楊婷 余斌 宋欣 劉麗萍

[摘要] 目的：研究阿魏酸鈉膠囊和阿魏酸鈉片在健康志愿受試者中的藥動(dòng)學(xué)和人體生物等效性。方法：20名健康志愿者隨機(jī)交叉單次口服受試制劑阿魏酸鈉膠囊和參比制劑阿魏酸鈉片，均100 mg，采用HPLC-UV檢測(cè)方法，測(cè)定血漿中阿魏酸鈉濃度，采用Das2.1程序計(jì)算其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，評(píng)價(jià)兩種制劑的人體生物等效性。結(jié)果：受試制劑及參比制劑主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為：Cmax（1.021±0.286） μg/ml和（1.066±0.397） μg/ml，tmax（0.388±0.078） h和（0.371±0.083） h，t1/2（0.887±0.431） h和（0.824±0.404） h，AUC（0~t）（0.613±0.172） μg·h/ml和（0.614±0.235） μg·h/ml。結(jié)論：受試制劑阿魏酸鈉膠囊和參比制劑阿魏酸鈉片具有生物等效性。

[關(guān)鍵詞] 阿魏酸鈉；生物等效性；高效液相-紫外檢測(cè)法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R969.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1673-7210（2011）11（c）-037-03

Bioequivalence of Sodium Ferulate Capsules and Tablets in healthy volunteers

YANG Ting1, YU Bin1, SONG Xin2, LIU Liping1

1.Department of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Anhui Province, Hefei 230601, China; 2.College of Pharmacy, Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Anhui Province, Hefei 230038, China

[Abstract] Objective: To study the pharmacokinetic characteristics of Sodium Ferulate Capsules and Tablets in healthy volunteers and to evaluate the bioequivalence of them. Methods: In a randomized, crossover and self-control study, 20 healthy volunteers were orally administrated Sodium Ferulate Capsules and Tablets (100 mg respectively). The plasma concentrations were determined by the HPLC-UV. Pharmacokinetic parmeters were calculated and the bioequivalences were evaluated by DAS2.1 software. Results: The main pharmacokinetic parameters of Sodium Ferulate were as follows: Cmax (1.021±0.286) μg/ml and (1.066±0.397) μg/ml, tmax (0.388±0.078) h and (0.371±0.083) h, t1/2 (0.887±0.431) h and (0.824±0.404) h, AUC(0-t) (0.613±0.172) μg·h/ml and (0.614±0.235) μg·h/ml. Conclusion: The test and reference sodium ferulate are bioequivalent.

[Key words] Sodium Ferulate; Bioequivalence; HPLC-UV

阿魏酸（Ferulic Acid）的化學(xué)名稱(chēng)為4-羥基-3-甲氧基-肉桂酸，是桂皮酸的衍生物之一，最初在植物的種子和葉子中發(fā)現(xiàn)，是一種廣泛存在于植物中的酚酸，在細(xì)胞壁中與多糖和蛋白質(zhì)結(jié)合成為細(xì)胞壁的骨架。它在阿魏、當(dāng)歸、川芎仁等中藥材中的含量較高，是這些中藥的有效成分之一。阿魏酸鈉（Sodium Ferulate）是阿魏酸的鈉鹽，具有抑制血小板聚集、松弛血管平滑肌、清除氧自由基、提高膜穩(wěn)定性、保護(hù)血管內(nèi)皮[1]、增強(qiáng)免疫功能等功效，并具有一定的鎮(zhèn)痛、解痙作用[2]。臨床上主要用于冠心病[3]、腦血管病[4]、腎小球疾病[5]、肺動(dòng)脈高壓、糖尿病性血管病變[6]、脈管炎等血管性病癥的輔助治療，亦可用于偏頭痛、血管性頭痛的治療[7]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯坎煌瑥S家的阿魏酸鈉膠囊和阿魏酸鈉片的相對(duì)生物利用度，評(píng)價(jià)兩者的生物等效性，為臨床安全合理用藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津高效液相系統(tǒng)：LC－10ATvp 型溶劑輸送泵，SPD－10Avp 紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器，LC-Solution Light色譜中文數(shù)據(jù)系統(tǒng)；Welchorm-C18，4.6 mm×150 mm，5 μm色譜柱（上海月旭）及配套保護(hù)柱；TDL80-2B型離心機(jī)（上海安亭）；快速混勻器；AL104/01型梅特勒電子分析天平。

