李曉慧，張淑榮，薛承巖△，杜新生，楊林瀛，張永強(qiáng)

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德 067000;2.隆化縣醫(yī)院)

肺癌是常見(jiàn)惡性腫瘤之一，轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性標(biāo)志和主要特征之一，也是導(dǎo)致治療失敗和患者死亡的主要原因。及時(shí)發(fā)現(xiàn)和治療肺癌轉(zhuǎn)移是改善患者預(yù)后的有效途徑。至今，對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移(尤其是早期轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移等)的診斷仍無(wú)令人滿意的方法。本研究提示，檢測(cè)癌胚抗原(CEA)mRNA、細(xì)胞角蛋白19(CK19)mRNA和端粒酶對(duì)判定肺癌血液轉(zhuǎn)移有較大幫助，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 103例肺癌患者(肺癌組），男57例、女46例，年齡34-77歲;其中，腺癌24例、鱗癌24例、腺鱗癌19例、大細(xì)胞肺癌18例、小細(xì)胞肺癌18例，Ⅰ期18例、Ⅱ期19例、Ⅲ期34例、Ⅳ期32例。同期非癌性肺部疾病患者(非腫瘤組)57例，男31例、女26例，年齡33-78歲，包括肺間質(zhì)肺炎11例、支氣管擴(kuò)張11例、肺結(jié)核12例、肺囊腫12例、炎性假瘤11例。所有患者均為我院確診病例，均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診。另選擇36例健康志愿者(健康組)作為對(duì)照，男20例、女16例，年齡33-78歲。

1.2 標(biāo)本采集 用含檸檬酸鈉抗凝劑的真空管采集靜脈血，充分混勻，4℃離心分離提取有核細(xì)胞，用預(yù)冷的無(wú)RNA酶生理鹽水充分洗滌有核細(xì)胞，-70℃密封保存，用于檢測(cè)CEA mRNA、CK19 mRNA和端粒酶。

1.3 檢測(cè)方法 ①應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-套式-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-NP-PCR）檢測(cè)CEA mRNA和CK19 mRNA，引物參照文獻(xiàn)[1-2]由上海細(xì)胞生物研究所合成，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和核酸標(biāo)準(zhǔn)物(Marker)為德國(guó)Promega公司產(chǎn)品，出現(xiàn)188bp(CEA mRNA)和460bp(CK19 mRNA)核酸電泳帶為陽(yáng)性結(jié)果。②應(yīng)用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增-雜交-酶聯(lián)免疫分析技術(shù)(TRAP-Hyb-ELISA）檢測(cè)端粒酶活性，試劑盒購(gòu)自華美生物工程公司，檢測(cè)孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值＞2.1為端粒酶陽(yáng)性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，行配對(duì)卡方檢驗(yàn)和四格表卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 三組外周血CEA mRNA、CK19 mRNA、端粒酶活性檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。肺癌組患者CEA mRNA、CK19 mRNA和端粒酶的陽(yáng)性率均明顯高于非腫瘤組和健康組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）。非腫瘤組:CEA mRNA陽(yáng)性結(jié)果分別為2例肺結(jié)核、1例炎性假瘤，CK19 mRNA的陽(yáng)性結(jié)果為2例肺結(jié)核、2例炎性假瘤、2例肺囊腫和1例間質(zhì)肺炎，3例端粒酶陽(yáng)性結(jié)果分別為肺結(jié)核、炎性假瘤、肺囊腫各1例;1例肺結(jié)核患者三個(gè)指標(biāo)均為陽(yáng)性，1例炎性假瘤患者CEA mRNA＋端粒酶雙陽(yáng)性。健康組:2例CK19 mRNA陽(yáng)性者，未見(jiàn)有意義的檢查結(jié)果和既往發(fā)現(xiàn)。合并非腫瘤組與健康組，合并組CEA mRNA、CK19 mRNA、端粒酶的“假陽(yáng)性率”分別為3.2%(3/93)、9.7%(9/93)、3.2%(3/93)。

表1 外周血三種標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果[例(%)]

2.2 不同類型肺癌患者外周血CEA mRNA、CK19 mRNA、端粒酶活性檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表2。不同類型肺癌組間比較:小細(xì)胞肺癌患者CEA mRNA陽(yáng)性率顯著低于其它類型肺癌(P＜0.05);不同類型肺癌CK19 mRNA、端粒酶陽(yáng)性率比較無(wú)顯著差異(P＞0.05）。

表2 不同類型肺癌患者外周血三種標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果[例(%)]

2.3 不同分期肺癌患者外周血CEA mRNA、CK19 mRNA、端粒酶活性檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表3。不同分期肺癌組間比較:Ⅰ期肺癌患者CEA mRNA、CK19 mRNA、端粒酶陽(yáng)性率均明顯低于Ⅲ期和Ⅳ期(P＜0.01），Ⅱ期肺癌患者CEA mRNA陽(yáng)性率明顯低于Ⅳ期(P＜0.05）。

表3 不同分期肺癌患者外周血三種標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果[例(%)]

2.4 各標(biāo)志物判斷肺癌血液轉(zhuǎn)移的價(jià)值 三種標(biāo)志物單獨(dú)應(yīng)用及聯(lián)檢(平行試驗(yàn))判斷肺癌血液轉(zhuǎn)移的特異度和敏感度結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各標(biāo)志物判斷肺癌血液轉(zhuǎn)移的特異度和敏感度

3 討論

外周血中出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞是腫瘤血行播散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)指標(biāo)之一，由于外周血中腫瘤細(xì)胞數(shù)量非常少因此常規(guī)方法難以發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)血液中某些特異的腫瘤標(biāo)志物可確定腫瘤細(xì)胞的存在，如端粒酶[3-4]、CK19 mRNA[2，4-5]、CEA mRNA[1，4，6]等。本組結(jié)果顯示，肺癌患者外周血液中CEA mRNA、CK19 mRNA和端粒酶的陽(yáng)性率明顯高于良性肺病患者及健康人，不同類型的肺癌和肺癌的不同臨床分期都能夠在患者外周血液中檢測(cè)到CEA mRNA、CK19 mRNA和端粒酶的陽(yáng)性表達(dá)，進(jìn)一步證明此三種標(biāo)志物具有很好的腫瘤標(biāo)志作用。本組結(jié)果也顯示，隨著肺癌由Ⅰ期到Ⅳ期的轉(zhuǎn)變，外周血三個(gè)標(biāo)志物的檢測(cè)陽(yáng)性率均逐漸升高，Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者三個(gè)標(biāo)志物的陽(yáng)性率均明顯高于Ⅰ期。提示肺癌患者病變?cè)缙?Ⅰ、Ⅱ期)外周血中就有存在腫瘤細(xì)胞的可能，并且隨著臨床分期的進(jìn)展腫瘤細(xì)胞發(fā)生血行轉(zhuǎn)移的可能性更大。以上結(jié)果表明，CEA mRNA、CK19 mRNA和端粒酶可以用作監(jiān)測(cè)肺癌細(xì)胞血液轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，其中CEA mRNA和端粒酶的特異度和敏感度均優(yōu)于CK19 mRNA;三種標(biāo)志物聯(lián)檢(平行試驗(yàn))雖然可提高敏感度，但特異度有所降低。需要注意的是，腫瘤細(xì)胞入血可能是間斷性的，單次檢測(cè)結(jié)果有一定的局限性，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)可能會(huì)提高陽(yáng)性檢出率[6]。

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