王建華 ，宮萍 ，田良良 ，王興華 ，楊君 ，王境堂

（1.山東出人境檢驗檢疫局食品農產品檢測中心，山東青島 266002； 2.中國海洋大學食品科學與工程學院，山東青島 266003； 3.青島大學，山東青島 266071）

同位素稀釋氣相色譜串聯(lián)質譜法測定海產品中的苯并(a)芘的殘留量*

王建華1，宮萍1，田良良2，王興華1，楊君3，王境堂1

（1.山東出人境檢驗檢疫局食品農產品檢測中心，山東青島 266002； 2.中國海洋大學食品科學與工程學院，山東青島 266003； 3.青島大學，山東青島 266071）

采用同位素稀釋法結合固相萃取凈化，建立了海產品中苯并(a)芘殘留的氣相色譜串聯(lián)質譜(GC-MS／MS)檢測方法。樣品經乙腈-丙酮（體積比6∶4）溶液提取，硅膠固相萃取凈化，苯并(a)芘用GC-MS／MS測定，同位素D12-苯并芘內標法定量。方法的平均回收率為93%～98%，相對標準偏差為6.2%～12.2%(n=6)，定量限為0.2μg／kg。用該方法測定FAPAS煙熏魚有證標準樣品，測定值與標準值一致。

氣相色譜-串聯(lián)質譜；苯并(a)芘；海產品；同位素稀釋

多環(huán)芳烴是一類環(huán)境污染物，通過環(huán)境介質進入生物體內［1］，其中苯并(a)芘(BAP)是其中的代表物質，許多國家或地區(qū)對其有嚴格的限量規(guī)定。2011年6月中國渤海中南部海域的蓬萊19-3油氣田發(fā)生漏油事件后，引起國內外的高度關注。石油中含有苯并(a)芘，為此，7月韓國農林水產省向各檢驗檢疫所緊急下達了蛤蜊、安康魚、章魚、梭子蟹等中國進口的此水域水產品中苯并(a)芘的檢測計劃，并且通報中國，因此，我國亟需開展常規(guī)檢測方法研究。韓國的標準中魚類苯并(a)芘含量需低于2.0 μg／kg，蛤蜊需低于 10.0 μg／kg，軟體和甲殼類需低于5.0 μg／kg。對于水產品中苯并(a)芘，歐盟指令1881／2006 EC規(guī)定限量分別為2 μg／kg，煙熏水產品為 5 μg／kg［2］，中國 GB 2762-2005《食品污染物限量》規(guī)定的限量為10.0 μg／kg。

有關水（海）產品中苯并(a)芘或多環(huán)芳烴測定方法主要有高效液相色譜熒光法［3-5］，氣相色譜-質譜法［6-9］，氣相色譜-高分辨質譜法［10］。

筆者通過條件優(yōu)化后選擇乙腈-丙酮溶液提取海產品中苯并(a)芘，硅膠柱凈化；采用GC-MS／MS測定保證了定性結果的可靠性并提高了靈敏度；通過添加同位素到樣品中作為分析質量控制和定量測定的手段，保證了定量結果的可靠性。應用于FAPAS煙熏魚有證標準樣品測定，測定值與標準值一致。該方法簡便、快速，準確,已用于海產品中苯并(a)芘常規(guī)檢測。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

三重四級桿氣相色譜質譜儀：TSQ QuantumGC型，帶電子轟擊電離源（EI），美國 Thermofisher公司；

水平震蕩器：HS501型，德國IKA公司；

旋轉蒸發(fā)儀：BUCHI R-200型，瑞士Buchi公司；

苯并(a)芘標準溶液：1 mg／mL，0～4℃避光保存，德國Dr.Ehrenstorfer公司；

D12-苯并芘：純度大于99%，德國Dr.Ehrenstorfer公司；

硅膠固相萃取柱：agela cleanert silica-SPE(1000 mg，6 mL)，天津博納艾杰爾公司；

乙腈、丙酮、環(huán)己烷：HPLC級；

氯化鈉：分析純。

1.2 GC-MS／MS分析條件

（1）色譜條件

色 譜 柱：HP-5MS柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；溫度程序：70℃（2 min），以25℃／min升溫至140℃，以10℃／min升溫至240℃，然后再以5℃／min升溫至300℃（5 min）；載氣：He，純度不小于99.999%，流速為1 mL／min；進樣口溫度：270℃。

