徐如梅，沈 菁，陳 雯，黃 毅

(福建省立醫(yī)院檢驗科，福建 福州350001)

CMIA法與TPPA法對梅毒螺旋體抗體檢測的相關(guān)性研究

徐如梅，沈 菁，陳 雯，黃 毅

(福建省立醫(yī)院檢驗科，福建 福州350001)

目的探討化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體測定值(S/CO)大于1時TPPA檢測陽性率的變化趨勢，為臨床對梅毒的診治提供更加準(zhǔn)確的實驗室依據(jù)。方法應(yīng)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法(CMIA)，梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)，分別檢測患者血清標(biāo)本中梅毒螺旋體抗體。結(jié)果200份化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)小于1的樣本經(jīng)TPPA檢測無一例陽性；504份化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)為1-4.99的樣本經(jīng)TPPA檢測346例為陽性；237份化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)為5～9.99的樣本經(jīng)TPPA檢測231例為陽性；437份化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)為10～19.99的樣本經(jīng)TPPA檢測433例為陽性；838份化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)≥20的樣本經(jīng)TPPA檢測全部為陽性。結(jié)論化學(xué)發(fā)光檢測梅毒具有高度的敏感性，自動化程度高，適合大批量標(biāo)本的常規(guī)篩查，但對化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)在1～19.99區(qū)間的樣本應(yīng)采用TPPA聯(lián)合檢測，防止誤診。

梅毒螺旋體抗體；化學(xué)發(fā)光測定法；梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗

梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性傳染病，絕大多數(shù)是通過性途徑傳播。隨著現(xiàn)代社會的開放,梅毒的發(fā)病率呈明顯上升的趨勢，而臨床癥狀和體征也多種多樣，對梅毒的診斷必須根據(jù)病史臨床癥狀和實驗室檢測結(jié)果進行綜合分析。為了給臨床診治梅毒提供更加準(zhǔn)確的實驗室數(shù)據(jù)，本文對福建省立醫(yī)院2010年8月至2012年7月化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體測定值 (S/CO)大于1的2016份陽性血清標(biāo)本進行了TPPA法檢測，同時對200份化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)小于1的陰性血清標(biāo)本進行了TPPA法檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2216份血清標(biāo)本均來自2010年8月至2012年7月我院住院病人、門診病人及產(chǎn)前檢查的孕婦經(jīng)化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體測定值(S/CO)大于1的為2016例，測定值(S/CO)小于1的為200例，其中男1285例，女931例，年齡0～85歲。

1.2 儀器與試劑 化學(xué)發(fā)光法使用美國雅培ARCHITECT-i2000 system。試劑為雅培公司配套ARCHITECT梅毒TP試劑盒。梅毒螺旋體明膠試驗(TPPA)采用日本富士瑞必歐株式會社試劑盒。

1.3 檢測方法 化學(xué)發(fā)光法：ARCHITECT梅毒螺旋體抗體檢測采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法，采用推薦的臨界值(S/CO)小于1.0時為陰性，樣本(S/CO)大于或等于1.0時為陽性。梅毒螺旋體明膠凝集試驗為手工操作法，以微量反應(yīng)板U型上聚集成散在樣判定為陽性。以上方法均嚴格按試劑盒說明書操作，試劑在有效期內(nèi)使用。儀器和試劑質(zhì)控均在控下進行病人的檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件分析處理、計數(shù)。定性資料應(yīng)用χ2趨勢檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

將2216份血清標(biāo)本按化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體檢測值的不同予以分組，不同組別TPPA試驗檢測梅毒螺旋體抗體的陽性率變化見表1。

表1 CMIA法與TPPA法檢測結(jié)果比較

3 討論

梅毒螺旋體存在于患者的血液或腦脊液中，在人工培養(yǎng)基上不生長繁殖。一旦侵入人體后，其血清中可產(chǎn)生非特異反應(yīng)素抗體和梅毒螺旋體抗原的特異性抗體。目前，梅毒檢測最常用的血清學(xué)方法有RPR、TPPA均為手工操作方法，結(jié)果判斷難以自動化，不易量化，不適于大批量的篩查工作。而化學(xué)發(fā)光法是一種較新的全自動檢測方法，具有高度的靈敏度和特異性[1]。其原理：將重組TP抗原(TpN15、TpN17和TpN47)包被微粒子與樣本中存在的抗-TP抗體結(jié)合洗滌后再加入發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記結(jié)合物，再一輪洗滌后，在反應(yīng)混合物中加入預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液，然后測量產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)信號，以相對發(fā)光單位(relative light units，RLUs)表示，樣本中存在的TP抗體量與RLUs成正比，將反應(yīng)中產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號與先前梅毒校準(zhǔn)確定的Cutoff信號進行比較。如果樣本中的化學(xué)發(fā)光信號大于或等于Cutoff信號，則該樣本中可視為TP陽性。

