張玉蓮 黃君勤 池王胄 宋庭 馬亦蓉

（上海新先鋒藥業(yè)有限公司 上海 201203）

兩性霉素B為多烯類抗真菌藥物，臨床上用于治療深部真菌引起的內(nèi)臟或全身感染。隨著醫(yī)療水平的提高，器官移植和腫瘤切除等重大手術(shù)越來(lái)越普遍，真菌深部感染的發(fā)生率也隨之上升。上海新先鋒藥業(yè)有限公司是專業(yè)生產(chǎn)兩性霉素B原料藥及其制劑注射用兩性霉素B和注射用兩性霉素B脂質(zhì)體的企業(yè)，其中注射用兩性霉素B脂質(zhì)體是國(guó)內(nèi)獨(dú)家生產(chǎn)品種。為進(jìn)一步提升產(chǎn)品質(zhì)量，本研究利用不同極性的樹(shù)脂[1]對(duì)兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)的選擇吸附性對(duì)兩性霉素B進(jìn)行純化，有效降低了兩性霉素B原料藥中的相關(guān)物質(zhì)含量，同時(shí)提高了產(chǎn)品收率。

1 材料和儀器

各型號(hào)大孔樹(shù)脂[2]；兩性霉素B原料藥（上海新先鋒藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；600 mm×50 mm層析柱；高效液相色譜儀（Agilent 1100）；YZ 156恒流泵；磁力攪拌器；恒溫水浴鍋；N, N-二甲基甲酰胺、乙醇、甲醇、丙酮等（均為工業(yè)級(jí)試劑）。

2 實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

2.1 單個(gè)樹(shù)脂篩選

根據(jù)兩性霉素B的性質(zhì)及生產(chǎn)需要進(jìn)行用于雜質(zhì)吸附的單個(gè)樹(shù)脂型號(hào)篩選研究：先對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道雜質(zhì)吸附效果好的樹(shù)脂進(jìn)行靜態(tài)篩選，然后用通用方法對(duì)初步篩選出的20余種樹(shù)脂進(jìn)行預(yù)處理并用常用樹(shù)脂柱參數(shù)進(jìn)行過(guò)柱實(shí)驗(yàn)（表1），確定了對(duì)兩性霉素B原料藥中不同雜質(zhì)吸附效果好的幾種樹(shù)脂型號(hào)。

表1 不同型號(hào)樹(shù)脂對(duì)雜質(zhì)的靜態(tài)吸附

從表1可以看出，經(jīng)過(guò)M-1或M-2樹(shù)脂吸附后的兩性霉素B原料藥中的總雜質(zhì)含量均降低了約2%，最大單一雜質(zhì)含量也明顯下降。因此，用大孔樹(shù)脂吸附兩性霉素B原料藥中的雜質(zhì)可行且效果顯著。

2.2 最佳柱徑比及樹(shù)脂倍數(shù)確定

2.2.1 柱徑比篩選

選擇柱徑比分別為500 mm：20 mm、500 mm：30 mm、500 mm：40 mm、500 mm：50 mm、500 mm：60 mm和500 mm：70 mm的M-2樹(shù)脂柱，在同等樹(shù)脂倍數(shù)、上樣溫度、pH和過(guò)濾速率條件下動(dòng)態(tài)過(guò)柱[3]，考察經(jīng)樹(shù)脂吸附后的兩性霉素B原料藥中的總雜質(zhì)含量下降的百分?jǐn)?shù)，最終擇優(yōu)選擇的最佳柱徑比為500 mm：60 mm（表2）。

表2 柱徑比對(duì)總雜質(zhì)含量下降的影響

2.2.2 樹(shù)脂倍數(shù)篩選

同等條件下，分別單獨(dú)在吸附效果較好的M-2樹(shù)脂柱中加入10、20、30和40倍產(chǎn)品量的大孔樹(shù)脂，根據(jù)雜質(zhì)下降的實(shí)驗(yàn)結(jié)果選定吸附效果最佳的樹(shù)脂倍數(shù)，然后用更小的等分法進(jìn)行同等條件下的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表3 不同量M-2樹(shù)脂對(duì)雜質(zhì)吸附的影響（初篩）

表4 不同量樹(shù)脂對(duì)雜質(zhì)吸附的影響（復(fù)篩）

從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，30倍產(chǎn)品量的樹(shù)脂為最佳雜質(zhì)吸附樹(shù)脂倍數(shù)。繼續(xù)用30倍產(chǎn)品量的樹(shù)脂進(jìn)行4組重現(xiàn)性雜質(zhì)吸附實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