（2）質譜條件

傳輸線溫度：280℃；離子源溫度：250℃，Q2碰撞氣：氬氣；無分流進樣，1 min后打開分流閥；進樣量：1.0 μL；離子化模式：CEI，正離子掃描；檢測方式：選擇反應監(jiān)測（SRM）；溶劑延遲：5 min。

1.3 實驗方法

將海產品去殼，去骨，取可食用的部分絞碎均勻。稱取4 g絞碎后的樣品，加入400 μL內標D12-苯并芘，加入20 mL乙腈-丙酮（體積比6∶4）均質 2 min，用10 mL乙腈-丙酮（體積比6∶4）清洗均質機后合并入相應的提取離心管中，震蕩10 min，加入過量的氯化鈉，以5 000 r／min離心10 min，將15 mL上清轉移入干凈的離心管中，-70℃靜置20 min，將上清轉移入梨形瓶，40℃水浴旋轉蒸發(fā)至近干，氮氣吹干，以2 mL環(huán)己烷溶解。

Silica SPE柱預先用5 mL環(huán)己烷活化，將樣品過柱，收集過柱液，梨形瓶中加入5 mL環(huán)己烷清洗過SPE柱，另外用15 mL環(huán)己烷淋洗SPE柱，合并所有過柱液，40℃水浴旋轉蒸發(fā)至近干，氮氣吹干，用1 mL環(huán)己烷定容，轉移入樣品瓶，供GC-MS／MS測定。

2 結果與討論

2.1 樣品前處理優(yōu)化

水產品中樣品前處理方法包括：皂化后，正己烷或環(huán)己烷提取，硅膠或 florisil固相萃取柱凈化［3-5，8］；章汝平等［9］采用正己烷-二氯甲烷索氏提取后，硅膠凈化；Jalal Hassan etal［7］采用乙腈均質提取，GPC 凈化。

文獻［11］選擇用乙腈-丙酮(60∶40)混合溶液作為溶劑均質提取。經過實驗，選擇硅膠固相萃取柱作為凈化柱，環(huán)己烷為洗脫劑。凈化前鹽漬蛤蜊提取液呈深黃色，凈化后定容溶液呈淡黃色。

2.2 質譜條件優(yōu)化

GC-MS／MS在SRM檢測模式下具有很好的選擇性和專屬性，已經用于農殘等的分析［13］。質譜條件優(yōu)化首先用進標準溶液進行全掃描分析，獲得保留時間[苯并(a)芘22.62 min，D12-苯并芘22.54 min]和一級質譜圖，選擇其中豐度比高的母離子做子離子掃描，得到二級質譜。苯并(a)芘和D12-苯并芘，在全離子掃描模式下分別得到豐度最高的分子離子m／z252、264，對其進行子離子掃描，按照歐盟指令［13］，對于 GC-MS／MS，一個母離子，2個子離子4個識別點滿足定性要求，監(jiān)測離子對及豐度比：m／z252／250(100)、m／z252／226(6.5)，同位素D12-苯并芘得到離子對：m／z264／260(100)、m／z260／232(23)，260／236(3)，優(yōu)化后的碰撞能量為40，獲得m／z較大且豐度最大的子離子對252／250和264／260為定量離子對。各離子對駐留時間均為 100 ms。改變掃描寬度（m／z）0.02，0.05，1.00，根據(jù)信噪比選擇0.02最佳。改變掃描時間分別為0.02，0.05，0.08，1 s，信噪比逐漸增大，考慮到峰形，選擇最佳掃描時間為0.08 s。

2.3 方法學的參數(shù)

GC-MS／MS法：分別配制濃度為0.2～20 ng／mL 9個水平的苯并(a)芘和等濃度的D12-苯并芘標準溶液，進樣測定。以苯并(a)芘與內標的定量離子對色譜峰面積比(Y)為縱坐標，標準溶液濃度（X)為橫坐標進行線性回歸。苯并(a)芘在相當于0.1～10 μg／kg范圍內符合線性關系，線性方程為Y=0.418X-0.052 3，相關系數(shù)r2=0.999。進樣0.4 ng

