彭 艷，何援利

(南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣州 510282)

子宮內(nèi)膜異位癥是指有生長功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔被覆黏膜以外的身體其他部位的疾病。臨床癥狀可表現(xiàn)為盆腔痛、月經(jīng)失調(diào)、不孕、盆腔包塊等[1]，在育齡婦女中發(fā)病率高達10%～15%[2]，嚴重困擾著廣大婦女的身心健康。目前子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制仍不清楚，藥物和手術治療后的復發(fā)率較高，治療效果不理想。子宮內(nèi)膜異位癥動物模型是研究內(nèi)異癥發(fā)病機制、治療方法的主要途徑，所以建立子宮內(nèi)膜異位癥動物模型，為進一步研究內(nèi)異癥的發(fā)病機制、治療方法等奠定基礎，有著深遠的研究意義[3]。目前國內(nèi)外已有相關的造模方法，但是造模方法和成功率存在差異。因此，本研究旨在探索一種操作簡便而且成模率高的子宮內(nèi)膜異位癥動物模型的建模方法。

1 材料與方法

1.1材料 (1)實驗動物：性成熟雌性Wistar大鼠15只，體質量150～200 g，標準光照周期(14 h白光，10 h黑夜)，室內(nèi)溫度(20±2)℃、濕度40%～50%、標準飼料和水。(2)實驗器械及藥品：普通手術器械及眼科剪；3.6%的水合氯醛、氨芐西林及常規(guī)消毒藥品等。

1.2方法

1.2.1手術方法 經(jīng)陰道涂片檢查，在大鼠動情周期的動情期進行手術造模。根據(jù)楊萍等[4]手術在室溫28～32 ℃環(huán)境下進行，無菌操作，以3.6%的水合氯醛10 mL/kg進行腹腔注射麻醉。腹部備皮，常規(guī)消毒后取大鼠下腹正中、恥骨聯(lián)合上1 cm切口(長2～3 cm)，進腹后在膀胱背側找到子宮。近端離右側子宮角1 cm處結扎，遠端離卵巢1 cm處結扎。將切下的子宮組織放入盛有無菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中縱向剖開。將子宮內(nèi)膜與肌層分離(部分子宮內(nèi)膜較薄、與肌層粘連緊密者，內(nèi)膜與肌層不分離，只剝?nèi){膜層)，剪取3塊3 mm×5 mm的內(nèi)膜，分別進行腹腔種植、皮下移植和皮下注射法進行子宮內(nèi)膜異位移植建模。(1)腹腔種植法：將1塊內(nèi)膜組織用5-0絲線縫1針固定在左側遠離腹部切口的腹壁上。(2)皮下移植法：在腹壁切口右側從腹肌與皮下筋膜層之間打隧道，以正好能置入子宮內(nèi)膜片為宜，取1塊子宮內(nèi)膜組織平整的置人右側隧道底部。(3)皮下注射法：取1塊內(nèi)膜組織修剪成0.5 mm×0.5 mm×0.5 mm大小的內(nèi)膜碎片，用9號頭皮針頭連接1 mL注射器吸取含內(nèi)膜碎屑的生理鹽水，在盡量遠離腹壁切口處皮下注射。0號絲線分層縫合腹部切口，常規(guī)關腹。術畢肌內(nèi)注射16萬u/kg氨芐西林。術后正常喂養(yǎng)，觀察大鼠傷口及生活情況。

1.2.2觀察指標 4周后再次剖腹觀察移植物生長狀況，同時切取移植物送病檢。根據(jù)子宮內(nèi)膜異位癥病理診斷標準，鏡下出現(xiàn)子宮內(nèi)膜、腺體或腺體樣結構、間質和出血這4種改變中的2種可確診造模成功。觀察腹腔種植、皮下移植和皮下注射法的成模情況。游標卡尺測量內(nèi)膜異位癥病灶的長、高和寬，計算病灶體積(V)=0.52×長×寬×高[5]。比較3處病灶的成模率及病灶體積大小。取異位內(nèi)膜病灶和左側未行手術的在位內(nèi)膜標本置于4%多聚甲醛固定24 h常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片厚3 μm，HE染色觀察組織病理學變化。