通過(guò)數(shù)據(jù)對(duì)比可以看出，30倍產(chǎn)品量的最佳樹(shù)脂倍數(shù)和500 mm：60 mm的最佳柱徑比的確定能進(jìn)一步優(yōu)化樹(shù)脂對(duì)兩性霉素B原料藥中的雜質(zhì)吸附效果。

2.3 混合樹(shù)脂組合及其比例的篩選

各種實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明，樹(shù)脂對(duì)兩性雜質(zhì)的吸附效果明顯，但不同型號(hào)的樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)種類不盡相同。因此，利用不同型號(hào)樹(shù)脂對(duì)兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)的選擇吸附性，用蠕動(dòng)泵控制樹(shù)脂柱中溶液的添加速率，在30倍產(chǎn)品量的混合樹(shù)脂和500 mm：60 mm的柱徑比條件下進(jìn)行混合樹(shù)脂對(duì)兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)的吸附實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)混合樹(shù)脂M-1+M-2、M-3+M-4、M-5+M-6的吸附效果較好（表6）。

表6 混合樹(shù)脂對(duì)雜質(zhì)吸附的影響

從表6可以看出，M-1+M-2樹(shù)脂組合的吸附效果最佳，故在30倍產(chǎn)品量的混合樹(shù)脂和500 mm：60 mm的柱徑比條件下進(jìn)一步研究M-1和M-2兩種樹(shù)脂在以不同比例混合時(shí)對(duì)兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)的吸附效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表7）表明，在各吸附條件基本恒定的情況下，當(dāng)樹(shù)脂混合比例為M-1：M-2為4：6時(shí)，其吸附兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)的效果較優(yōu)。

表7 樹(shù)脂混合比例對(duì)雜質(zhì)吸附的影響（初篩）

繼續(xù)在M-1∶M-2為4∶6的比例周?chē)M(jìn)行細(xì)等分比例實(shí)驗(yàn)，研究吸附兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)效果最優(yōu)的M-1和M-2兩種樹(shù)脂的混合比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表8）表明，在M-1：M-2為3.6：6.4時(shí)，混合樹(shù)脂對(duì)兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)的吸附效果[4]最好，總雜質(zhì)含量下降3.30%、最大單一雜質(zhì)含量下降0.82%，較其它比例的混合樹(shù)脂的雜質(zhì)吸附效果都更顯著。

表8 樹(shù)脂混合比例對(duì)雜質(zhì)吸附的影響（復(fù)篩）

3 結(jié)語(yǔ)

本研究依據(jù)不同極性的大孔樹(shù)脂的選擇吸附性，探討了其在兩性霉素B原料藥純化工藝中的應(yīng)用效果。經(jīng)深入研究不同極性樹(shù)脂對(duì)兩性霉素B原料藥中雜質(zhì)[5]的特異性吸附作用，將不同型號(hào)的樹(shù)脂按最佳比例混合，以便有針對(duì)性、有選擇性地吸附兩性霉素B原料藥中的雜質(zhì)。本研究方法可顯著降低兩性霉素B原料藥中的相關(guān)物質(zhì)、進(jìn)一步提高兩性霉素B原料藥的質(zhì)量，同時(shí)也能避免常規(guī)大孔樹(shù)脂應(yīng)用中存在的吸附周期長(zhǎng)、中間過(guò)程控制麻煩、洗脫難和樹(shù)脂重利用率低等問(wèn)題。

[1] 張英, 李衛(wèi)民, 賴愛(ài)芬. 大孔樹(shù)脂型號(hào)與規(guī)格的規(guī)范化探討[J]. 高分子, 2009, 11(11): 44-48.

[2] 李善吉, 伍勝君. 大孔樹(shù)脂的應(yīng)用研究概況[J]. 廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào), 2005, 4(2): 11-13.

[3] 王一敏, 任曉蕾. 大孔樹(shù)脂的應(yīng)用研究[J]. 中醫(yī)藥信息, 2008, 25(4): 26-28.

[4] 王海燕, 李曉露, 王健, 等. 大孔樹(shù)脂法分離純化那他霉素的工藝研究[J]. 中國(guó)抗生素雜志, 2005, 35(12): 194-201.

[5] 王雷, 田青平, 謝茵. 兩性霉素B平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 38(12): 1082-1084.