王娟,陳培云,王婷

（河北大學(xué)，河北保定 071000）

銅（III）配合物-羅丹明6G體系流動注射化學(xué)發(fā)光法測定頭孢米諾鈉

王娟,陳培云,王婷

（河北大學(xué)，河北保定 071000）

在酸性條件下，頭孢米諾鈉對銅（III）配合物-硫酸-羅丹明6G化學(xué)發(fā)光體系有強(qiáng)烈的增敏作用，據(jù)此建立了流動注射化學(xué)發(fā)光法定量分析頭孢米諾鈉方法。頭孢米諾鈉濃度在2.0×10-7～6.0×10-6g／mL范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 69，檢出限為1.4×10-7g／mL。對2.0×10-7g／mL頭孢米諾鈉水溶液進(jìn)行11次平行分析，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.69%。利用該方法對雞血樣品和頭孢米諾鈉針劑中頭孢米諾鈉的含量進(jìn)行測定，加標(biāo)回收率為90.2%～102.1%。

頭孢米諾鈉;化學(xué)發(fā)光;流動注射

頭孢米諾鈉（CMNX）商品名為美士靈，其作用性質(zhì)與第3代頭孢菌素相近，主要用于呼吸道感染、泌尿道感染等。目前測定CMNX的方法有高效液相色譜法［1-5］、毛細(xì)管電泳法［6］、電化學(xué)法［7］等，但這些檢測方法復(fù)雜、實(shí)驗(yàn)周期較長?；瘜W(xué)發(fā)光法具有儀器簡單、所用試劑價(jià)格低廉、分析速度快、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，用化學(xué)發(fā)光法測定CMNX尚未見報(bào)道。筆者利用CMNX對Cu（III）和羅丹明6G化學(xué)發(fā)光的增敏作用，建立了CMNX的流動注射化學(xué)發(fā)光分析法，并成功應(yīng)用于針劑和雞血中CMNX的測定。利用該方法通過測定人體血液及尿液中頭孢米諾鈉含量，間接地監(jiān)測觀察有機(jī)體的健康狀況,適合于在醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等行業(yè)的普及應(yīng)用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

流動注射化學(xué)發(fā)光分析儀：IFFM-E型，西安瑞邁電子科技有限公司；

雙光束紫外-可見分光光度計(jì)：TU-1900型，北京普析通用儀器有限公司；

Cu（III）絡(luò)合物的制備：采用文獻(xiàn)［8］報(bào)道的氧化銅（Ⅱ）的方法制得，將 NaIO4（5.74 g），CuSO4·5H2O （3.12 g），Na2S2O8（2.00 g），NaOH（18.00 g）與200 mL去離子水混合，加熱回流40 min，冷卻，得到 Cu（III）絡(luò)合物，在 0～4℃儲存，使用時(shí)用水稀至所需濃度;

在Cu（III）絡(luò)合物水溶液的紫外可見光譜圖中，吸收峰在（407±0.4）nm，濃度由在405 nm處的摩爾吸光系數(shù) 1.0×104L／（mol·cm）［9］計(jì)算。

頭孢米諾鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：5.00×10-4g／m L，準(zhǔn)確稱取0.025 g頭孢米諾鈉對照品，用水溶解后轉(zhuǎn)移至50 mL棕色容量瓶中，用水稀至標(biāo)線。于4℃冰箱中保存，使用時(shí)用水稀至所需濃度;

實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將各輸液管插入相應(yīng)溶液，啟動儀器，待管路中溶液流動平穩(wěn)、基線穩(wěn)定后，將硫酸和羅丹明6G混合溶液注入到［Cu（HIO6）2］5-及頭孢米諾鈉樣品溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液）載流中，并進(jìn)入流通池，記錄增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光信號強(qiáng)度值，以實(shí)現(xiàn)對峰高定量。各管路流速均為3 mL／min；內(nèi)徑為0.8 mm聚四氟乙烯管連接流動系統(tǒng)中各種部件；采樣管長為12 cm；閥池距為12 cm；進(jìn)樣量為120 μL時(shí)，具有最大的信噪比。

2 結(jié)果與討論

2.1 化學(xué)發(fā)光動力學(xué)曲線

用靜態(tài)注射法記錄了CMNX（5.00×10-5g／mL）-Cu（III）（1.13×10-5mol／L）-H2SO4（0.02 mol／L）-羅丹明6G（8×10-6mol／L）體系的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)動力學(xué)曲線。結(jié)果表明，此體系發(fā)光是快速發(fā)光過程，從開始發(fā)光到最大值所用時(shí)間約為0.25 s，經(jīng)過10 s回到基線完成整個(gè)發(fā)光過程。

2.2 反應(yīng)條件的選擇

（1）反應(yīng)介質(zhì)及其濃度的影響

在 Cu（III）絡(luò) 合 物（1.36×10-4mol／L）和CMNX （5.00×10-7g／mL）濃度不變的條件下，分別對相同濃度的硫酸、磷酸、鹽酸、硝酸反應(yīng)介質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在硫酸介質(zhì)中發(fā)光強(qiáng)度最大。考察了硫酸在0.01～0.1 mol／L濃度范圍內(nèi)對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，硫酸濃度為0.02 mol／L時(shí)，體系達(dá)到最大發(fā)光強(qiáng)度，故選擇該濃度為實(shí)驗(yàn)最佳濃度。