／mL(0.2 μg／kg)時，信噪比S／N大于 10，規(guī)定GC-MS／MS法的定量限(LOQ)為0.2 μg／kg。

采用本方法對章魚、蛤蜊和安康魚陰性樣品中苯并(a)芘添加兩水平進行6次分析，內標法定量。方法的回收率和相對標準偏差見表1。

表1 回收率和精密度試驗結果（n=6）

2.4 實際樣品檢測

為了進一步驗證方法的準確度，采用用本方法對在有效期內的FAPAS煙熏魚醬T0642有證標準樣品［14］進行了檢測，測定結果見表2。由表2可以看出，測定值與標準值一致，進一步證明所建立的方法可靠。

表2 FAPAS 樣品的分析結果

3 結語

采用SPE結合GC-MS／MS檢測海產品中苯并(a)芘，靈敏度和準確度滿足殘留檢測的要求，可以用于不同種類的海產品中苯并(a)芘檢測。

［1］趙文昌，程金平，謝海，等.環(huán)境中多環(huán)芳烴(PAHs)的來源與監(jiān)測分析方法［J］.環(huán)境科學與技術，2006，29(3): 105-107.

［2］COMMISSION REGULATION (EC)No 1881／2006 of 19 December 2006 Setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs［S］.

［3］SC／T 3041-2008 水產品中苯并(a)芘的測定 高效液相色譜法［S］.

［4］黃鸞玉，黎小正，秦振發(fā).固相萃?。咝б合嗌V熒光法測定水產品中苯并(a)芘［J］.分析試驗室，2009，28(12): 63-65.

［5］Pena T，Pensado L，Casais C，et al. Optimization of a microwaveassisted extraction method for the analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons from fish samples［J］.J Chromatogr A，2006，1121(2): 163-169

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［8］楊家鋒，鐘惠英，段青源.氣相色譜-質譜聯(lián)用法測定水產品中 16種多環(huán)芳烴［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19(10):2 291-2 295.

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［10］湯樺，陳大舟，吳雪，等.同位素稀釋高分辨質譜法測定魚組織中6種多環(huán)芳烴［J］.質譜學報，2010，31(4): 208-213.

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［12］李南，石志紅，龐國芳，等.堅果中185種農藥殘留的氣相色譜-串聯(lián)質譜法測定［J］.分析測試學報，2011，30(5): 513-521.

［13］2002／657／(EC): EU Commission decision of 12 August 2002 implementing council directive 96／23／EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results(Text with EEA relevance)(notified under document number C(2002)3044).Official Journal of the European Communities L 221，17／08／2002.

Determination of Benzo(a)pyrene in Seafood by Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry with Isotope Dilution

Wang JianHua1， Gong Ping1， Tian Liangliang2， Wang Xinghua1, Yang Jun3， Wang Jingtang
(1. Shandong Exit & Entry Inspection and Quarantine Bureau， Qingdao 266002， China ； 2. Ocean University of China，Qingdao 266002， China；3. Qingdao University， Qingdao 266071， China)

An analytical method for the determination of Benzo(a)pyrene in seafood was developed by isotope dilution gas chromatography tandem mass spectrometry(GC-MS／MS). Sample was extracted by using acetonitrileacetone mixture as solvent，purged by silica solid phase extraction column and analyzed by GC-MS／MS under selective reaction monitoring mode. Three deuterated surrogate standards Benzo(a)pyrene-D12 were used as internal standards for quantification and analytical quality control. The limit of quantification(LOQs) was 0.2 μg／kg，the recoveries ranged from 93% to 98%， and the relative standard deviations were 6.2%-12.2%(n=6). The method was used to determine the quality control materials T0642 provided by the FAPAS and the results were consistent with standard values.

gas chromatography-tandem mass spectrometry; benzo(a)pyrene; seafood; isotope dilution

O657.7+1

A

1008-6145(2012)01-0024-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2012.01.007

*國家質檢總局科技計劃項目（2011IK222）

聯(lián)系人：王建華；E-mail: whywrs@yahoo.com.cn

2011-11-08