王元元，黃云英，杜 娟，沈 麗，張德芹，王雪妮

蜂蜜、蜂膠對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠創(chuàng)面愈合的影響*

王元元，黃云英，杜 娟，沈 麗，張德芹，王雪妮

[目的]研究蜂蜜、蜂膠外用對(duì)深Ⅱ度燙傷模型大鼠創(chuàng)面愈合的影響。[方法]采用YLS-5Q臺(tái)式超級(jí)控溫燙傷儀制備大鼠深Ⅱ度燙傷模型。觀察蜂蜜、蜂膠外用對(duì)燙傷創(chuàng)面愈合的影響，觀察創(chuàng)面皮膚組織學(xué)變化，檢測(cè)大鼠血清中羥脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。[結(jié)果]蜂蜜、蜂膠外用能顯著提高燙傷大鼠創(chuàng)面愈合率（P<0.01）；能顯著提高大鼠血清中SOD、HYP含量（P<0.01或P<0.05）。[結(jié)論]蜂蜜、蜂膠外用具有明顯的促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合的作用。

蜂蜜；蜂膠；外用；燙傷；創(chuàng)面愈合

蜂蜜為蜜蜂科昆蟲中華蜜蜂或意大利蜂所釀的蜜。春至秋季采收。蜂蜜味甘，性平，歸肺、脾、大腸經(jīng)。蜂膠為蜜蜂科昆蟲意大利蜂（Apis mellifera Linnaeus.）的干燥分泌物。多于夏季從蜂箱中收集，除去雜質(zhì)。蜂膠味苦、辛，性寒，歸脾、胃經(jīng)。蜂蜜、蜂膠均為既可內(nèi)服、又可外用的常用中藥。歷版《中華人民共和國(guó)藥典》（簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）對(duì)蜂蜜內(nèi)服功能及主治均有詳細(xì)的記載，但多缺少其在外用功能及主治方面的記載。蜂膠功能主治的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)首次收載于2005年版《中國(guó)藥典》，但未明確指出蜂膠的外用功能主治標(biāo)準(zhǔn)。2010年版《中國(guó)藥典》對(duì)蜂蜜“外用生肌斂瘡”、“外治瘡瘍不斂，水火燙傷”和蜂膠“外用解毒消腫，收斂生肌”、“外治皮膚皸裂，燒燙傷”的記載，填補(bǔ)了蜂蜜、蜂膠長(zhǎng)期以來外用功能的闕如[1]。

蜂蜜、蜂膠臨床運(yùn)用具有良好促皮膚燙傷愈合的作用，但對(duì)其藥理作用研究國(guó)內(nèi)外尚少見系統(tǒng)報(bào)道，其作用靶點(diǎn)及機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。為進(jìn)一步闡明其促愈機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用大鼠深Ⅱ度燙傷模型觀察蜂蜜、蜂膠外用對(duì)皮膚燙傷創(chuàng)面愈合的影響，為《中國(guó)藥典》完善蜂蜜、蜂膠外用“解毒消腫、生肌斂瘡”功效提供藥效學(xué)參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物 蜂蜜藥材購于安徽新興中藥材飲片有限公司（批號(hào)：20100127），由天津中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室李天祥老師鑒定。蜂膠藥材購于安徽新興中藥材飲片有限公司（批號(hào)：20100127），由天津中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室李天祥老師鑒定。由于蜂膠很難溶于水，所以研究多采用蜂膠乳化劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，本實(shí)驗(yàn)給藥前用吐溫80將蜂膠配制成70 g/kg的藥液。京萬紅軟膏為達(dá)仁堂藥業(yè)有限公司產(chǎn)品（批號(hào)：211738）。

1.2 動(dòng)物 健康Wistar大鼠80只，雄性，體質(zhì)量（200±10）g。由天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供。飼養(yǎng)于18～22℃清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（津）2009-0001。

1.3 試劑 吐溫80[天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠（批號(hào)：20080902）]；水合氯醛[成都市科龍化工試劑廠（批號(hào)：20100125）]；羥脯氨酸（HYP）測(cè)定試劑盒[美國(guó)R&D公司產(chǎn)品,天津博奧信德科技有限公司提供（分裝批號(hào)：201010）]；超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒[美國(guó)R&D公司產(chǎn)品,天津博奧信德科技有限公司提供（分裝批號(hào)：201010）]。