2 結 果

2.1成模情況 造模大鼠15只，均存活。異位病灶組織形態(tài)相似，外觀表現(xiàn)為體積增大，呈透明的囊狀，質地軟，囊內(nèi)有清亮的液體積聚。在腹腔種植處15只大鼠均可見異位病灶，呈單個圓形，表面與大網(wǎng)膜粘連包裹(封3圖1a)。在皮下移植處14只大鼠可見異位病灶，經(jīng)皮膚均可觸及，呈單個球型突起，表面被結締組織覆蓋并有血管形成(封3圖1b)。在皮下注射處13只大鼠可見異位病灶，經(jīng)皮膚均可觸及，呈單個橢圓形或圓形突起，表面被結締組織覆蓋并有血管形成，其內(nèi)可見1～3個清亮小水泡黏附聚集生長(封3圖1c)。腹腔種植、皮下移植和皮下注射法的造模成功率分別為100%、93.3%和86.7%，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.343)。

2.23種建模方法的異位病灶體積比較 造模4周后3種造模方法的異位病灶體積大小差異無統(tǒng)計學意義(P=0.09)。見表1。

表1 3種方法造模病灶體積比較

2.3組織學光鏡檢查 3種造模方法異位病灶顯微鏡下形態(tài)相似。異位病灶生長成1個或數(shù)個腔樣結構，可見腺上皮及間質細胞生長并見腺體形成，腔內(nèi)壁所襯的上皮細胞層以柱狀上皮或立方狀細胞形成環(huán)形或鋸齒狀生長，部分上皮細胞可見核下空泡。腺體結構與大鼠正常子宮內(nèi)膜腺體結構相似，見封3圖2。

3 討 論

自1860年首次報道子宮內(nèi)膜異位癥以來，其發(fā)病機制至今尚未完全明了。建立理想的動物模型模擬人類子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥，才能有助于研究子宮內(nèi)膜異位癥的病因、發(fā)病機制、治療及預防對策。子宮內(nèi)膜異位癥常用的動物模型有猴、狒狒、大鼠等。猴和狒狒像人一樣有月經(jīng)，是最理想的動物模型，但是價格昂貴、飼養(yǎng)復雜，限制其在實驗室廣泛使用。大鼠在研究子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制和治療方面運用最多最廣[6-7]。大鼠雖無月經(jīng)，但其動情周期與人月經(jīng)周期相似，有一定規(guī)律性。利用陰道涂片觀察其動情期，在大鼠動情期制作子宮內(nèi)膜異位癥模型，造模成功率高，模型使用可靠。本實驗在動情期造模，子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率達到86.7%～100%。

手術移植法是建立子宮內(nèi)膜異位癥動物模型的主要方法[1]。經(jīng)典的子宮內(nèi)膜異位癥造模方法為將大鼠自體子宮內(nèi)膜手術移植至腹腔內(nèi)單一部位，如縫合于腹壁、卵巢表面、子宮直腸陷凹[8]。亦有報道將子宮內(nèi)膜組織移植于皮下(腹肌與皮下筋膜層之間)，造模成功率與腹腔種植無差異，有內(nèi)膜固定好，免去手術縫合，操作簡單等優(yōu)點[9-11]。亦有報道皮下注射法造模成功率高于皮下移植法[12]。但是王寧寧等[13]報道皮下移植法和皮下注射法在造模成功率和病灶體積無差異。本實驗比較腹腔種植、皮下移植和皮下注射3種方法的子宮內(nèi)膜異位癥造模成功率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。種植物組織形態(tài)相似，體積大小無明顯差異。因此，3種造模方法均可以較好的建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型。相對于腹腔種植法，皮下移植法無需縫合子宮內(nèi)膜組織，符合自然黏附原則，避免縫線的異物刺激改變子宮內(nèi)膜異位癥病灶周圍的微環(huán)境，并且病灶位于皮下，觀察直觀，可進行動態(tài)觀察，更適用于子宮內(nèi)膜異位癥病灶的連續(xù)性觀測及治療研究。相對于皮下注射法，皮下移植法無需將內(nèi)膜組織修剪成小碎片，操作簡單快速，造模成功率無差異。

綜上所述，3種方法均可以建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，但皮下種植法操作簡單，觀察直觀，便于動態(tài)觀察和連續(xù)性實驗研究。

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