1.2 藥物與試劑

受試制劑：阿魏酸鈉膠囊（開(kāi)封制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20100302，規(guī)格：50 mg/粒）；參比制劑：阿魏酸鈉片（成都亨達(dá)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：091201，規(guī)格：50 mg/片）、阿魏酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110773-200611）、內(nèi)標(biāo)替硝唑?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100336-200703，含量：99.8%）。

試劑：乙腈（美國(guó)TEDIA試劑有限公司，色譜純）、冰醋酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）、鹽酸（宿州化學(xué)試劑廠，分析純）、乙酸乙酯（汕頭市西隴化工廠有限公司，分析純）、純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

采用兩周期雙交叉的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。將20名健康志愿者隨機(jī)分為2組，每組10名，服藥前1天晚餐后禁食不禁水，分別于次日早晨空腹服用阿魏酸鈉膠囊和阿魏酸鈉片（均100 mg），用200 ml溫開(kāi)水送服。服藥后2 h可飲水，4 h統(tǒng)一進(jìn)餐。每例受試者均于服藥前、服藥后5、10、15、20、25、30、40、50、60、90、120、180、240 min各采血4 ml，共計(jì)14針。血標(biāo)本以肝素抗凝，室溫靜置2 h，4 000 r/min離心10 min，取上清血漿置-20℃冰箱保存?zhèn)錅y(cè)。1周后進(jìn)行交叉服藥，再次按照上述方法留取標(biāo)本。

2.1 色譜條件

色譜柱為Welchorm-C18 4.6 mm×150 mm，5 μm，配套保護(hù)柱，流動(dòng)相為乙腈∶水∶冰醋酸=22∶78∶1，流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm，靈敏度為0.005AUFS，進(jìn)樣量為20 μl，柱溫為30℃。

2.2 血漿樣品處理方法

精密量取血漿200 μl加入內(nèi)標(biāo)替硝唑（15.57 μg/ml）20 μl，加入50 μl（0.6 mol/L）HCl溶液，混勻，加入萃取劑乙酸乙酯1 600 μl渦旋震蕩2 min，4 000 r/min離心10 min后取上清液，40℃氮?dú)獯蹈伞?00 μl流動(dòng)相復(fù)溶，震蕩1 min后取20 μl進(jìn)樣分析，以內(nèi)標(biāo)法峰面積比定量。

2.3 方法專(zhuān)屬性考察

精密量取空白血漿200 μl，按“2.2”項(xiàng)下自“加入50 μl（0.6 mol/L）HCl溶液”依法操作得空白樣品色譜圖1（A）；將一定濃度的阿魏酸對(duì)照溶液（1.0 μg/ml）加入空白血漿，按“2.2”項(xiàng)下自“加入50 μl（0.6 mol/L）HCl溶液”依法操作得含阿魏酸血漿樣本色譜圖1（B）；將一定濃度的阿魏酸對(duì)照溶液（1.0 μg/ml）加入空白血漿，按“2.2”項(xiàng)下依法操作得含阿魏酸及內(nèi)標(biāo)的血漿樣本色譜圖1（C）；取受試者給藥后采集的血漿樣品200 μl，按“2.2”項(xiàng)下依法操作，得色譜圖1（D）。檢測(cè)器波長(zhǎng)均為320 nm。見(jiàn)圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限