1.4 儀器 TD-10001電子天平（天津市天馬儀器廠）；YLS-5Q臺(tái)式超級(jí)控溫燙傷儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；Infinite M200微量多功能讀板機(jī)（瑞士TECAN公司）；BMJ-1生物組織包埋機(jī)（天津航空機(jī)電公司）；RM2135切片機(jī)（德國(guó)Leica公司；WH-71電子恒溫干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司）；BX41研究級(jí)正置顯微鏡及成像系統(tǒng)（日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 模型制備 Wistar大鼠80只，雄性，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為8組，每組10只。分別為模型對(duì)照組，京萬紅燙傷膏組，蜂蜜高、中、低劑量治療組和蜂膠高、中、低劑量治療組。造模前剃除大鼠背毛，面積約為25 cm2。造模當(dāng)天以3.5%水合氯醛（10 mL/kg）腹腔注射麻醉，在大鼠背部脫毛處用YLS-5Q臺(tái)式超級(jí)控溫燙傷儀進(jìn)行燙傷，設(shè)置燙傷溫度為90℃，時(shí)間為15秒，壓力為1 000 g。所有大鼠均采取同樣的燙傷條件，制作深Ⅱ度燙傷模型[2]。

2.2 給藥 造模后第2天除模型對(duì)照組外，京萬紅燙傷膏組外涂京萬紅燙傷膏1 g/只，蜂蜜高、中、低劑量組外涂蜂蜜生藥10.8、5.4、2.7 g/kg；蜂膠高、中、低劑量組外涂蜂膠生藥0.20、0.10、0.05 g/kg。每日給藥1次，連續(xù)給藥21 d。給藥治療期間大鼠分籠飼養(yǎng)，每日均飼以普通飼料，自由進(jìn)食、飲水。

2.3 檢測(cè)指標(biāo) 每組于給藥第3、7、14、21 d拍照，所拍照片用photoshop軟件處理，計(jì)算創(chuàng)面愈合率[3]，計(jì)算公式為：創(chuàng)面愈合率=（原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積）/原始創(chuàng)面面積×100%。給藥21 d后，大鼠麻醉，腹主動(dòng)脈取血，離心（3 000 r/min，20 min），分離血清，用酶聯(lián)免疫法測(cè)定大鼠血清中HYP、SOD的含量；取大鼠背部創(chuàng)面皮膚，用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，蘇木-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察標(biāo)本組織學(xué)的變化。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)創(chuàng)面愈合率的影響 與模型對(duì)照組相比，給藥第7天后，蜂蜜中、低劑量組和蜂膠高劑量組大鼠創(chuàng)面愈合率明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。給藥第14天后，蜂蜜低劑量組大鼠創(chuàng)面愈合率明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。給藥第21天后，京萬紅燙傷膏組、蜂蜜高、中、低劑量組和蜂膠低劑量組大鼠創(chuàng)面愈合率明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。見表1。

表1 蜂蜜、蜂膠對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠創(chuàng)面愈合率的影響（±s，n=8）

表1 蜂蜜、蜂膠對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠創(chuàng)面愈合率的影響（±s，n=8）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

創(chuàng)面愈合率（%）3 d 7 d 14 d 21 d模型對(duì)照組 - 3.53±4.38 03.17±4.84 23.46± 8.73 68.59±10.57京萬紅燙傷膏組 1 g/只 0.57±0.92 01.55±4.88 18.64± 8.14 78.72± 9.56*蜂蜜高劑量組 10.80 2.87±4.22 08.48±6.11 27.09±13.32 82.69± 7.65**蜂蜜中劑量組 5.40 1.02±1.69 11.34±6.50**33.67±14.47 82.53±11.78**蜂蜜低劑量組 2.70 1.11±1.44 13.42±5.82**40.59±19.42**88.56± 8.12**蜂膠高劑量組 0.20 0.75±2.34 11.65±6.82**22.89±12.25 74.09±11.50蜂膠中劑量組 0.10 0.07±0.22 05.14±5.02 13.96± 6.99 73.99± 9.63蜂膠低劑量組 0.05 0.48±1.45 07.27±7.29 23.33±14.06 81.77±11.08*組別 劑量（g/kg）

3.2 對(duì)血清中HYP、SOD含量的影響 與模型對(duì)照組相比，蜂蜜中、低劑量組和蜂膠高、中、低劑量組HYP含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；蜂蜜低劑量組和蜂膠中、低劑量組SOD含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表2。

表2 蜂蜜、蜂膠對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠血清中HYP、SOD 含量的影響（±s，n=8）

表2 蜂蜜、蜂膠對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠血清中HYP、SOD 含量的影響（±s，n=8）

