴，童順桃，譚衛(wèi)荷，等.全自動電泳分析系統(tǒng)篩查地中海貧血的臨床應用價值探討[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2009,6(16)：1352-1353.

[7]林慶芳，邱 威.血紅蛋白電泳方法的研究進展[J].醫(yī)學綜述，2010，16(6)：922-924.

[8]陳鳳平，李菊香，蘇運欽，等.應用全自動電泳系統(tǒng)篩查地中海貧血和異常血紅蛋白病[J].暨南大學學報，2010，31(6)：603-604.

R556.6+1,R446.11+2

B

1674-1129(2012)05-0472-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.020