本文對我院2010年8月至2012年7月兩年中化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體測定值(S/CO)大于1的2016份陽性血清和測定值(S/CO)小于1的200份陰性血清，同時進行了TPPA試驗，結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光法S/CO小于1時TPPA無一例陽性，兩種方法的符合率為100%(見表1)；而化學(xué)發(fā)光法S/CO大于1時TPPA的陽性率91.7%(1848/2016)，兩種方法之間存在一定的差異?，F(xiàn)結(jié)合臨床資料對兩種方法檢測結(jié)果不相符的168例患者進行分析，其中，2例經(jīng)臨床確診為梅毒患者。其余166例患者經(jīng)臨床確診均非梅毒患者，其中惡性腫瘤48例，糖尿病36例，自身免疫性疾病25例，妊娠12例，心血管疾病11例，肝硬化6例，感染5例，眼科疾病7例，骨折3例，其它疾病13例，提示化學(xué)發(fā)光法檢測梅毒特異性抗體存在一定的假陽性；進一步分析臨床資料發(fā)現(xiàn)這部分患者年齡大于50歲的占61%，以老年人居多，這和以往報道的老年人梅毒血清學(xué)實驗假陽性率偏高[2，3]符合。大量研究表明老年人是惡性腫瘤、糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的高發(fā)人群，而這些疾病可使患者體內(nèi)含有某些治療性抗體、嗜異性抗體、自身糖尿病抗體、類風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等[4]，是否這些特殊成分在梅毒螺旋體抗體的化學(xué)發(fā)光法檢測中會產(chǎn)生干擾作用，影響檢測，導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，還有待進一步深入探討。分析化學(xué)發(fā)光法不同測定值區(qū)間TPPA陽性率的變化趨勢，結(jié)果顯示隨著化學(xué)發(fā)光法測定值的升高，兩種方法檢測結(jié)果的一致性也隨之提高，至≥20區(qū)間的兩種方法的符合率達100%；大部分化學(xué)發(fā)光法假陽性的情況發(fā)生在其弱陽性的測定值區(qū)間，1～4.99區(qū)間TPPA陰性率達31.35%(158/504)，而這158例患者經(jīng)臨床資料分析證實均為非梅毒患者。雖然，相比化學(xué)發(fā)光法TPPA具有更高的特異性，這與該法在工藝上進行了改良，將純化的致病性梅毒的精致菌株成分包被在人工載體明膠粒子上、從而減少了生物學(xué)假陽性的發(fā)生有關(guān)[5]，但本研究2例化學(xué)發(fā)光法陽性的臨床確診梅毒患者經(jīng)TPPA檢測結(jié)果為陰性，表明該法存在假陰性。由于抗原、抗體反應(yīng)血清學(xué)試驗方法的檢測靈敏度和特異性具有一定的局限性[6-7],因此，任何方法都不是絕對的。雖然化學(xué)發(fā)光法假陽性率高于TPPA，但化學(xué)發(fā)光法具有自動化程度高、操作方便快速、利于規(guī)范化操作的優(yōu)點，適用于臨床的大批量常規(guī)篩檢，不易漏診。一般來說，篩檢試驗允許有假陽性，但應(yīng)盡可能沒有假陰性結(jié)果[8]。為此本人建議，在化學(xué)發(fā)光法測定值(S/CO)位于1～19.99時應(yīng)與TPPA聯(lián)合檢測，尤其是測定值(S/CO)位于1～4.99時更要采取多種方法聯(lián)合檢測，這可為梅毒的診治提供更加準(zhǔn)確可靠的實驗室檢測數(shù)據(jù)。

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Correlation between CMIA and TPPA methods in detecting treponema antibody

XU Rumei,SHEN Qing,CHEN Wen,et al.Department of Clinical Laboratory,Fujian Provincial Hospital,Fuzhou 350001,China

ObjectiveTo investigate the positive rates of TPPA method when S/CO value of chemiluminescence>1 in detection of syphilis,and provide a more accurate laboratory evidence for the clinical diagnosis and treatment of syphilis.MethodsTreponema antibody in sera of patients was detected by CMIA and TPPA methods respectively.ResultsTreponema antibody in sera of 200 patients with S/CO value<1 of chemiluminescence was all negative when detected by TPPA.Positive rates of serum treponema antibody in patients with S/CO value of chemiluminescence ranged from 1 to 4.99,5 to 9.99,10 to 19.99 and≥20 were 68.65%(346/504),97.47%(231/237),99.08%(433/437)and 100%(838/838)detected by TPPA respectively.ConclusionChemiluminescence is a highly sensitive and automated method in detection of syphilis,and suitable for clinical routine screening of a large number of specimens.Combination of chemiluminescence with TPPA is recommended when S/CO value of chemiluminescence is between 1 and 19.99 in detection of syphilis in order to reduce the false positive possibility in detection of syphilis and provide the more accurate laboratory evidence for the clinical diagnosis and treatment of syphilis.

Syphilis;Chemiluminescence detection;Treponema pallidum gelatin particle agglutination test

R579.1,R446.62

A

1674-1129(2012)05-0441-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.008

福建省自然科學(xué)基金面上項目(編號2010501132)

徐如梅，女，1964年12月出生，畢業(yè)于福建醫(yī)科大學(xué)，主管技師，免疫專業(yè)。