注：與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01。

組別 劑量（g/kg） HYP（μg/L） SOD（U/L）模型對(duì)照組 - 2.59±0.33 121.34±18.07京萬紅燙傷膏組 1 g/只 2.64±0.31 126.83±21.74蜂蜜高劑量組 10.80 2.77±0.30 129.70± 7.76蜂蜜中劑量組 5.40 3.06±0.35* 122.54±20.11蜂蜜低劑量組 2.70 3.14±0.46** 161.19±19.16**蜂膠高劑量組 0.20 3.21±0.52** 135.95±10.38蜂膠中劑量組 0.10 3.20±0.42** 156.82±25.59**蜂膠低劑量組 0.05 3.21±0.17** 175.50±25.37**

3.3 對(duì)創(chuàng)面組織學(xué)變化的影響 鏡檢可見,模型對(duì)照組皮膚表皮壞死，真皮膠原纖維束排列紊亂且有斷裂現(xiàn)象，腺體消失，內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見毛細(xì)血管。各給藥組與模型對(duì)照組比較可見，表皮和真皮結(jié)構(gòu)均有明顯改善，表皮損傷得到修復(fù)，膠原纖維束排列整齊，真皮毛囊增多，腺體分布漸趨正常，炎癥細(xì)胞對(duì)皮膚的浸潤(rùn)程度減弱，血管較明顯。

4 討論

在創(chuàng)傷愈合過程中，膠原蛋白的合成和分泌是傷口愈合的決定性因素。而HYP在膠原蛋白中含量最多，是膠原蛋白特有的氨基酸之一，是人體皮膚形成的關(guān)鍵物質(zhì)。SOD廣泛存在于需氧代謝的細(xì)胞中，其活力與皮膚形成有密切關(guān)系。SOD能特異性清除超氧陰離子，保護(hù)組織免受氧自由基的損害[4]。

本實(shí)驗(yàn)通過采用對(duì)深Ⅱ度燙傷模型大鼠外涂蜂蜜、蜂膠的方法，觀察其外用對(duì)大鼠燙傷創(chuàng)面愈合作用的影響。通過檢測(cè)大鼠血清中HYP、SOD的含量，發(fā)現(xiàn)蜂蜜、蜂膠可通過增加燙傷大鼠血清中HYP的含量促進(jìn)血清中膠原的合成，從而加速燙傷創(chuàng)面的愈合；通過增加燙傷大鼠血清中SOD的含量增強(qiáng)機(jī)體對(duì)自由基的清除能力，從而避免自由基對(duì)機(jī)體組織細(xì)胞的損傷。

隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)蜂蜜、蜂膠研究的不斷深入，其外用價(jià)值也將會(huì)越來越受到重視。目前蜂蜜、蜂膠作為外用解毒消腫、收斂生肌良藥已廣泛應(yīng)用于臨床各科疾病。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：337.

[2] 王雪妮,張德芹,黃云英,等.大鼠燙傷模型制備的實(shí)驗(yàn)研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，30（4）：218-219．

[3]黃國(guó)鈞,黃勤挽.醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型——制作與應(yīng)用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:722-723.

[4] Wlaschek M,Scharffetter-Kochanek K.Oxidative stress in chronic venou leg gulcers[J].Wound Repair Regen,2005,13(5):452-461.

Effects of honey and propolis on wound healing in rats with second-degree scald

WANG Yuan-yuan,HUANG Yun-ying,DU Juan,SHEN Li,ZHANG De-qin,WANG Xue-ni
（The TCM Research Institute,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the effects of honey and propolis on wound healing in rats with seconddegree scald.[Methods]Second-degree scald on the back of rat was induced by scald-reproducing instrument with super-temperature control(YLS-5Q).The rates of wound healing and histological changes were observed.The level of hydroxyproline(HYP)and superoxide dismutase(SOD)in serum were determined by ELISA.[Results]The rates of wound healing in treatment group were increased compared with the control group(P<0.01).The levels of HYP and SOD in treatment group were higher than that in the control group (P<0.01 or P<0.05).[Conclusion]Honey and propolis has a promoting effect on burn wound healing by its external application.

honey;propolis;external application;scald;wound healing

R285.5

A

1673－9043（2012）03－0154-03

國(guó)家科技支撐計(jì)劃基金項(xiàng)目（2008BA153B09）。

300193 天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院

王元元（1986-），女，碩士研究生，主要研究方向?yàn)橹兴幓纠碚摷芭R床應(yīng)用。

*通訊作者：張德芹。

2012-06-24）

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