（2）羅丹明6G濃度對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響

在 Cu（III）絡(luò)合物濃度為1.36×10-4mol／L、硫酸0.02 mol／L、頭孢米諾鈉濃度為5.00×10-7g／mL的條件下，在2×10-6～4×10-5g／mL濃度范圍內(nèi)考察了羅丹明6G濃度對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明當(dāng)羅丹明6G濃度為8×10-6g／mL時(shí)，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度最大。因此實(shí)驗(yàn)選擇羅丹明6G的適宜濃度為 8×10-6g／mL。

（3）［Cu（HIO6）2］5-對化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響

以0.02 mol／L硫酸為反應(yīng)介質(zhì)，頭孢米諾鈉和羅丹明6G濃度分別為5.00×10-7g／mL和8.00×10-6g／mL，考察了［Cu（HIO6）2］5-在2.23×10-5～1.81×10-4mol／L 濃度范圍內(nèi)對化學(xué)發(fā)光信號的影響。結(jié)果表明，［Cu（HIO6）2］5-濃度為8.46×10-5mol／L時(shí)，發(fā)光強(qiáng)度最大。因此選擇［Cu（HIO6）2］5-的最佳濃度為 8.46×10-5mol／L。

2.3 校準(zhǔn)曲線方程及檢出限

在選定的實(shí)驗(yàn)條件下，頭孢米諾鈉在2.0×10-7～6.0×10-6g／mL濃度范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。其回歸方程為ΔI=91.368 34+0.346 77c，線性相關(guān)系數(shù)r＝0.999 69。按照IUPAC建議方法計(jì)算檢出限為1.4×10-7g／mL。

2.4 干擾試驗(yàn)

在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，對4.0×10-7g／mL的頭孢米諾進(jìn)行了干擾試驗(yàn)。相對誤差在±5%以內(nèi)時(shí)，共存物質(zhì)的允許限度：100倍淀粉、糊精，50倍乳糖、聚乙二醇，25 倍蔗糖、Zn2+、Mg2+、Cu2+，5 倍 D-半乳糖、抗壞血酸，2 倍苯甲酸鈉、葡萄糖、Fe2+、Br-，同倍量的檸檬酸、Ni2+、Ba2+、I-均不產(chǎn)生干擾。由于樣品中這些物質(zhì)的實(shí)際含量均低于允許量，因此無需分離或掩蔽即可直接測定。

2.5 精密度試驗(yàn)

對濃度為2×10-7g／mL的頭孢米諾鈉溶液進(jìn)行11次平行測定，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.69%。

2.6 樣品分析及回收試驗(yàn)

（1）針劑中CMNX的測定

取CMNX針劑一瓶（標(biāo)示值為0.5 g／瓶），準(zhǔn)確稱量0.05 g藥末后，用水充分溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容至標(biāo)線，此儲備液存于4℃冰箱中，使用時(shí)用水稀釋至1 000倍進(jìn)行測定。同時(shí)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表1。

以紫外分光光度法作為對照試驗(yàn)：配制不同濃度的CMNX標(biāo)準(zhǔn)溶液（2×10-6，4×10-6，5×10-6g／mL），稀釋100倍進(jìn)行紫外吸收測定，結(jié)果見表1。由表1可知，本法測得結(jié)果與紫外分光光度法所測結(jié)果基本吻合。

（2）雞血中CMNX含量及回收率測定

購買一只家養(yǎng)健康母雞，用注射用水溶解3支頭孢米諾鈉針劑（約含1.5 g頭孢米諾鈉），在其大腿外部多點(diǎn)肌肉注射。約1.5 h后在翅膀下靜脈采血于離心管中，加入3 mL 10%三氯乙酸去除蛋白，放入離心機(jī)中以10 000 r／min離心10 min，取上層清液0.2 mL，進(jìn)一步稀釋5 000倍進(jìn)行測定。樣品測定后進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見表2。經(jīng)換算后雞血樣中CMNX含量為2.65×10-3g／mL。

表1 針劑樣品中頭孢米諾鈉的測定及加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 雞血樣中CMNX分析結(jié)果及加標(biāo)回收試驗(yàn)

3 結(jié)語

流動注射技術(shù)與化學(xué)發(fā)光相結(jié)合，集合了FIA及化學(xué)發(fā)光的優(yōu)勢，目前已廣泛用于食品藥品、生物化學(xué)、環(huán)境質(zhì)量檢測。研究表明，基于頭孢米諾鈉對酸性銅（III）配合物-羅丹明6G化學(xué)發(fā)光顯著增強(qiáng)，以此建立的測定頭孢米諾鈉的新方法可應(yīng)用于對針劑和雞血樣中頭孢米諾鈉的分析，分析結(jié)果可靠。

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Determination of Cefminox Sodium by Flow–Injection Chemiluminescence Using Cu(III)Complex–rhodamine 6G System

Wang Juan， Chen Peiyun， Wang Ting
（Hebei University， Baoding 071000， China）

Cefminox sodium can enhance the chemiluminescence of copper(III) complex-rhodamine 6G in acidness medium. So a flow injection chemiluminescence method for quantitative analysis of cefminox sodium was established.Cefminox sodium concentration was linear with luminous intensity in the range of 2.0×10-7-6.0×10-6g/mL. The detection limit was 1.4×10-7g/mL with the correlation coefficient of 0.999 69. The relative standard deviation of cefminox sodium determination results was 1.69%(n=11). The method was applied to determine the cefminox sodium in hen flood and injection solution. The recoveries were 90.2%-102.1%.

cefminox sodium; chemiluminescence; flow injection

O657.75＋5

A

1008-6145(2012)01-0049-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2012.01.015

聯(lián)系人：王娟；E-mail：wjshywjn@126.com

2011-10-27