在空白血漿中加入不同濃度阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μl，配制成相當(dāng)于阿魏酸血漿濃度為0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、1.20、1.80 μg/ml的樣品，按“2.2”項(xiàng)下依法操作，以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)，并用加權(quán)（1/χ2）最小二乘法進(jìn)行線性回歸運(yùn)算，求得的直線方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果得線性方程為Y=1.139X-0.001，表明阿魏酸在0.05～1.80 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低可定量為0.05 μg/ml（S/N>10）。

2.5 提取回收率試驗(yàn)

將不同濃度的阿魏酸的對(duì)照溶液20 μl加入180 μl空白血漿中，配制成高、中、低三個(gè)濃度（1.60、1.00、0.06 μg/ml）血漿樣品各3份，按“2.2”項(xiàng)下操作，得到阿魏酸峰面積值A(chǔ)1；另取空白管，配置相應(yīng)濃度的阿魏酸對(duì)照溶液，不做萃取直接檢測(cè)，得到阿魏酸峰面積值A(chǔ)2。按公式提取回收率（%）=A1/A2×100%來(lái)計(jì)算阿魏酸的提取回收率。結(jié)果阿魏酸在上述3個(gè)濃度水平的提取回收率分別為91.33%、85.74%、85.97%。

2.6 精密度試驗(yàn)

取空白血漿加入不同濃度阿魏酸對(duì)照溶液，配制阿魏酸高、中、低3個(gè)不同血漿濃度（1.60、1.00和0.06 μg/ml）的質(zhì)量控制（QC）樣品，連續(xù)測(cè)定3 d，結(jié)果表明日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）<15%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取空白血漿加入不同濃度阿魏酸對(duì)照溶液，配制阿魏酸高、中、低3個(gè)不同血漿濃度（1.60、1.00、0.06 μg/ml）的樣品，分別考察血漿樣品在室溫放置0 h和8 h、在-20℃冰箱中反復(fù)凍融3次、冷凍條件下放置10 d和15 d的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示，按“3.2”項(xiàng)下操作室溫放置0、8 h，-20℃冰箱中反復(fù)凍融3次和長(zhǎng)期冷凍RSD<15%，穩(wěn)定性較好。

2.8 血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

20名受試者口服阿魏酸鈉膠囊和片劑后的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。

2.9 生物等效性評(píng)價(jià)

將ln（AUC（0~4））、ln（AUC（0~∞））、ln（Cmax）經(jīng)方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩種制劑在吸收程度和達(dá)峰濃度上等效。tmax經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)（配對(duì)Wilcoxon法），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明兩制劑在達(dá)峰時(shí)間上等效。單次口服受試制劑的相對(duì)生物利用度為（104.4±19.7）％。見(jiàn)表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC-UV測(cè)定人血漿中阿魏酸鈉含量的方法。筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[8-11]對(duì)血漿樣品處理方法進(jìn)行篩選，選用0.6 mol/L HCl酸化血漿樣品，使其易與蛋白分離。為了提高檢測(cè)靈敏度，筆者先后考察了采用乙醚和乙酸乙酯兩種有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)酸化后的樣品經(jīng)乙酸乙酯提取，提取回收率不僅高而且內(nèi)源性物質(zhì)干擾少，為阿魏酸鈉體內(nèi)藥物濃度分析和藥物動(dòng)力學(xué)研究提供了依據(jù)。

20名健康志愿受試者分別口服100 mg阿魏酸鈉受試制劑與參比制劑后，經(jīng)檢測(cè)得到血漿中阿魏酸鈉主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)并進(jìn)行方差分析，進(jìn)一步采用雙向單側(cè)t檢驗(yàn)和[1-2α]置信區(qū)間法進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)，結(jié)果均在等效范圍內(nèi)，證明兩種制劑為生物等效制劑。

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（收稿日期：2011-08-08）

[作者簡(jiǎn)介] 楊婷，女，碩士研究生，安徽合肥人，藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。